接種細(xì)胞：轉(zhuǎn)染前，用膠原酶（WORTHINGTONG公司LS004196)消化細(xì)胞并計(jì)數(shù)（不建議用胰酶）。調(diào)整細(xì)胞濃度，將細(xì)胞鋪入細(xì)胞培養(yǎng)的器皿，每個(gè)孔置入的細(xì)胞量應(yīng)能使轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞匯合度達(dá)到70~80%。2.準(zhǔn)備DNA-PEI復(fù)合物：DNA、PEI試劑和稀釋劑在進(jìn)行以下步驟前需先使其升至室溫。依據(jù)表1所示，用Opti-MEMITM（Invitrogen）或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑。每1μgDNA需用1.5-5μL線性PEI轉(zhuǎn)染試劑(這個(gè)需要客戶自行摸索配比，每一批轉(zhuǎn)染試劑和每一批DNA比例可能會(huì)稍有不同）。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管，一邊將稀釋的線性PEI轉(zhuǎn)染試劑滴加至試管中（注意：請(qǐng)勿顛倒添加順序）。充分混勻后，室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復(fù)合物。當(dāng)溶液體積較大時(shí)，請(qǐng)用圓底聚丙烯管，例如NEST5mL/14mL離心管。3.轉(zhuǎn)染細(xì)胞：直接向每個(gè)孔中加入DNA-PEI復(fù)合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿。在無血清條件下轉(zhuǎn)染時(shí)，去除生長培養(yǎng)基，替換成無血清培養(yǎng)基，然后滴DNA-PEI復(fù)合物。轉(zhuǎn)染1.5h后，添加?體積的包含30%血清的生長培養(yǎng)基。關(guān)于轉(zhuǎn)染試劑相關(guān)產(chǎn)品問題，歡迎咨詢上海曼博生物！如想申請(qǐng)PEI試用裝，請(qǐng)關(guān)注我們的公眾號(hào)：Mine-bio，回復(fù)關(guān)鍵詞“PEI申請(qǐng)”，即可參加！PEI轉(zhuǎn)染試劑是帶正電的陽離子聚合物與核酸中帶負(fù)電的磷酸基團(tuán)形成帶正電的復(fù)合物后，通過胞吞進(jìn)入細(xì)胞。山東PEI轉(zhuǎn)染試劑試用裝

材料：質(zhì)粒DNA指數(shù)生長的真核細(xì)胞PEI（聚乙烯亞胺）1×HBS（pH7.4）配方：PEI儲(chǔ)存液（100μM）：稱取125mgPEI粉末溶解于50ml1×HBS（pH7.4）中，0.2μm濾膜過濾，儲(chǔ)存于4℃?zhèn)溆谩?×HBS（pH7.4）：將8.76gNaCl溶解于900ml超純水，加入20ml1M的HEPES，調(diào)pH值到7.4，定容至1L，過濾（0.2μm濾膜）后儲(chǔ)存于4℃?zhèn)溆?。方法?．細(xì)胞分盤：通過胰酶消化收集細(xì)胞，用適當(dāng)?shù)耐耆囵B(yǎng)基以4×105至8×105細(xì)胞/cm2的密度平鋪細(xì)胞于60mm組織培養(yǎng)皿上（根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要選擇培養(yǎng)皿，使細(xì)胞貼壁后所占總面積達(dá)到培養(yǎng)皿面積的70-90％）。根據(jù)細(xì)胞貼壁情況于含5％CO2的37℃溫箱中孵育8-24h,當(dāng)細(xì)胞貼壁完全后即可開始轉(zhuǎn)染。轉(zhuǎn)染前換入2mL預(yù)熱的無血清培養(yǎng)基。如想申請(qǐng)PEI試用裝，請(qǐng)關(guān)注我們的公眾號(hào)：Mine-bio，回復(fù)關(guān)鍵詞“PEI申請(qǐng)”，即可參加！?高性價(jià)比PEI轉(zhuǎn)染試劑試用裝適用于Hela細(xì)胞轉(zhuǎn)染有人知道PEI轉(zhuǎn)染試劑的價(jià)格么？

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1.對(duì)于某些類型的細(xì)胞如HEK-293、HEK293T、NIH/3T3和COS細(xì)胞，在轉(zhuǎn)染前兩天鋪板可顯著提高轉(zhuǎn)入基因的表達(dá)水平。如果選擇轉(zhuǎn)染前兩天鋪板，可適當(dāng)降低鋪板密度，以確保轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞的匯合度仍為70~80%。2.對(duì)于接觸抑制敏感的細(xì)胞，可適當(dāng)降低鋪板密度。3.即使在有蛋白（如10%的血清）存在的情況下，DNA-PEI復(fù)合物仍能轉(zhuǎn)染細(xì)胞，但是DNA-PEI復(fù)合物必須在無蛋白存在的條件下形成。我們推薦使用Opti-MEMITM培養(yǎng)基以達(dá)到*轉(zhuǎn)染效率。其他的無蛋白培養(yǎng)基則需測試與線性PEI轉(zhuǎn)染試劑的兼容性。4.對(duì)大多數(shù)細(xì)胞來而言，每1μgDNA使用3.0μLEndoFectinTM試劑都能獲得較高轉(zhuǎn)染效率。使用者也可嘗試每1μgDNA使用1~4μL體積線性PEI轉(zhuǎn)染試劑進(jìn)行優(yōu)化。更多關(guān)于Polysciences PEI相關(guān)內(nèi)容歡迎咨詢上海曼博生物！如想申請(qǐng)PEI試用裝，請(qǐng)關(guān)注我們的公眾號(hào)：Mine-bio，回復(fù)關(guān)鍵詞“PEI申請(qǐng)”，即可參加！?使用PEI轉(zhuǎn)染時(shí)，一般和DNA的比例是多少？

線性PEI轉(zhuǎn)染試劑是一種陽離子聚合物，分子量25000，它能與核酸形成復(fù)合物，并使該復(fù)合物進(jìn)入哺乳動(dòng)物細(xì)胞。線性PEI轉(zhuǎn)染試劑廣適用于常見細(xì)胞系，如HEK-293、HEK293T、HepG2、Hela、CHO-K1、COS-1、COS-7、NIH/3T3和Sf9等。該試劑即使在有血清存在的情況下，它仍然能的將核酸導(dǎo)入細(xì)胞。78bio公司提供的線性PEI轉(zhuǎn)染試劑具有如下優(yōu)點(diǎn)：優(yōu)越的轉(zhuǎn)染效率,重組蛋白的高表達(dá)水平,與含血清的培養(yǎng)基相兼容,低細(xì)胞毒性,易于操作?質(zhì)量控制每批次線性PEI轉(zhuǎn)染試劑均經(jīng)過轉(zhuǎn)染測試。將eGFP表達(dá)質(zhì)粒（GeneCopoeiaCat.No.EX-EGFP-Lv01）用EndoFectinTM-Plus轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)入亞融合狀態(tài)的HEK-293細(xì)胞，轉(zhuǎn)染16h后，超過95%的細(xì)胞表達(dá)eGFP。更多關(guān)于PEI轉(zhuǎn)染試劑相關(guān)產(chǎn)品技術(shù)問題，歡迎咨詢上海曼博生物。????如想申請(qǐng)PEI試用裝，請(qǐng)關(guān)注我們的公眾號(hào)：Mine-bio，回復(fù)關(guān)鍵詞“PEI申請(qǐng)”，即可參加！?哪個(gè)品牌的PEI轉(zhuǎn)染試劑比較好？山東PEI轉(zhuǎn)染試劑試用裝

23966-1和24765-1的PEI轉(zhuǎn)染試劑在哪里買呢？山東PEI轉(zhuǎn)染試劑試用裝

PEIMAX粉末配置方法：1)將1gPEIMAX40K放入盛有900mL水的玻璃燒杯中；2)放入攪拌轉(zhuǎn)子，放置于磁力攪拌器上，設(shè)置攪拌程序以形成一個(gè)較小的漩渦；3)等待PEIMAX40K完全溶解，通常需要5分鐘左右；4)用25mL塑料移液管加入1N氫氧化鈉滴定至pH6.9~7.1；5)如果不小心超過7.1，則使用1N的鹽酸和新的塑料移液管將pH重新滴定至6.9~7.1；6)將溶液轉(zhuǎn)移到1L玻璃量筒中，加入水定容至1L；7)用無菌真空過濾膜過濾配制的轉(zhuǎn)染試劑溶液；8)按需分裝，4°C儲(chǔ)存（切記不可冷凍）；注：未經(jīng)配制的粉末有效期為2年。配置成液體后分裝在合適的瓶子中，并且保存在4℃的轉(zhuǎn)染試劑將可在6個(gè)月之內(nèi)保持性能。如jin用于蛋白定性研究，分裝的轉(zhuǎn)染試劑可延長有效使用期至1年。如想申請(qǐng)PEI試用裝，請(qǐng)關(guān)注我們的公眾號(hào)：Mine-bio，回復(fù)關(guān)鍵詞“PEI申請(qǐng)”，即可參加！山東PEI轉(zhuǎn)染試劑試用裝