材料：質(zhì)粒DNA指數(shù)生長(zhǎng)的真核細(xì)胞PEI（聚乙烯亞胺）1×HBS（pH7.4）配方：PEI儲(chǔ)存液（100μM）：稱取125mgPEI粉末溶解于50ml1×HBS（pH7.4）中，0.2μm濾膜過(guò)濾，儲(chǔ)存于4℃?zhèn)溆谩?×HBS（pH7.4）：將8.76gNaCl溶解于900ml超純水，加入20ml1M的HEPES，調(diào)pH值到7.4，定容至1L，過(guò)濾（0.2μm濾膜）后儲(chǔ)存于4℃?zhèn)溆谩７椒ǎ?．細(xì)胞分盤：通過(guò)胰酶消化收集細(xì)胞，用適當(dāng)?shù)耐耆囵B(yǎng)基以4×105至8×105細(xì)胞/cm2的密度平鋪細(xì)胞于60mm組織培養(yǎng)皿上（根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要選擇培養(yǎng)皿，使細(xì)胞貼壁后所占總面積達(dá)到培養(yǎng)皿面積的70-90％）。根據(jù)細(xì)胞貼壁情況于含5％CO2的37℃溫箱中孵育8-24h,當(dāng)細(xì)胞貼壁完全后即可開(kāi)始轉(zhuǎn)染。轉(zhuǎn)染前換入2mL預(yù)熱的無(wú)血清培養(yǎng)基。更多產(chǎn)品信息，歡迎咨詢上海曼博生物！PEI轉(zhuǎn)染試劑用什么溶劑配制？PolyplusPEI轉(zhuǎn)染試劑如何儲(chǔ)存

線性PEI轉(zhuǎn)染試劑是一種陽(yáng)離子聚合物，分子量25000，它能與核酸形成復(fù)合物，并使該復(fù)合物進(jìn)入哺乳動(dòng)物細(xì)胞。線性PEI轉(zhuǎn)染試劑廣適用于常見(jiàn)細(xì)胞系，如HEK-293、HEK293T、HepG2、Hela、CHO-K1、COS-1、COS-7、NIH/3T3和Sf9等。該試劑即使在有血清存在的情況下，它仍然能的將核酸導(dǎo)入細(xì)胞。78bio公司提供的線性PEI轉(zhuǎn)染試劑具有如下優(yōu)點(diǎn)：優(yōu)越的轉(zhuǎn)染效率,重組蛋白的高表達(dá)水平,與含血清的培養(yǎng)基相兼容,低細(xì)胞毒性,易于操作?質(zhì)量控制每批次線性PEI轉(zhuǎn)染試劑均經(jīng)過(guò)轉(zhuǎn)染測(cè)試。將eGFP表達(dá)質(zhì)粒（GeneCopoeiaCat.No.EX-EGFP-Lv01）用EndoFectinTM-Plus轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)入亞融合狀態(tài)的HEK-293細(xì)胞，轉(zhuǎn)染16h后，超過(guò)95%的細(xì)胞表達(dá)eGFP。更多關(guān)于PEI轉(zhuǎn)染試劑相關(guān)產(chǎn)品技術(shù)問(wèn)題，歡迎咨詢上海曼博生物。也歡迎關(guān)注我們的公眾號(hào)：Mine-bio國(guó)產(chǎn)PEI轉(zhuǎn)染試劑廠家無(wú)需昂貴設(shè)備，PEI試劑實(shí)現(xiàn)經(jīng)濟(jì)高效率的基因轉(zhuǎn)染方案。

PEI在于可以應(yīng)用于體內(nèi)試驗(yàn)。當(dāng)初試驗(yàn)經(jīng)費(fèi)很有限，被逼無(wú)奈只能放棄脂質(zhì)體2000，選擇PEI，以至于相當(dāng)長(zhǎng)的時(shí)間內(nèi)，轉(zhuǎn)染試驗(yàn)都不順利。下面是幾點(diǎn)關(guān)于PEI轉(zhuǎn)染的注意要點(diǎn)：1.PEI的使用量可以參照脂質(zhì)體2000的說(shuō)明書(shū)，所用質(zhì)粒盡量去內(nèi)2.轉(zhuǎn)染時(shí)，一定要把PEI+DMEM加入到質(zhì)粒+DMEM中，順序不可錯(cuò)，輕微混勻，靜止20min3.轉(zhuǎn)染后4小時(shí)，一定要換液！換含有FBS的完全培養(yǎng)液！因?yàn)镻EI對(duì)細(xì)胞毒性太大4.如果后續(xù)試驗(yàn)涉及到穩(wěn)定篩選，建議把血清濃度適當(dāng)提高。PS：事實(shí)證明，PEI是可行的，已經(jīng)做出穩(wěn)定細(xì)胞系了。Polysciences轉(zhuǎn)染與遞送相關(guān)產(chǎn)品已正式移交KyforaBio，相關(guān)產(chǎn)品標(biāo)簽將變更為KyforaBiobyPolysciences，后續(xù)購(gòu)買請(qǐng)認(rèn)準(zhǔn)備新品牌。更多關(guān)于PEI轉(zhuǎn)染試劑相關(guān)的信息，可咨詢上海曼博生物醫(yī)藥科技有限公司！

瞬時(shí)轉(zhuǎn)染方法1.接種細(xì)胞：轉(zhuǎn)染前，用膠原酶消化細(xì)胞并計(jì)數(shù)（不建議用胰酶）。調(diào)整細(xì)胞濃度，將細(xì)胞鋪入細(xì)胞培養(yǎng)的器皿，總體積如表1所示，每個(gè)孔置入的細(xì)胞量應(yīng)能使轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞匯合度達(dá)到70~80%。2.準(zhǔn)備DNA-PEI復(fù)合物：DNA、PEI試劑和稀釋劑在進(jìn)行以下步驟前需先使其升至室溫。依據(jù)表1所示，用Opti-MEMITM（Invitrogen）或其他適合的無(wú)蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑。每1μgDNA需用2-5μL線性PEI轉(zhuǎn)染試劑。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管，一邊將稀釋的線性PEI轉(zhuǎn)染試劑滴加至試管中（注意：請(qǐng)勿顛倒添加順序）。充分混勻后，室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復(fù)合物。當(dāng)溶液體積較大時(shí)，請(qǐng)用圓底聚丙烯管，例如Falcon5mL/14mL離心管。3.轉(zhuǎn)染細(xì)胞：直接向每個(gè)孔中加入DNA-PEI復(fù)合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿。在無(wú)血清條件下轉(zhuǎn)染時(shí)，去除生長(zhǎng)培養(yǎng)基，替換成無(wú)血清培養(yǎng)基，然后滴DNA-PEI復(fù)合物。轉(zhuǎn)染3h后，添加?體積的包含30%血清的生長(zhǎng)培養(yǎng)基。4.孵育細(xì)胞和分析結(jié)果：在CO2培養(yǎng)箱中37℃下孵育細(xì)胞至可以分析檢測(cè)。轉(zhuǎn)染后快7h即可檢測(cè)到轉(zhuǎn)入基因的表達(dá)。請(qǐng)自行確定檢測(cè)時(shí)間。更多關(guān)于Polysciences PEI轉(zhuǎn)染試劑相關(guān)內(nèi)容歡迎咨詢上海曼博生物！PEI轉(zhuǎn)染試劑是一種陽(yáng)離子聚合物轉(zhuǎn)染試劑。

細(xì)胞分盤：通過(guò)胰酶消化收集細(xì)胞，用適當(dāng)?shù)耐耆囵B(yǎng)基以4×105至8×105細(xì)胞/cm2的密度平鋪細(xì)胞于60mm組織培養(yǎng)皿上（根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要選擇培養(yǎng)皿，使細(xì)胞貼壁后所占總面積達(dá)到培養(yǎng)皿面積的70-90％）。根據(jù)細(xì)胞貼壁情況于含5％CO2的37℃溫箱中孵育8-24h,當(dāng)細(xì)胞貼壁完全后即可開(kāi)始轉(zhuǎn)染。轉(zhuǎn)染前換入2mL預(yù)熱的無(wú)血清培養(yǎng)基。2、制備PEI-DNA混合物：以60mm組織培養(yǎng)皿用420μL反應(yīng)總體積為例。準(zhǔn)備兩支1.5mL離心管，一管將質(zhì)粒DNA（總量2-8μg為佳）加入240μLHBS中，混勻。另一管中則用HBS將100μM的PEI儲(chǔ)存液稀釋成10μM，充分混合。然后取180μL10μMPEI溶液加入含有DNA的HBS中，充分混勻后室溫靜置20-30min。將這420μL的PEI-DNA混合液逐滴加入上述單層細(xì)胞的細(xì)胞培養(yǎng)基中，輕輕搖動(dòng)平皿混勻，置于含5％～7％CO2的37℃溫箱孵育。注：每次用100μM的PEI儲(chǔ)存液前都需要先將其充分混勻，保證所取的濃度一致。3、培養(yǎng)6-10h后更換為37℃預(yù)熱的含有血清的培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)，16h左右可以觀測(cè)到報(bào)告基因的表達(dá)。哪個(gè)品牌的P日轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染效率更高呢?山東垂直輪PEI轉(zhuǎn)染試劑

哪個(gè)品牌的PEI轉(zhuǎn)染試劑性價(jià)比會(huì)比較高呢？PolyplusPEI轉(zhuǎn)染試劑如何儲(chǔ)存

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：Transporter5轉(zhuǎn)染試劑是一種非GMP等級(jí)的即用型線性聚乙烯亞胺（PEI轉(zhuǎn)染試劑）溶液，由PEIMAX配置而成，采用0.1umPES無(wú)菌過(guò)濾器，完全消除支原體污染風(fēng)險(xiǎn)。Transporter5將DNA縮聚成帶正電荷的復(fù)合物，這些復(fù)合物很容易通過(guò)內(nèi)吞作用進(jìn)入細(xì)胞，并且Transporter5-DNA復(fù)合物能很好地抵御溶酶體的降解作用，有效提高轉(zhuǎn)染效率。適用于工藝開(kāi)發(fā)、臨床前和早期臨床研究，可無(wú)縫過(guò)渡到MAXgeneGMP用于商業(yè)化生產(chǎn)。Transporter5轉(zhuǎn)染試劑能高效地將DNA轉(zhuǎn)染入HEK-293、CHO、COS、HELA、昆蟲(chóng)（SF9、SF21）等真核細(xì)胞系，可作用于大到135,000個(gè)核苷酸的質(zhì)粒，所以較大的質(zhì)粒也可以成功地轉(zhuǎn)染。Transporter5可節(jié)省試劑準(zhǔn)備時(shí)間，加快項(xiàng)目進(jìn)度。經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的性能檢測(cè)，確保品質(zhì)，在新藥研發(fā)過(guò)程中是一款快速、重復(fù)性好、可用于批量產(chǎn)的轉(zhuǎn)染試劑。產(chǎn)品特點(diǎn)：非GMP，研究級(jí)PEI轉(zhuǎn)染試劑溶液；高轉(zhuǎn)染效率；無(wú)縫過(guò)渡到MAXgeneGMP；易放大，可預(yù)測(cè)產(chǎn)量；用于工藝開(kāi)發(fā)，臨床前和早期臨床研究。請(qǐng)關(guān)注我們的公眾號(hào)：Mine-bioPolyplusPEI轉(zhuǎn)染試劑如何儲(chǔ)存