密度梯度離心是基于差速超高速離心的改良技術(shù)。該方法需預先利用常用的梯度液介質(zhì)如蔗糖、碘克沙醇和氯化銫等，在離心管中構(gòu)筑從底部到頂部密度逐漸降低的密度梯度帶。根據(jù)密度梯度構(gòu)建和沉降方式的不同,又可以分為速率區(qū)帶離心法和等密度梯度離心法,前者主要根據(jù)顆粒的沉降速率分離,介質(zhì)密度均小于外泌體密度,離心時樣品在向超速離心管底部移動時,會通過密度不斷增加的密度梯度區(qū)帶,密度大的顆粒更容易穿過密度更高的梯度層,更快地到達管底,因此控制離心的時間很重要;等密度梯度離心法中的密度梯度區(qū)帶,則會根據(jù)樣品液中各種溶質(zhì)成分來進行組合,離心過程中,無論離心時間多久,不同密度顆粒jin會富集到具有相同密度的梯度區(qū)帶,而不會沉淀到底部。外泌體具有檢測包括病癥在內(nèi)的許多病理狀況的潛力，可用于對心血管疾病和病癥等多種疾病的診斷和監(jiān)測。山東唾液外泌體

外泌體富含蛋白質(zhì)、脂質(zhì)和核酸分子，這些分子具有來源細胞的特異性，所以通過分析中流細胞所釋放的外泌體分子特征就可部分反映其來源細胞表型及其生物學作用?，F(xiàn)已發(fā)現(xiàn)多種中流外泌體來源的蛋白類分子標志物。例如，乳腺ai、結(jié)腸ai和胰腺ai中均可檢測到磷脂酰肌醇蛋白聚糖1（glypican1，GPC1）的表達，且與乳腺ai和結(jié)腸ai相比，GPC1對胰腺ai的早期診斷尤具價值。前列腺ai患者血漿外泌體中凋亡抑制蛋白的表達增高則提示與中流進展相關(guān)。隨著蛋白組學技術(shù)的發(fā)展，研究發(fā)現(xiàn)中流患者血液外泌體來源的蛋白標志物其診斷特異性和敏感性分別可達到95％和90％。高博 宇玫博因外泌體內(nèi)含mRNA、microRNA等核酸和蛋白質(zhì)對相鄰細胞具有交換信息的功能。

中流細胞分泌的外泌體可以通過體液進入特定qi官，建立有利于ai細胞生長的微環(huán)境，包括促進受體細胞上皮細胞-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化、引發(fā)炎癥、促進血管生成，為ai細胞的擴散形成有利條件。進一步研究發(fā)現(xiàn)中流細胞外泌體能夠引導ai癥轉(zhuǎn)移至特定qi官，在膜表面特異性整合素的作用下，中流細胞外泌體首先在特定的qi官累積，引起受體qi官產(chǎn)生炎癥、生成血管，形成有利于中流轉(zhuǎn)移的微環(huán)境，使得中流細胞更容易轉(zhuǎn)移至該qi官。Maji等揭示了惡性中流細胞外泌體中的AnnexinⅡ蛋白能夠促進血管生成，為中流轉(zhuǎn)移創(chuàng)造有利的微環(huán)境。

瘤轉(zhuǎn)移是病癥致死的首要原因。長久以來，對瘤轉(zhuǎn)移機理的研究一直聚焦于瘤與機體之間的相互作用。然而在近年來，由于外泌體被發(fā)現(xiàn)可以作為包括瘤在內(nèi)細胞之間信息傳遞的一種新方式，瘤轉(zhuǎn)移研究領(lǐng)域再度變得火熱起來。我所（瘤轉(zhuǎn)移的預警和預防研究所）以謝曉東博士為首的外泌體研究小組一直致力于研究瘤轉(zhuǎn)移與外泌體之間的聯(lián)系，已取得一系列成果。外泌體是指包含了復雜RNA和蛋白質(zhì)的小膜泡(30-150nm)，現(xiàn)今，其特指直徑在40-100nm的盤狀囊泡。多種細胞在正常及病理狀態(tài)下均可分泌外泌體。其主要來源于細胞內(nèi)內(nèi)溶酶體微粒內(nèi)陷形成的多囊泡體，經(jīng)多囊泡體外膜與細胞膜融合后釋放到胞外基質(zhì)中。隨著外泌體的功能逐漸被發(fā)現(xiàn)，近年來，應用這些功能的醫(yī)治法也在被開發(fā)出來。

外泌體mirRNA和蛋白質(zhì)被認為是NSCLC的預后因子。Dejima等在研究NSCLC患者預后的生物標志物時發(fā)現(xiàn)，外泌體miR-4257和miR-21的含量顯著上升。此外，還有研究表明，低水平miR-146a-5p的NSCLC患者較高水平miR-146a-5p的NSCLC患者有更高的復發(fā)率。Sandfeld-Paulsen等在研究276例NSCLC患者血漿的外泌體時發(fā)現(xiàn)，NY-ESO-1是單獨對低生存率有顯著影響的標志物。Silva等利用TaqMan低密度芯片的方法系統(tǒng)分析了28位NSCLC患者體內(nèi)的365種miRNA，其中l(wèi)et-7f、miR-30e-3p和miR-20b表達均下調(diào)，進一步研究發(fā)現(xiàn)，let-7f和miR-30e-3p水平可以區(qū)分早期和晚期NSCLC患者，高水平let-7f和miR-30e-3p與不良預后密切相關(guān)。外泌體膜蛋白可以與靶細胞膜蛋白結(jié)合，進而喚醒靶細胞細胞內(nèi)的信號通路。外泌體的研究進展

外泌體在化療藥物的促轉(zhuǎn)移過程中具有重要的作用。山東唾液外泌體

與正常細胞相比，中流細胞外泌體的分泌量增多，內(nèi)容物也存在明顯差異。由于囊泡結(jié)構(gòu)的保護，中流細胞來源的外泌體內(nèi)攜帶有大量中流細胞來源的活性生物分子，其特點包括:(1)提供具有穩(wěn)定構(gòu)象的蛋白質(zhì)分子;(2)保持蛋白質(zhì)的生物活性;(3)攜帶其中的生物分子經(jīng)體液運輸至遠端qi官;(4)膜融合的作用方式使得中流細胞來源的外泌體能夠與靶細胞之間進行更有效的信息交流。外泌體介導中流轉(zhuǎn)移:體外研究和體內(nèi)成像實驗表明惡性中流細胞產(chǎn)生的外泌體可以在全身水平上被同一中流或遠端中流中惡性程度較低的ai細胞攝入，其內(nèi)所包含的與轉(zhuǎn)移相關(guān)的mRNAs進入轉(zhuǎn)移性較低的細胞后，能夠增強其轉(zhuǎn)移能力。山東唾液外泌體