RNA提取試劑的選擇:首先,要確定材料的可用性。盡管現(xiàn)有的RNA提取試劑都用壓制RNase的成分,但提取的材料仍需謹(jǐn)慎處理。提取的材料的新鮮度是獲取完整RNA的關(guān)鍵,但是由于種種原因無(wú)法立即從新鮮材料中提取RNA時(shí),使用Takara公司的樣品保護(hù)劑SampleProtectorforRNA/DNA可以免去使用液氮或超低溫冰箱的不便,同時(shí)也可以有效解決組織、細(xì)胞樣品的短時(shí)間保存及運(yùn)輸問(wèn)題。此外,如果將不同時(shí)期收集的樣品都預(yù)先存放于本試劑中,可以做到立即終止并固定RNA表達(dá)的時(shí)序變化,減少實(shí)驗(yàn)組間的誤差RNA提取試劑注意事項(xiàng):為防止濺入眼睛,請(qǐng)戴防護(hù)眼鏡或使用透明保護(hù)屏。正規(guī)RNA提取試劑生產(chǎn)廠家
石蠟包埋組織RNA快速提取試劑盒(離心柱型):原理簡(jiǎn)介:改進(jìn)的異硫氰酸胍/酚一步法裂解細(xì)胞和滅活RNA酶,然后總RNA在高離序鹽狀態(tài)下選擇性吸附于離心柱內(nèi)硅基質(zhì)膜,再通過(guò)一系列快速的漂洗-離心的步驟,漂洗液將細(xì)胞代謝物、蛋白等雜質(zhì)去除,較后低鹽的RNasefreewater將純凈RNA(RNA)從硅基質(zhì)膜上洗脫。試劑盒特點(diǎn):1、離心吸附柱內(nèi)硅基質(zhì)膜全部采用進(jìn)口世界有名公司特制吸附膜,柱與柱之間吸附量差異極小,可重復(fù)性好??朔藝?guó)產(chǎn)試劑盒膜質(zhì)量不穩(wěn)定的弊端。2、結(jié)合了異硫氰酸胍/酚一步法試劑穩(wěn)定性好,純度高和離心柱方便快捷的優(yōu)點(diǎn),不需要異丙醇沉淀和乙醇洗滌過(guò)程,RNA可以直接從離心柱上洗脫避免了過(guò)度干燥不易溶解問(wèn)題。3、獨(dú)有的MRL裂解液配方,可以有效的消除基因組污染。4、多次漂洗去蛋白過(guò)程,提取RNA純度更高。蕪湖濟(jì)南RNA提取試劑細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核RNA提取試劑盒特點(diǎn):試劑盒可用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞或者組織樣品的提取。
總RNA提取試劑是廣譜型總RNA提取試劑。實(shí)驗(yàn)操作快速方便,顏色鮮明,便于分層。本試劑適用范圍普遍,可以從動(dòng)物組織、植物材料、各種微生物及培養(yǎng)細(xì)胞等樣品中提取總RNA。該方法對(duì)少量的組織(50-100mg)和細(xì)胞(5×106)以及大量的組織(≥1g)和細(xì)胞(>107)均有較好的分離效果。樣品在總RNA提取試劑中被充分裂解的同時(shí)能夠較大限度地保證RNA的完整性。在加入氯仿離心后,溶液會(huì)分成三層:上層無(wú)色水相、中間層和下層紅色有機(jī)相,RNA分布在上清層中。收集上清層后,經(jīng)異丙醇沉淀便可以回收得到總RNA。提取的總RNA完整性好,無(wú)蛋白和DNA污染,可用于各種分子生物學(xué)常規(guī)實(shí)驗(yàn),如RT-PCR、Real-timeRT-PCR、Northernblot、DotBlot、體外翻譯等。
RNA抽取一般使用Trizol法抽提:Trizol是一種總RNA抽提試劑,內(nèi)含異硫氰酸胍等物質(zhì),能迅速裂解細(xì)胞,壓制細(xì)胞釋放出的核酸酶活性。目前常用Trizol法進(jìn)行提取組織或細(xì)胞中的RNA。Trizol作用原理:在勻質(zhì)化或溶解樣品中,Trizol試劑可保持RNA的完整性,同時(shí)能破壞細(xì)胞及溶解細(xì)胞成分。加入氯仿離心后,裂解液分層成水相和有機(jī)相。RNA存在于水相中。水相轉(zhuǎn)移后,RNA通過(guò)異丙醇沉淀回收。移去水相后,用乙醇可從中間相沉淀得到DNA,加入異丙醇沉淀可從有機(jī)相得到蛋白質(zhì)。RNA提取試劑注意事項(xiàng):硫氰酸胍/苯酚法的一種即用的從細(xì)胞和組織中提取總RNA的試劑。
通用多糖多酚植物RNA提取試劑盒自主研發(fā)生產(chǎn),博取眾家之長(zhǎng),根據(jù)多年來(lái)市場(chǎng)反饋不斷進(jìn)行技術(shù)升級(jí)和改良得來(lái)。具有操作步驟少,實(shí)驗(yàn)快捷,RNA產(chǎn)量純度高,充分滿(mǎn)足后續(xù)實(shí)驗(yàn)要求的需要,適用提取樣品普遍等特點(diǎn)。產(chǎn)量:每100mg樣品提取的RNA平均值在20-50ug不等。純度:OD值一般在1.9以上。得到的RNA無(wú)DNA污染,可直接用于反轉(zhuǎn)錄,實(shí)時(shí)熒光定量PCR(尤其對(duì)RNA溶液中DNA非常敏感)等所有后續(xù)實(shí)驗(yàn)。1、快速:多糖多酚植物RNA提取試劑盒提取RNA的整個(gè)實(shí)驗(yàn)操作步驟簡(jiǎn)化快捷從時(shí)間因素考量上較大限度的防止RNA在提取中的降解(一般樣品十多分鐘就能完一個(gè)樣RNA的提取,較大縮短了一般試劑盒提取所需要的半小時(shí)甚至更長(zhǎng)的時(shí)間,)。2、高產(chǎn)量:多糖多酚植物RNA提取試劑盒擁有較強(qiáng)細(xì)胞裂解液,保證后續(xù)RNA提取的得率。(能完全通過(guò)化學(xué)方法徹底裂解細(xì)胞讓RNA釋放完整,并且有效成分能壓制內(nèi)源RNA酶的降解作用)細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核RNA提取試劑盒特點(diǎn):細(xì)胞質(zhì)RNA不含DNA,直接用于RT-PCR/qRT-PCR。蕪湖濟(jì)南RNA提取試劑
植物花總RNA提取試劑盒:采用進(jìn)口硅基質(zhì)膜制作的總RNA吸附柱,配合特殊的提取緩沖液。正規(guī)RNA提取試劑生產(chǎn)廠家
RNA提取試劑的選擇:選擇合適的提取試劑是較重要的一步。好的提取試劑在確保成功的同時(shí),操作方便且經(jīng)濟(jì)實(shí)用。對(duì)于動(dòng)物組織、簡(jiǎn)單的植物材料、各種微生物、培養(yǎng)細(xì)胞的totalRNA提取,Takara公司的RNAisoPlus具有諸多的成功案例。隨著2013年7月柱型提取試劑TaKaRaMiniBESTUniversalTotalRNAExtractionKit的成功上市,進(jìn)一步豐富了TakaraRNA提取的產(chǎn)品線。該產(chǎn)品采用了獨(dú)特的細(xì)胞裂解系統(tǒng),無(wú)需苯酚氯仿抽提等步驟,簡(jiǎn)單快捷。組織或細(xì)胞裂解后,提取操作光需20分鐘便可完成正規(guī)RNA提取試劑生產(chǎn)廠家
總RNA提取試劑試劑能促進(jìn)不同種屬不同分子量大小的多種RNA的析出。例如,從大鼠肝臟抽提的RNA瓊脂糖凝膠電泳并用溴化乙啶染色,可見(jiàn)許多介于7kb和15kb之間不連續(xù)的高分子量條帶(mRNA和hnRNA成分),兩條優(yōu)勢(shì)核糖體~5kb(28S)和~2kb(18S),低分子量RNA介于0.1和0.3kb之間(tRNA,5S)。當(dāng)抽提的RNA用TE稀釋時(shí)其A260/A280比值≥1.8。注意如果是普通瓊脂糖凝膠電泳,28S的位置大約在2kb,18S大約在1kb的位置,不同濃度的凝膠位置變化較大。注意事項(xiàng):樣品用總RNA提取試劑勻漿后,如果不即刻加入氯仿之前,置于-70°C下可放置一個(gè)月以上。保存在7...