與DNA不同,RNA一般為單鏈長分子,不形成雙螺旋結(jié)構(gòu),但是很多RNA也需要通過堿基配對原則形成一定的二級結(jié)構(gòu)乃至三級結(jié)構(gòu)來行使生物學(xué)功能。RNA的堿基配對規(guī)則基本和DNA相同,不過除了A-U、G-C配對外,G-U也可以配對。在細(xì)胞中,根據(jù)結(jié)構(gòu)功能的不同,RNA主要分三類,即tRNA(轉(zhuǎn)運(yùn)RNA),rRNA(核糖體RNA),mRNA(信使RNA)。mRNA是合成蛋白質(zhì)的模板,內(nèi)容按照細(xì)胞核中的DNA所轉(zhuǎn)錄;tRNA是mRNA上堿基序列(即遺傳密碼子)的識別者和氨基酸的轉(zhuǎn)運(yùn)者;rRNA是組成核糖體的組分,是蛋白質(zhì)合成的工作場所。試劑盒中的吸附柱采用特殊的硅基質(zhì)膜材料。昆明RNA提取試劑服務(wù)電話
血漿/血清中miRNA提取試劑盒:是專門針對血清、血漿樣本中miRNA提取而開發(fā)的,利用吸附柱法從血清、血漿樣品中簡單快捷提取高純度高質(zhì)量的miRNA。該試劑盒中的裂解液miRBP1及柱結(jié)合液miRBP2具有高效裂解及提取效果。試劑盒中的吸附柱采用特殊的硅基質(zhì)膜材料,對RNA尤其是smallRNA(<200nt)具有結(jié)合能力,與常用的抗凝劑(包括肝素、EDTA、檸檬酸鈉、草酸鈉)兼容,得到的miRNA可直接用于RT-PCR和Northern雜交等后續(xù)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)操作。普通植物總RNA提取試劑盒:采用進(jìn)口硅基質(zhì)膜制作的總RNA吸附柱,可以從普通植物的根、莖、葉中快速提取總RNA,30~40分鐘內(nèi)即可完成提取過程,提取的總RNA純度高,沒有DNA和蛋白質(zhì)的污染,適用于RT-PCR、qRT-PCR、芯片分析、Northernblot雜交等實(shí)驗(yàn)??俁NA吸附柱保證RNA提取速度快,提取效率高。高效去除植物組織中的色素、酚類等雜質(zhì),提取RNA的純度高,產(chǎn)量大昆明RNA提取試劑服務(wù)電話血漿/血清RNA提取試劑盒:普通植物總RNA提取試劑盒:采用進(jìn)口硅基質(zhì)膜制作的總RNA吸附柱。
血漿/血清中miRNA提取試劑盒:是專門針對血清、血漿樣本中miRNA提取而開發(fā)的,利用吸附柱法從血清、血漿樣品中簡單快捷提取高純度高質(zhì)量的miRNA。該試劑盒中的裂解液miRBP1及柱結(jié)合液miRBP2具有高效裂解及提取效果。試劑盒中的吸附柱采用特殊的硅基質(zhì)膜材料,對RNA尤其是smallRNA(<200nt)具有結(jié)合能力,與常用的抗凝劑(包括肝素、EDTA、檸檬酸鈉、草酸鈉)兼容,得到的miRNA可直接用于RT-PCR和Northern雜交等后續(xù)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)操作。普通植物總RNA提取試劑盒:采用進(jìn)口硅基質(zhì)膜制作的總RNA吸附柱,可以從普通植物的根、莖、葉中快速提取總RNA,30~40分鐘內(nèi)即可完成提取過程,提取的總RNA純度高,沒有DNA和蛋白質(zhì)的污染,適用于RT-PCR、qRT-PCR、芯片分析、Northernblot雜交等實(shí)驗(yàn)??俁NA吸附柱保證RNA提取速度快,提取效率高。高效去除植物組織中的色素、酚類等雜質(zhì),提取RNA的純度高,產(chǎn)量大。
RNA提取試劑的選擇:選擇合適的提取試劑是較重要的一步。好的提取試劑在確保成功的同時(shí),操作方便且經(jīng)濟(jì)實(shí)用。對于動(dòng)物組織、簡單的植物材料、各種微生物、培養(yǎng)細(xì)胞的totalRNA提取,Takara公司的RNAisoPlus具有諸多的成功案例。隨著2013年7月柱型提取試劑TaKaRaMiniBESTUniversalTotalRNAExtractionKit的成功上市,進(jìn)一步豐富了TakaraRNA提取的產(chǎn)品線。該產(chǎn)品采用了獨(dú)特的細(xì)胞裂解系統(tǒng),無需苯酚氯仿抽提等步驟,簡單快捷。組織或細(xì)胞裂解后,提取操作光需20分鐘便可完成買點(diǎn)無酶的吸頭、離心管,找一個(gè)普通的試驗(yàn)臺,穿好實(shí)驗(yàn)服戴好手套,保護(hù)好自己就好。
經(jīng)典Trizol法并不能獲得總RNA:這個(gè)事實(shí)可能會(huì)刷不少新手甚至老手的三觀,但確有實(shí)驗(yàn)支持:經(jīng)典Trizol法會(huì)選擇性丟失低GC比的miRNA。這一點(diǎn),源自一則作者自撤稿的故事。V.NarryKim是韓國鼎鼎大名的美女科學(xué)家,專做RNA相關(guān)的研究,包括miRNA。幾年前她們組發(fā)現(xiàn)一個(gè)奇怪的“現(xiàn)象”,即貼壁細(xì)胞在消化之后,會(huì)有一些miRNA的豐度突然降低,看起來好像是被快速“降解”掉了,并據(jù)此寫了一篇文章發(fā)到MolecularCell上。但很快她們就發(fā)現(xiàn),這個(gè)“現(xiàn)象”難以重復(fù):如果用Trizol做實(shí)驗(yàn),就一定是陽性結(jié)果,而用試劑盒提RNA,就重復(fù)不出來。難道是號稱能提總RNA的Trizol方案出了問題?確實(shí)如此。經(jīng)進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)后發(fā)現(xiàn),經(jīng)典的Trizol方案會(huì)使得低GC比的miRNA丟失。實(shí)驗(yàn)者只需要按照說明書上的步驟操作即可。使用時(shí)無需配制其它試劑,非常方便,適合于RNA的快速提取。蘇州正規(guī)RNA提取試劑廠家現(xiàn)貨
RNA提取試劑注意事項(xiàng):為防止濺入眼睛,請戴防護(hù)眼鏡或使用透明保護(hù)屏。昆明RNA提取試劑服務(wù)電話
DNA和RNA的鑒別染色:利用吖啶橙的變色特性可鑒別DNA和RNA。吖啶橙作為一種熒光染料已被用于染色固定,非固定細(xì)胞核酸,或作溶酶體的一種標(biāo)記。觀察死亡細(xì)胞熒光變色性變化以及區(qū)別分裂細(xì)胞和靜止細(xì)胞群體。雖然測定DNA和RNA含量時(shí)較難獲得好的重復(fù)性結(jié)果,但該方法已被許多實(shí)驗(yàn)室普遍采用。RNA是核糖核酸,DNA是脫氧核酸。區(qū)別:溶解性:都溶于水而不溶于乙醇,因此,常用乙醇來沉淀溶液中的DNA和RNA。DNA溶于苯酚而RNA不溶,故可用苯酚來沉淀RNA。昆明RNA提取試劑服務(wù)電話
總RNA提取試劑試劑能促進(jìn)不同種屬不同分子量大小的多種RNA的析出。例如,從大鼠肝臟抽提的RNA瓊脂糖凝膠電泳并用溴化乙啶染色,可見許多介于7kb和15kb之間不連續(xù)的高分子量條帶(mRNA和hnRNA成分),兩條優(yōu)勢核糖體~5kb(28S)和~2kb(18S),低分子量RNA介于0.1和0.3kb之間(tRNA,5S)。當(dāng)抽提的RNA用TE稀釋時(shí)其A260/A280比值≥1.8。注意如果是普通瓊脂糖凝膠電泳,28S的位置大約在2kb,18S大約在1kb的位置,不同濃度的凝膠位置變化較大。注意事項(xiàng):樣品用總RNA提取試劑勻漿后,如果不即刻加入氯仿之前,置于-70°C下可放置一個(gè)月以上。保存在7...