在本節(jié)中,將討論目前仍在應(yīng)用中的主要免疫技術(shù)理論和實驗。 免疫學(xué)研究時間軸 1900.Ehrlich提出抗體形成理論 1938.Marrack提出抗原-抗體結(jié)合假說 1962.Edelman & Porter解析抗體分子結(jié)構(gòu) 1975.Kohler & Milstein開發(fā)單克隆抗體產(chǎn)品 1986.采用基因工程生產(chǎn)乙肝疫苗 1900.Landsteiner & Levine使用天然抗血清識別ABO血型 1900.Nuttall, Wasserman &Schutze 采用沉淀素試驗區(qū)分人乳、牛乳和山羊乳 1900-01.Uhlenhuth 關(guān)于雞蛋蛋白分型的工作,在醫(yī)學(xué)工作中用沉淀素反應(yīng)進(jìn)行人血液染色鋪平了道路 1942.Coons等發(fā)表IHC關(guān)鍵研究??贵w是采用FITC標(biāo)記的 1942.Coons等發(fā)表IHC關(guān)鍵研究。抗體是采用FITC標(biāo)記的上海Sigma抗體的供應(yīng)商。崇明區(qū)CST抗體抗體商家
免疫沉淀(又叫免疫沉淀(IP)) 免疫沉淀是很有價值的研究工具,目的是研究某一特定蛋白的關(guān)鍵信息,包括:小規(guī)模蛋白純化用于功能研究,N-端序列分析,蛋白-蛋白相互作用的研究,細(xì)胞或組織中蛋白相對豐度和分布的測定。免疫沉淀分析法的成功取決于兩個主要因素:原始樣品中抗原的豐度和抗體對該抗原的親和力(一般需要108 M-1或以上的親和力)。在開始免疫沉淀之前,確保特定的步驟有適當(dāng)?shù)膶嶒瀸φ?。對照抗體在性質(zhì)上盡可能與該特異性抗體類似。崇明區(qū)CST抗體抗體商家科研用抗體保證質(zhì)量-益啟生物公司。
關(guān)于抗體質(zhì)量 抗體的質(zhì)量決定了整個免疫檢測的成敗, 是在選擇抗體時優(yōu)先的考慮因素。 通常認(rèn)為,特異性決定抗體功能,所以抗體必須擁有高質(zhì)量,尤其是商業(yè)化的抗體。然而出人意料的是,通常情況并非如此。盡管理論上確實可以模擬和預(yù)測抗體結(jié)合的特異性,但是數(shù)十年的使用經(jīng)驗證明,一些因素如免疫原的抗原性和***性、抗體濃度、緩沖液、免疫作用和樣品制備等因素都會對交叉反應(yīng)和非特異性結(jié)合起到***的促進(jìn)作用。 自70年代以來,當(dāng)研究人員開始將抗體用作蛋白探針時,抗體性能不一致的問題一直困擾著他們。
問題 可能的原因 處理方法 印跡上出現(xiàn)條紋 在凝膠的蛋白負(fù)荷過量。 準(zhǔn)確測量蛋白濃度,載入較少的蛋白。 印跡有污染或模糊 凝膠平衡不當(dāng),或在實驗過程中收縮 檢查凝膠平衡時間。 采用麗春紅S染色時, 轉(zhuǎn)膜無效 轉(zhuǎn)膜時,小心除去氣泡。 印跡染色較差 確保在電轉(zhuǎn)過程中因為溫度過高而產(chǎn)生氣泡或凝膠/膜變形 采用麗春紅S染色時, 在轉(zhuǎn)膜過程中蛋白沒有轉(zhuǎn)移 檢查設(shè)備(轉(zhuǎn)膜盒、盒蓋、電源)。 印跡沒有染色 檢查在轉(zhuǎn)膜過程中凝膠和膜的順序是 確保膜位于凝膠的右側(cè)。 否正確CST抗體的報價具體是多少呢?
流式細(xì)胞術(shù)前沿 過去10年已見證了微毛細(xì)管流式細(xì)胞術(shù)的***應(yīng)用;相較于基于鞘液的傳統(tǒng)流式經(jīng)脆分析儀,它使用更小的樣品體積和更少的試劑,產(chǎn)生更少的廢棄物,具有更任的操作成本。流式細(xì)胞術(shù)還被進(jìn)一步微型化為超緊湊的個人型流式細(xì)胞分析儀。綜上所述,在基于細(xì)胞的大多數(shù)分析中,這些個人型只器使流式細(xì)胞術(shù)轉(zhuǎn)化為幾乎常規(guī)的步驟。成像流式細(xì)胞術(shù)將流式細(xì)脆術(shù)的統(tǒng)計功效和高適量與免疫細(xì)胞化學(xué)和操檢的可視化能力結(jié)合了起來。與到目前為止引入的任何單項技術(shù)進(jìn)行比較,這種結(jié)合可以從單獨一份細(xì)胞樣品獲得更***的蛋白定位和分布數(shù)據(jù)集。神經(jīng)抗體的報價具體是多少呢?奉賢區(qū)Abcam抗體抗體聯(lián)系人
益啟生物的抗體怎么樣?崇明區(qū)CST抗體抗體商家
對于探索性研究,Western blotting仍是優(yōu)先平臺,是用于評估新抗體和其它蛋白檢測分析 法(如ELISA、基于微珠的分析法、流式細(xì)胞術(shù)和免疫組織化學(xué))的標(biāo)準(zhǔn)。新技術(shù)的開發(fā)**減少Western blotting過程需要的時間(例如默克密理博的 SNAP i.d.? 2.0系統(tǒng),目錄編 號SNAP2MM),提高了WB實驗的效率。 Western blotting的基本程序涉及下述關(guān)鍵步驟 樣本制備 凝膠電泳 轉(zhuǎn)膜 封閉非特異性結(jié)合 加入抗體 檢測 Western Blot 實驗流程圖 Troubleshooting 問題 可能的原因 處理方法 崇明區(qū)CST抗體抗體商家
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