上海曼博生物醫(yī)藥科技有限公司始終致力于為客戶提供一站式生物醫(yī)藥科技服務,以創(chuàng)新和為價值理念,通過自身研發(fā)團隊,以及與國內外專業(yè)科研團隊強強聯(lián)合,不斷創(chuàng)新,為生命科學和醫(yī)藥研發(fā)行業(yè)提供產(chǎn)品和服務。生物醫(yī)學工程是綜合應用生命科學與工程科學的原理和方法,從工程學角度在分子、細胞、組織、乃至整個人體系統(tǒng)多層次認識人體的結構、功能和其他生命現(xiàn)象,研究用于防病、治病、人體功能輔助及衛(wèi)生保健的人工材料、制品、裝置和系統(tǒng)技術的總稱。也歡迎關注我們的公眾號:Mine-bio,查看更多技術文章!PEI轉染試劑主要包括25K和40K的分子量?核酸PEI轉染試劑怎么樣
接種細胞:轉染前,用膠原酶(WORTHINGTONG公司LS004196)消化細胞并計數(shù)(不建議用胰酶)。調整細胞濃度,將細胞鋪入細胞培養(yǎng)的器皿,每個孔置入的細胞量應能使轉染時細胞匯合度達到70~80%。2.準備DNA-PEI復合物:DNA、PEI試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫。依據(jù)表1所示,用Opti-MEMITM(Invitrogen)或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑。每1μgDNA需用1.5-5μL線性PEI轉染試劑(這個需要客戶自行摸索配比,每一批轉染試劑和每一批DNA比例可能會稍有不同)。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管,一邊將稀釋的線性PEI轉染試劑滴加至試管中(注意:請勿顛倒添加順序)。充分混勻后,室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復合物。當溶液體積較大時,請用圓底聚丙烯管,例如NEST5mL/14mL離心管。3.轉染細胞:直接向每個孔中加入DNA-PEI復合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿。在無血清條件下轉染時,去除生長培養(yǎng)基,替換成無血清培養(yǎng)基,然后滴DNA-PEI復合物。轉染1.5h后,添加?體積的包含30%血清的生長培養(yǎng)基。更多關于Polysciences PEI轉染試劑相關問題,歡迎咨詢上海曼博生物!PolyplusPEI轉染試劑殘留檢測方法PEI轉染試劑從96孔板到1000L生物反應器規(guī)模都能提供連續(xù)性的高表達蛋白或病毒。
產(chǎn)品特點:PEIMAX40K是線性聚乙烯亞胺鹽酸鹽形式(LinearPolyethylenimineHydrochloride),是線性化聚乙烯亞胺PEI25K的升級產(chǎn)品。相比于PEI25K,PEIMAX40K:1.完全水解(去乙酰化);2.鹽酸鹽形式,具更高的水溶特性;3.含更長連續(xù)性乙烯亞胺片段,其質子化氮水平比PEI25K提高11%以上。應用領域:PEIMAX40K(cat#24765)是一款非GMP等級的PEI轉染試劑,適用于基礎學術研究和藥物研發(fā)早期階段,以固體粉末形式提供,需用戶自行配置(詳情見使用方法)。更多關于KyforaBiobyPolysciencesPEI轉染試劑,歡迎咨詢上海曼博生物!
細胞轉染實驗是生物醫(yī)學實驗室中常規(guī)的研究手段,目的是把外源基因、蛋白或者小分子導入到靶細胞內。目前主要有三種主流方法:生物轉染,物理轉染和化學轉染。其中生物轉染主要是利用病毒等微生物作為基因導入載體,以慢病毒、腺病毒和腺相關病毒等常見,其侵染效率可以達到90%以上,但常因安全性等問題,很多實驗室對其敬而遠之。物理轉染主要包括顯微注射、電穿孔和基因,無論哪一種都需要特定的設備,且一分錢一分貨,性能好的價格也都相對較高。如想申請試用裝,請關注公眾號:Mine-bio,回復“申請PEI”,即可參加!PEI轉染試劑的主要分子量是多少?
1.對于某些類型的細胞如HEK-293、HEK293T、NIH/3T3和COS細胞,在轉染前兩天鋪板可顯著提高轉入基因的表達水平。如果選擇轉染前兩天鋪板,可適當降低鋪板密度,以確保轉染時細胞的匯合度仍為70~80%。2.對于接觸抑制敏感的細胞,可適當降低鋪板密度。3.即使在有蛋白(如10%的血清)存在的情況下,DNA-PEI復合物仍能轉染細胞,但是DNA-PEI復合物必須在無蛋白存在的條件下形成。我們推薦使用Opti-MEMITM培養(yǎng)基以達到*轉染效率。其他的無蛋白培養(yǎng)基則需測試與線性PEI轉染試劑的兼容性。4.對大多數(shù)細胞來而言,每1μgDNA使用3.0μLEndoFectinTM試劑都能獲得較高轉染效率。使用者也可嘗試每1μgDNA使用1~4μL體積線性PEI轉染試劑進行優(yōu)化。更多產(chǎn)品信息,歡迎咨詢上海曼博生物!哪個品牌的P日轉染試劑轉染效率更高呢?核酸PEI轉染試劑怎么樣
誰知道Polysciences的轉染試劑怎樣?核酸PEI轉染試劑怎么樣
細胞分盤:通過胰酶消化收集細胞,用適當?shù)耐耆囵B(yǎng)基以4×105至8×105細胞/cm2的密度平鋪細胞于60mm組織培養(yǎng)皿上(根據(jù)實驗需要選擇培養(yǎng)皿,使細胞貼壁后所占總面積達到培養(yǎng)皿面積的70-90%)。根據(jù)細胞貼壁情況于含5%CO2的37℃溫箱中孵育8-24h,當細胞貼壁完全后即可開始轉染。轉染前換入2mL預熱的無血清培養(yǎng)基。2、制備PEI-DNA混合物:以60mm組織培養(yǎng)皿用420μL反應總體積為例。準備兩支1.5mL離心管,一管將質粒DNA(總量2-8μg為佳)加入240μLHBS中,混勻。另一管中則用HBS將100μM的PEI儲存液稀釋成10μM,充分混合。然后取180μL10μMPEI溶液加入含有DNA的HBS中,充分混勻后室溫靜置20-30min。將這420μL的PEI-DNA混合液逐滴加入上述單層細胞的細胞培養(yǎng)基中,輕輕搖動平皿混勻,置于含5%~7%CO2的37℃溫箱孵育。注:每次用100μM的PEI儲存液前都需要先將其充分混勻,保證所取的濃度一致。3、培養(yǎng)6-10h后更換為37℃預熱的含有血清的培養(yǎng)基,繼續(xù)培養(yǎng),16h左右可以觀測到報告基因的表達。核酸PEI轉染試劑怎么樣
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