抗體藥物研發(fā)客戶提供小眾創(chuàng)新產(chǎn)品,包括從Researchgrade到cGMP等級的無動物源培養(yǎng)基質,轉染試劑、病毒轉導試劑、基因編輯工具等產(chǎn)品和定制服務,支持ATMP(AdvanceTherapyMedicinalProducts)藥物研發(fā)從R&D到Clinicaltrial以及后期商業(yè)化的無縫轉化;以及提供藥物開發(fā)和探索的抗體文庫定制和商業(yè)授權靈活的CHO工程細胞株以支持抗體藥物的商業(yè)化生產(chǎn),以此希望幫助國內科研工作者快速地接觸世界范圍內的技術,分享研發(fā)工具進步帶來的技術紅利,終為細胞、基因產(chǎn)業(yè)以及再生醫(yī)學行業(yè)等乃至整個生命科學行業(yè)賦能!更多關于轉染試劑相關產(chǎn)品問題,歡迎咨詢上海曼博生物!也歡迎關注我們的公眾號:Mine-bio PEI轉染試劑保存條件是什么?支鏈PEI轉染試劑優(yōu)化方案
產(chǎn)品特點:PEIMAX40K是線性聚乙烯亞胺鹽酸鹽形式(LinearPolyethylenimineHydrochloride),是線性化聚乙烯亞胺PEI25K的升級產(chǎn)品。相比于PEI25K,PEIMAX40K:1.完全水解(去乙?;?.鹽酸鹽形式,具更高的水溶特性;3.含更長連續(xù)性乙烯亞胺片段,其質子化氮水平比PEI25K提高11%以上。應用領域:PEIMAX40K(cat#24765)是一款非GMP等級的PEI轉染試劑,適用于基礎學術研究和藥物研發(fā)早期階段,以固體粉末形式提供,需用戶自行配置(詳情見使用方法)。也歡迎關注我們的公眾號:Mine-bio,查看更多詳情信息!支鏈PEI轉染試劑優(yōu)化方案哪里有賣GMP等級的PEI轉染試劑?
細胞分盤:通過胰酶消化收集細胞,用適當?shù)耐耆囵B(yǎng)基以4×105至8×105細胞/cm2的密度平鋪細胞于60mm組織培養(yǎng)皿上(根據(jù)實驗需要選擇培養(yǎng)皿,使細胞貼壁后所占總面積達到培養(yǎng)皿面積的70-90%)。根據(jù)細胞貼壁情況于含5%CO2的37℃溫箱中孵育8-24h,當細胞貼壁完全后即可開始轉染。轉染前換入2mL預熱的無血清培養(yǎng)基。2、制備PEI-DNA混合物:以60mm組織培養(yǎng)皿用420μL反應總體積為例。準備兩支1.5mL離心管,一管將質粒DNA(總量2-8μg為佳)加入240μLHBS中,混勻。另一管中則用HBS將100μM的PEI儲存液稀釋成10μM,充分混合。然后取180μL10μMPEI溶液加入含有DNA的HBS中,充分混勻后室溫靜置20-30min。將這420μL的PEI-DNA混合液逐滴加入上述單層細胞的細胞培養(yǎng)基中,輕輕搖動平皿混勻,置于含5%~7%CO2的37℃溫箱孵育。注:每次用100μM的PEI儲存液前都需要先將其充分混勻,保證所取的濃度一致。3、培養(yǎng)6-10h后更換為37℃預熱的含有血清的培養(yǎng)基,繼續(xù)培養(yǎng),16h左右可以觀測到報告基因的表達。
對于某些類型的細胞如HEK-293、HEK293T、NIH/3T3和COS細胞,在轉染前兩天鋪板可顯著提高轉入基因的表達水平。如果選擇轉染前兩天鋪板,可適當降低鋪板密度,以確保轉染時細胞的匯合度仍為70~80%。2.對于接觸抑制敏感的細胞,可適當降低鋪板密度。3.即使在有蛋白(如10%的血清)存在的情況下,DNA-PEI復合物仍能轉染細胞,但是DNA-PEI復合物必須在無蛋白存在的條件下形成。我們推薦使用Opti-MEMITM培養(yǎng)基以達到*轉染效率。其他的無蛋白培養(yǎng)基則需測試與線性PEI轉染試劑的兼容性。4.對大多數(shù)細胞來而言,每1μgDNA使用3.0μLEndoFectinTM試劑都能獲得較高轉染效率。使用者也可嘗試每1μgDNA使用1~4μL體積線性PEI轉染試劑進行優(yōu)化。Polysciences轉染與遞送相關產(chǎn)品已正式移交Kyfora Bio,相關產(chǎn)品標簽將變更為Kyfora Bio by Polysciences,后續(xù)購買請認準備新品牌。哪里可以買到23966-1?
PEI在于可以應用于體內試驗。當初試驗經(jīng)費很有限,被逼無奈只能放棄脂質體2000,選擇PEI,以至于相當長的時間內,轉染試驗都不順利。下面是幾點關于PEI轉染的注意要點:1.PEI的使用量可以參照脂質體2000的說明書,所用質粒盡量去內2.轉染時,一定要把PEI+DMEM加入到質粒+DMEM中,順序不可錯,輕微混勻,靜止20min3.轉染后4小時,一定要換液!換含有FBS的完全培養(yǎng)液!因為PEI對細胞毒性太大4.如果后續(xù)試驗涉及到穩(wěn)定篩選,建議把血清濃度適當提高。PS:事實證明,PEI是可行的,已經(jīng)做出穩(wěn)定細胞系了。更多關于PEI轉染試劑相關的信息,可咨詢上海曼博生物醫(yī)藥科技有限公司!歡迎關注曼博生物公眾號:Mine-bioPEI轉染試劑可以轉染哪些細胞?血清兼容PEI轉染試劑官方代理商
PEI轉染試劑和脂質體轉染試劑的區(qū)別?支鏈PEI轉染試劑優(yōu)化方案
產(chǎn)品簡介:KyforaBiobyPolysciences轉染試劑系列是基于聚乙烯亞胺(Polyethylenimine,PEI)的產(chǎn)品,因其較高的轉染效果,已廣泛應用于工業(yè)化生產(chǎn)。聚乙烯亞胺是一種具有較高的陽離子電荷密度的有機大分子,每相隔二個碳原子,即每“第三個原子都是質子化的氨基氮原子,使得聚合物網(wǎng)絡在任何pH下都能充當有效的“質子海綿”體(protonsponge)。PEI可用作轉染試劑,它可以縮聚DNA分子形成顆粒并轉染真核細胞。有實驗證明,分子量為25000的線性PEI即KyforaBiobyPolysciences23966(PEI25K)轉染效率表現(xiàn)優(yōu)良。產(chǎn)品特點:適用于生產(chǎn)mABs、rAbs、bsABs和病毒載體(AVV、LV、BEV);在HEK293、CHO和Sf9細胞系中高度有效;適用于從研發(fā)到工業(yè)化生產(chǎn)的各個階段;可預測,可大規(guī)模生產(chǎn);兩周內即可生成大量目標蛋白或病毒;高轉染效率;大量已發(fā)表的文獻支持。支鏈PEI轉染試劑優(yōu)化方案
瞬時轉染方法:1.接種細胞:轉染前一晚,用膠原酶(WORTHINGTONG公司LS004196)消化...
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【詳情】PEIMAX——高產(chǎn)工業(yè)化轉染試劑-高度濃縮,可制備大量轉染試劑Polysciences轉染試劑系列...
【詳情】材料:質粒DNA指數(shù)生長的真核細胞PEI(聚乙烯亞胺)1×HBS(pH7.4)配方:PEI儲存液(1...
【詳情】注意事項質粒質量:請務必使用高質量轉染級無內質粒(推薦使用QIAGEN或者MN公司去內質粒提取試劑盒...
【詳情】產(chǎn)品簡介Transporter5轉染試劑是一種非GMP等級的即用型線性聚乙烯亞胺(PEI轉染試劑)溶...
【詳情】1.對于某些類型的細胞如HEK-293、HEK293T、NIH/3T3和COS細胞,在轉染前兩天鋪板...
【詳情】產(chǎn)品簡介Transporter5轉染試劑是一種非GMP等級的即用型線性聚乙烯亞胺(PEI轉染試劑)溶...
【詳情】接種細胞:轉染前,用膠原酶(WORTHINGTONG公司LS004196)消化細胞并計數(shù)(不建議用胰...
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