糖原染色在使用過程中需要注意以下幾個方面:盡可能選取小塊新鮮組織及時固定。糖原易溶于水,在酶的作用下很容易分解葡萄糖,更易溶于水,固定之前決不能用水或生理鹽水等浸洗。應避免用水溶性固定液,宜采用酒精性固定液,如Carnoy液,能較好地保存糖原,但有使糖原流動到細胞一側的現(xiàn)象,多數(shù)人認為是由于固定劑把細胞內的糖原推向固定劑對組織浸透的方向而造成。其他組織應用中性福爾馬林固定為佳。組織在4℃左右溫度內固定與保存,是針對糖的性質和避免糖原溶于水而采取的相應措施。乙醇能沉淀白蛋白、球蛋白,亦能**白和糖原沉淀,但仍可溶于水,因此較好不單獨使用乙醇固定,以乙醇為溶劑的混合固定液固定為佳切取材料時刀要銳利,避免因擠壓細胞使其受到損傷。正規(guī)糖原染色試劑盒服務電話
醫(yī)院檢驗中心糖原染色操作規(guī)程:1.雪夫氏試劑:400m1蒸餾水煮沸除去C02,逐漸加堿性品紅2.08溶解后,待冷卻至60℃,加1mm01兒HCl40ml,再加偏重亞硫酸鈉(NaHSO:)4g,次日加活性碳1.5g,放置半天后過濾。配好后液體為無色透明,保存于4℃冰箱中。2.過碘酸作用液:過碘酸1g溶于蒸餾水100ml中,或取過碘酸鉀(1tI04)0。698加蒸餾水100ml,微加熱使溶解,再加濃硝酸0.3m1,置冰箱中保存。3.固定液:95%乙醇90ml與甲醛10m1混勻。4.20g/l甲基綠:甲基綠2g溶于100m1蒸餾水。[操作]_x005f_x000c_(1)新鮮或陳舊血片、骨髓片于固定液內10分鐘。(2)水洗數(shù)次后,對照片先用唾液消化30分鐘,也可在同一片,在其中間用蠟筆劃界,一半做對照,另一半做測定。(3)水洗后,滴加過碘酸數(shù)滴于涂片上,作用10分鐘后,再水洗數(shù)次。湖南咨詢糖原染色試劑盒哪里買常需要分別選用相應的顯示這些成分的染色方法進行特殊染色。
糖原及粘液染色法注意事項:1、糖原的固定要及時,而且標本要新鮮。2、如用無水酒精作糖原的固定劑,有它的弊病,因無水酒精滲透較慢,而且容易產生極化,(極化是糖原顆粒趨向于細胞的一端)。故用Gendre氏固定液效果較佳,其配法如下:苦味酸飽和于95%酒精85ml40%甲醛10ml冰醋酸5ml3、各種試劑必須化學純,亞硫酸鈉須有濃厚氣味,器皿必須潔凈而干燥,染色缸亦是。4、如果Schiff氏試劑,在經(jīng)過活性碳吸附漂白后不顯無色,首先應考慮試劑中的偏重亞硫酸鈉是否失效。如果偏重亞硫酸鈉氣味不濃,使用時可考慮適當?shù)脑黾佑昧?。其次考慮堿性品紅本身,常常雖屬同一生產廠家,但不同批號,其效果就可能不同,應特別引起注意
PAS染色試劑配制及染色方法:1.材料與方1.1實驗材料新鮮小白鼠肝臟、腎臟標本各30例,均來自我室實驗材料。1.2主要試劑1.2.1AAF固定液又稱酒精醋酸福爾馬林混合固定液,其配方:無水乙醇80mL,冰醋酸5mL、甲醛10mL。1.2.2Carnoy固定液氯仿300mL,冰醋酸100mL,95%酒精600mL。1.2.3過碘酸溶液0.5g過碘酸(HIO)溶于100mL蒸餾水或者70%酒精溶液中,或者按如下配方配制:過碘酸0.8g,95%乙醇70mL,醋酸鈉0.27g,水20mL。待溶解后置于4℃冰箱避光保存。1.2.4無色品紅液(Schiff氏液)在三角燒內加入蒸餾水500mL,煮沸后,在保持微沸的情況下,加入堿性品紅2.5g,并不斷搖動約5min(勿使之沸騰),使堿性品紅徹底溶解(溶解液為深紅色)。冷卻到50℃時,過濾,加入1N鹽酸50mL,再待冷卻至25℃時加入偏重亞硫酸鈉2.5g,塞住瓶口,搖動容器以充分混合(此時顏色明顯變淡),然后避光放置或冰箱內24h糖原染色顯示在肝或心肌細胞內有大量糖原存在即可確診.。
糖原染色在使用過程中需要注意以下幾個方面:PAS染色時需于暗處加蓋反應,染色時間10~20min(染色時間長短取決于試劑的質量和環(huán)境溫度,SO濃度高,染色時間適當縮短;環(huán)境溫度高,染色時間也應適當縮短,反之則需適當延長反應時間)。染色過程中不能接觸伊紅,以免造成顏色誤差[4]。作糖原染色時,較好作消化對照,即取兩張連續(xù)切片,其中一張脫蠟至水后,用1%淀粉酶于37℃消化30min,水洗后與不經(jīng)消化處理的切片一起置0.5%高碘酸液氧化,如經(jīng)消化處理的切片染色陰性,不經(jīng)消化處理的切片染色陽性,即肯定為糖原[6]。偏重亞硫酸鈉(鉀)溶液配置后,不能保存,因此,必須現(xiàn)配現(xiàn)用,用過一次即應廢棄。各種試劑必須是化學純或者分析純。器皿、染色缸必須潔凈而干燥。將動物殺死后迅速取出所需要的組織。福建哪家提供糖原染色試劑盒銷售廠家
過碘酸氧化時間不宜過久,氧化時的溫度以18~22℃佳。正規(guī)糖原染色試劑盒服務電話
PAS技術是很少可檢測不同種類的黏液物質(如糖原、黏蛋白和糖蛋白)的方法,但PAS技術卻不能區(qū)別黏蛋白和糖原。若要冸確鑒別黏液物質(如黏蛋白或糖原),需加入糖原消化步驟。大多數(shù)情冴下可用α–淀粉酶或麥芽淀粉酶來催化糖原的糖苷鍵水解,形成水溶性的雙糖-麥芽糖,在應用PAS技術之前將糖原從組織切片上除去。人類的唾液被認為是消化糖原的一種有效手段,但是出于安全以及缺乏標冸唾液的考慮,不主張應用唾液。所以網(wǎng)狀纖維的組織化學染色,在臨床病理診斷上占著相當重要的位置。正規(guī)糖原染色試劑盒服務電話
網(wǎng)狀纖維染色:網(wǎng)狀纖維是非常細而短的纖維,大量堆積時則形成致密的網(wǎng)狀,故有網(wǎng)狀纖維之稱。疏松組織中網(wǎng)狀纖維比較少,它多分布在結締組織與其它組織交界處,如在上皮組織與結締組織交界處的基膜內,血管周圍以及造血部位,內分泌腺的腺細胞團索和外分泌腺的腺末房周圍等處均有豐富的網(wǎng)狀纖維。網(wǎng)狀纖維的變化,反映了疾病的發(fā)生和發(fā)展的不同過程,對疾病的診斷有極大意義。網(wǎng)狀纖維的多少、粗細緊密、疏松或斷裂,都是病理檢驗的重要指標,尤其是在臨床病理診斷中,可根據(jù)其存在和分布來鑒別與肉瘤。而在HE染色標本上,網(wǎng)狀纖維不易顯色。所以網(wǎng)狀纖維的組織化學染色,在臨床病理診斷上占著相當重要的位置亞硫酸鈉須有濃厚氣味,器皿必須潔...