盡管現(xiàn)有的RNA提取試劑都用壓制RNase的成分，但提取的材料仍需謹(jǐn)慎處理。提取的材料的新鮮度是獲取完整RNA的關(guān)鍵，但是由于種種原因無法立即從新鮮材料中提取RNA時(shí)，使用Takara公司的樣品保護(hù)劑SampleProtectorforRNA/DNA可以免去使用液氮或超低溫冰箱的不便，同時(shí)也可以有效解決組織、細(xì)胞樣品的短時(shí)間保存及運(yùn)輸問題。此外，如果將不同時(shí)期收集的樣品都預(yù)先存放于本試劑中，可以做到立即終止并固定RNA表達(dá)的時(shí)序變化，減少實(shí)驗(yàn)組間的誤差，RNA提取試劑的選擇：首先，要確定材料的可用性。RNA 提取關(guān)鍵點(diǎn)病菌 RNA 在提取后也仍然具有傳染性。珠海正規(guī)RNA提取試劑生產(chǎn)廠家

常用總RNA提取試劑：異硫氰酸胍法和Trizol法是動(dòng)物組織及動(dòng)物細(xì)胞總RNA提取較常用的方法，異硫氰酸胍法操作簡單快捷，適用于樣本足夠大的常規(guī)動(dòng)物組織；Trizol法裂解能力較強(qiáng)，尤其適合小樣本及特別難提取的組織，如兔子皮膚，動(dòng)物結(jié)締組織等總RNA的提??；另外Trizol作為一種通用型的裂解試劑，還可以用于植物組織、細(xì)菌、菌類等組織的提取。對(duì)于含多糖多酚的植物組織如油茶、茶葉、油菜等還可以使用CTAB法進(jìn)行總RNA的提取。提取RNA時(shí)我們經(jīng)常遇到的問題是：(1)RNA產(chǎn)量較低；(2)RNA有嚴(yán)重的鹽類污染；(3)RNA有嚴(yán)重的有機(jī)溶劑污染；(4)樣品降解等問題。正規(guī)RNA提取試劑生產(chǎn)廠家馬鈴薯塊莖，蘋果，西瓜果肉，獼猴桃，梨，月季等，中快速提取總RNA，同時(shí)可以處理大量不同樣品。

RNA提取試劑的選擇：選擇合適的提取試劑是較重要的一步。好的提取試劑在確保成功的同時(shí)，操作方便且經(jīng)濟(jì)實(shí)用。對(duì)于動(dòng)物組織、簡單的植物材料、各種微生物、培養(yǎng)細(xì)胞的totalRNA提取，Takara公司的RNAisoPlus具有諸多的成功案例。隨著2013年7月柱型提取試劑TaKaRaMiniBESTUniversalTotalRNAExtractionKit的成功上市，進(jìn)一步豐富了TakaraRNA提取的產(chǎn)品線。該產(chǎn)品采用了獨(dú)特的細(xì)胞裂解系統(tǒng)，無需苯酚氯仿抽提等步驟，簡單快捷。組織或細(xì)胞裂解后，提取操作光需20分鐘便可完成。

piRNA。是一類長度約為24-31nt的非編碼小RNA，通過特異性地與PIWI蛋白結(jié)合而發(fā)揮生物學(xué)作用?，F(xiàn)已發(fā)現(xiàn)其在生殖干細(xì)胞分化、胚胎發(fā)育、維持基因組完整性、表達(dá)遺傳學(xué)調(diào)控、異染色質(zhì)的形成和物種的性別決定等方面起著重要作用，此外在壓制轉(zhuǎn)座子轉(zhuǎn)錄和基因轉(zhuǎn)錄后調(diào)控中也扮演著重要角色，并且越來越多的研究表明在病癥組織中piRNA的表達(dá)不盡相同。lncRNA。長度約為200-100000個(gè)核苷酸，可以通過不同的分子生物學(xué)機(jī)制調(diào)控編碼基因的表達(dá)，參與疾病相關(guān)的信號(hào)通路，對(duì)疾病的發(fā)生、發(fā)展及醫(yī)治有重要作用。研究發(fā)現(xiàn)，lncRNA-DANCR明顯增強(qiáng)肝病細(xì)胞的感性特征，促進(jìn)一些疾病細(xì)胞的形成，在體內(nèi)干擾DANCR的作用可導(dǎo)致一些疾病細(xì)胞活力降低，同時(shí)阻止一些miRNA的壓制效應(yīng)，揭發(fā)出一個(gè)涉及l(fā)ncRNA、mRNA和miRNA的新一些疾病形成機(jī)制?？梢?，lncRNA對(duì)一些疾病方面有重要作用。另外有研究發(fā)現(xiàn)lncRNA在宿主抗病菌反應(yīng)、骨關(guān)節(jié)炎、囊性纖維化、藥物研發(fā)等方面也有重要的臨床應(yīng)用價(jià)值。較佳方法是保證樣品完全裂解，但相同的裂解方案換了一個(gè)樣本可能就沒轍了。

RNA提取濃度不高或質(zhì)量不佳原因及解決辦法：1、得率過低：提取樣本過低總量不足或者提取樣本過多裂解不徹底；應(yīng)當(dāng)使用適當(dāng)質(zhì)量的組織或細(xì)胞進(jìn)行提取，樣本前處理一定要做好，裂解應(yīng)充分。2、基因組殘留：Trizol法提取時(shí)，分層后吸取上清時(shí)吸到中間層會(huì)帶來嚴(yán)重的基因組污染；分層吸取時(shí)應(yīng)當(dāng)格外小心，不要吸取到中間層。如果是采用柱式法提取，可選擇含有DNaseI的試劑盒進(jìn)行提取，吸附在膜上的核酸直接用DNaseI進(jìn)行消化，可極大限度的降低DNA殘留。優(yōu)化的洗滌劑和離液鹽用于裂解細(xì)胞并滅活核糖核酸酶。蘇州正規(guī)RNA提取試劑推薦廠家

mRNA是依據(jù)DNA序列轉(zhuǎn)錄而成的蛋白質(zhì)合成模板。珠海正規(guī)RNA提取試劑生產(chǎn)廠家

動(dòng)物細(xì)胞RNA提取：1、懸浮細(xì)胞：可直接離心后棄掉培養(yǎng)基，用無菌PBS清洗1~2遍后，再用適量PBS懸浮起來，然后再加入裂解液進(jìn)行裂解。千萬不要完全棄掉液體后，往沉淀細(xì)胞里直接加入裂解液，這樣會(huì)使外表層的細(xì)胞裂解后釋放的組蛋白包裹粘附在沉淀細(xì)胞外側(cè)，從而限制沉淀內(nèi)部的細(xì)胞與裂解液的接觸，從而導(dǎo)致細(xì)胞裂解不徹底，降低RNA得率。2、半貼壁或貼壁不緊的細(xì)胞：棄掉培養(yǎng)基后，用PBS洗1~2次，然后直接吸取適量PBS用吸管或者泵吹打培養(yǎng)皿，把細(xì)胞吹下來，轉(zhuǎn)移到無RNA酶的EP管中，加裂解液進(jìn)行提取。3、貼壁細(xì)胞：需要先用胰酶消化，然后收集到無RNA酶的EP管中，離心去其上清，用PBS洗1~2次，去除多余的胰酶，以適量PBS重懸后繼續(xù)進(jìn)行提取步驟。珠海正規(guī)RNA提取試劑生產(chǎn)廠家