細(xì)胞RNA提取的方法:實驗提取步驟:標(biāo)準(zhǔn)Trizol提取步驟為液氮研磨--加入Trizol裂解--加入氯仿抽提--離心--加入氯丙醇沉淀--離心--酒精洗滌--離心。將細(xì)胞培養(yǎng)皿置于冰上,加入Trizol裂解5-10分鐘,用泵頭輕輕吹打后吸取液體放入進(jìn)口EP管中。加入1/5體積的氯仿,上下混勻液體,4度靜置10-15分鐘。(氯仿為有機溶劑,有效的使有機相和無機相迅速分離。有機相中主要是酚和蛋白結(jié)合,從而使得蛋白和RNA脫離,RNA進(jìn)入水相)。4度離心15分鐘,一定注意選擇低溫離心。離心后分成三層,RNA在上清里,從離心機輕輕拿出EP管,以免管內(nèi)物質(zhì)震蕩導(dǎo)致下層沉淀激起。吸取上清的時候一定要動作輕柔,切忌吸取太多,一般吸到400-500ul,避免吸到下層沉淀,將液體置于新的EP管中。加入等體積異丙醇,4度靜置10min,然后12000rpm離心10min。買點無酶的吸頭、離心管,找一個普通的試驗臺,穿好實驗服戴好手套,保護(hù)好自己就好。廈門RNA提取試劑供應(yīng)商
RNA提取試劑的選擇:對于富含多糖多酚的植物類組織提取是個難點,Takara精心研發(fā)的柱型提取試劑TaKaRaMiniBESTPlantRNAExtractionKit可以輕松解決這個問題。TaKaRaMiniBESTPlantRNAExtractionKit可以高效地從各種簡單的植物組織材料(葉片、莖、幼苗等)、富含多糖多酚的植物組織材料(果實、種子等)、菌類提取高純度的TotalRNA,適用范圍普遍。按照標(biāo)準(zhǔn)流程,本試劑盒可以有效地提取分子量大于200nt的RNA,也可以按照可選步驟提取得到包含SmallRNA(<200nt)的TotalRNA。試劑盒中包含了RNA提取所需的全部試劑,無需額外購買其它試劑~徐州廣州RNA提取試劑DNA/RNA Shield 也會保證取樣時微生物基因多樣性不會發(fā)生改變。
酵母總RNA快速提取試劑盒(離心柱型):一、原理簡介。改進(jìn)的異硫氰酸胍/酚一步法裂解細(xì)胞和滅活RNA酶,然后總RNA在高離序鹽狀態(tài)下選擇性吸附于離心柱內(nèi)硅基質(zhì)膜,再通過一系列快速的漂洗-離心的步驟,去蛋白液和漂洗液將細(xì)胞代謝物、蛋白等雜質(zhì)去除,較后低鹽的RNasefreewater將純凈RNA從硅基質(zhì)膜上洗脫。二、試劑盒特點:1、離心吸附柱內(nèi)硅基質(zhì)膜全部采用進(jìn)口世界有名公司特制吸附膜,柱與柱之間吸附量差異極小,可重復(fù)性好??朔藝a(chǎn)試劑盒膜質(zhì)量不穩(wěn)定的弊端。2、結(jié)合了異硫氰酸胍/酚一步法試劑穩(wěn)定性好,純度高和離心柱方便快捷的優(yōu)點,不需要異丙醇沉淀和乙醇洗滌過程,RNA可以直接從離心柱上洗脫避免了過度干燥不易溶解問題。3、獨有的RL裂解液配方,可以有效的消除基因組污染。4、多次漂洗去蛋白過程,提取RNA純度更高。5、有效的去除了無用的5S在總RNA中含量,提高了純度。
在細(xì)胞中,根據(jù)結(jié)構(gòu)功能的不同,RNA主要分三類,即tRNA(轉(zhuǎn)運RNA),rRNA(核糖體RNA),mRNA(信使RNA)。mRNA是合成蛋白質(zhì)的模板,內(nèi)容按照細(xì)胞核中的DNA所轉(zhuǎn)錄;tRNA是mRNA上堿基序列(即遺傳密碼子)的識別者和氨基酸的轉(zhuǎn)運者;rRNA是組成核糖體的組分,是蛋白質(zhì)合成的工作場所。細(xì)胞中還有許多種類和功能不一的小型RNA,像是組成剪接體的snRNA,負(fù)責(zé)rRNA成型的snoRNA,以及參與RNAi作用的miRNA與siRNA等,可調(diào)節(jié)基因表達(dá)。而其他如I、II型內(nèi)含子、RNaseP、HDV、核糖體RNA等等都有催化生化反應(yīng)過程的活性,即具有酶的活性,這類RNA被稱為核酶。在病菌方面,很多病菌只以RNA作為其中的遺傳信息載體(有別于細(xì)胞生物普遍用雙鏈DNA作載體)。RNA提取試劑注意事項:需自備氯仿,異丙醇,DEPC,75%乙醇(DEPC水配制),和DEPC水。
與DNA不同,RNA一般為單鏈長分子,很多RNA也需要通過堿基配對原則形成一定的二級結(jié)構(gòu)乃至三級結(jié)構(gòu)來行使生物學(xué)功能。RNA是以DNA的一條鏈為模板,以堿基互補配對原則,轉(zhuǎn)錄而形成的一條單鏈,主要功能是實現(xiàn)遺傳信息在蛋白質(zhì)上的表達(dá),是遺傳信息向表型轉(zhuǎn)化過程中的橋梁。在此過程中,轉(zhuǎn)運RNA是攜帶與三聯(lián)體密碼子對應(yīng)的氨基酸殘基與正在進(jìn)行翻譯的mRNA結(jié)合,而后核糖體RNA將各個氨基酸殘基通過肽鍵連接成肽鏈進(jìn)而構(gòu)成蛋白質(zhì)分子。有些生物,例如一些病菌,也直接使用RNA作為遺傳信息的載體,而不是DNA。在細(xì)胞中,RNA種類繁多。根據(jù)結(jié)構(gòu)功能的不同,RNA主要分三類,即tRNA、rRNA,以及mRNA。寧波唐山RNA提取試劑
主要取決于離心柱對核酸的吸附能力。廈門RNA提取試劑供應(yīng)商
通用多糖多酚植物RNA提取試劑盒1、高純度:試劑盒的進(jìn)口吸附柱具有的專一吸附特性和強吸附力。三管齊下保證所提取RNA的產(chǎn)量和純度,前期得到的高質(zhì)量RNA才能保證后續(xù)實驗成功,尤其是對熒光定量PCR實驗等。2、無DNA污染可直接用于熒光定量PCR:目前市面上的試劑盒大多提出的RNA會出現(xiàn)DNA污染其結(jié)果嚴(yán)重影響后續(xù)實驗,特別是非常靈敏的熒光定量PCR的實驗。一些市面上單獨賣的去DNA污染的試劑,效果不穩(wěn)定,去除DNA污染不徹底。本產(chǎn)品操作簡單,去除DNA徹底,得到的RNA樣品可直接用于熒光定量PCR,反轉(zhuǎn)錄等各種后續(xù)實驗。廈門RNA提取試劑供應(yīng)商
總RNA提取試劑試劑能促進(jìn)不同種屬不同分子量大小的多種RNA的析出。例如,從大鼠肝臟抽提的RNA瓊脂糖凝膠電泳并用溴化乙啶染色,可見許多介于7kb和15kb之間不連續(xù)的高分子量條帶(mRNA和hnRNA成分),兩條優(yōu)勢核糖體~5kb(28S)和~2kb(18S),低分子量RNA介于0.1和0.3kb之間(tRNA,5S)。當(dāng)抽提的RNA用TE稀釋時其A260/A280比值≥1.8。注意如果是普通瓊脂糖凝膠電泳,28S的位置大約在2kb,18S大約在1kb的位置,不同濃度的凝膠位置變化較大。注意事項:樣品用總RNA提取試劑勻漿后,如果不即刻加入氯仿之前,置于-70°C下可放置一個月以上。保存在7...