ELISA的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性,酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性,又保留酶的活性。在測定時(shí),受檢標(biāo)本(測定其中的抗體或抗原)與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開。再加入酶標(biāo)記的抗原或抗體,也通過反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上。此時(shí)固相上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。為什么說上海伊麗薩生物科技有限公司的進(jìn)口ELISA 試劑盒的質(zhì)量和服務(wù)有著更加得天獨(dú)厚的優(yōu)勢?綜合ELISA試劑盒
在ELISA試劑盒的研發(fā)中,抗原制備同樣重要。如果檢測目標(biāo)是抗體,那么就需要制備高質(zhì)量的抗原。抗原可以是天然的蛋白質(zhì)、重組蛋白或者合成肽段。對于天然蛋白質(zhì)抗原,需要從生物樣本中提取和純化,確保其純度和活性。重組蛋白抗原則是通過基因工程技術(shù)在合適的表達(dá)系統(tǒng)中表達(dá),如大腸桿菌或哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)。在制備過程中,要注意蛋白的折疊、修飾等問題,以保證其與天然蛋白具有相似的抗原性。合成肽段抗原是根據(jù)目標(biāo)抗體識別的表位序列合成的短肽,這種抗原具有特異性高、易于制備等優(yōu)點(diǎn)。合適的抗原是構(gòu)建ELISA試劑盒的基礎(chǔ),直接影響試劑盒的性能。重慶專業(yè)ELISA試劑盒廠家價(jià)格上海伊麗薩生物科技代理進(jìn)口ELISA試劑盒,服務(wù)生命科研工作者。
ELISA試劑盒在心血管疾病的檢測中也有應(yīng)用。例如,在心肌梗死的診斷中,可以檢測心肌肌鈣蛋白(cTn),這是一種特異性很高的心肌損傷標(biāo)志物。ELISA試劑盒能夠準(zhǔn)確測量血清中的cTn水平,在心肌梗死發(fā)生后的早期就能檢測到其升高,有助于早期診斷和及時(shí)。此外,對于心力衰竭的診斷,ELISA試劑盒還可用于檢測腦鈉肽(BNP)及其前體(NT-proBNP),這些指標(biāo)的升高與心力衰竭的嚴(yán)重程度相關(guān),通過檢測它們可以輔助診斷心力衰竭并評估病情的進(jìn)展。
ELISA試劑盒在環(huán)境監(jiān)測領(lǐng)域的水體污染物檢測方面具有獨(dú)特優(yōu)勢。例如,檢測水體中的重金屬離子,雖然重金屬離子本身不能直接與抗體結(jié)合,但可以通過將重金屬離子與特定的螯合劑結(jié)合,形成能夠被抗體識別的復(fù)合物。ELISA試劑盒中的微孔板預(yù)先包被有針對該復(fù)合物的抗體。當(dāng)含有重金屬-螯合劑復(fù)合物的水樣與抗體結(jié)合后,經(jīng)過酶標(biāo)記和底物反應(yīng),根據(jù)信號強(qiáng)度可以檢測出水體中的重金屬離子濃度。對于水體中的有機(jī)污染物,如多環(huán)芳烴(PAHs),也可以利用ELISA試劑盒進(jìn)行檢測。這種檢測方法能夠快速對水體進(jìn)行初步篩查,為環(huán)境治理提供數(shù)據(jù)支持。避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體,請盡快用水沖洗。
操作方法:雙抗體夾心法1.包被:用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1~10μg/ml。在每個(gè)聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml,4℃過夜。次日,棄去孔內(nèi)溶液,用洗滌緩沖液洗3次,每次3分鐘。(簡稱洗滌,下同)。2.加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時(shí)。然后洗滌。(同時(shí)做空白孔,陰性對照孔及陽性對照孔)。3.加酶標(biāo)抗體:于各反應(yīng)孔中,加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃孵育0.5~1小時(shí),洗滌。4.加底物液顯色:于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃10~30分鐘。5.終止反應(yīng):于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。6.結(jié)果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結(jié)果:反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,陽性程度越強(qiáng),陰性反應(yīng)為無色或極淺,依據(jù)所呈顏色的深淺,以“+”、“-”號表示。也可測OD值:在ELISA檢測儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值,若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍,即為陽性。尋找進(jìn)口ELISA試劑盒?上海伊麗薩生物科技代理諸多品牌,是理想之選。河南專注ELISA試劑盒廠家價(jià)格
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ELISA試劑盒的操作相對簡便,這使得它在眾多實(shí)驗(yàn)室和臨床檢測中得到廣泛應(yīng)用。一般來說,試劑盒都配有詳細(xì)的操作說明書。首先,樣本的處理通常比較簡單,例如血液樣本只需進(jìn)行離心等基本操作就可用于檢測。在檢測過程中,加樣步驟明確,按照微孔板上的標(biāo)記依次加入樣本、試劑等。反應(yīng)的時(shí)間和溫度也有明確規(guī)定,通常在常見的實(shí)驗(yàn)室環(huán)境溫度下就可進(jìn)行反應(yīng),反應(yīng)時(shí)間也在可接受的范圍內(nèi),不需要特殊的長時(shí)間等待。顯色反應(yīng)后的檢測也較為方便,使用酶標(biāo)儀等常見儀器就可以讀取吸光度等數(shù)據(jù)。整個(gè)操作過程不需要復(fù)雜的儀器設(shè)備和高超的實(shí)驗(yàn)技術(shù),普通的實(shí)驗(yàn)室人員經(jīng)過簡單培訓(xùn)就可以熟練操作。綜合ELISA試劑盒
底物緩沖液(PH5.0磷酸棗檸檬酸):0.2MNa2HPO4(28.4克/L)25.7ml0.1M檸檬酸(19.2克/L)24.3ml加蒸餾水50ml。(6)TMB(四甲基聯(lián)苯胺)使用液:TMB(10mg/5ml無水乙醇)0.5ml底物緩沖液(PH5.5)10ml0.75%H2O232μl(7)ABTS使用液:ABTS0.5mg底物緩沖液(PH5.5)1ml3%H2O22μl(8)抗原、抗體和酶標(biāo)記抗體。(9)正常人血清和陽性對照血清。器材(1)聚苯乙烯塑料板(簡稱酶標(biāo)板)40孔或96孔,ELISA檢測儀,50μl及100μl加樣器,塑料滴頭,小毛巾,洗滌瓶。(2)小燒杯、玻璃棒、試管、吸管和...