免疫組化結(jié)果背景染色較深的原因有哪些？
（1）抗體濃度過高：一抗?jié)舛冗^高是常見的原因之一。解決辦法是，每次使用新抗體前應(yīng)當(dāng)對其工作濃度進行測試，使每一抗體個體化，找到適合自己實驗室的理想工作濃度，既使是即用型的抗體也應(yīng)如此，不能只簡單的按說明書進行染色。
（2）抗體孵育時間過長或溫度較高：解決辦法是，嚴(yán)格執(zhí)行操作規(guī)程，比較好隨身佩帶報時表或報時鐘，及時提醒，避免因遺忘而造成時間延長。現(xiàn)在流行的二步法（Polymer）敏感性很高，要求一抗孵育的時間不是傳統(tǒng)的1小時，而是30分鐘，因此，要根據(jù)染色結(jié)果進行調(diào)整。
（3）DAB變質(zhì)和顯色時間太長：DAB比較好現(xiàn)用現(xiàn)配，如有沉渣應(yīng)進行過濾后再用。配制好的DAB不應(yīng)存放時間太長，因為在沒有酶的情況下，過氧化氫也會游離出氧原子與DAB產(chǎn)生反應(yīng)而降低DAB的效力，未用完的DAB存放在冰箱里幾天后再用這種似乎節(jié)約的辦法是不可取的。DAB的顯色比較好在顯微鏡下監(jiān)控，達到理想的染色程度時立即終止反應(yīng)。但是當(dāng)染**太多時或用染色機時，這樣做似乎不現(xiàn)實，但至少應(yīng)對一些新的或少用的抗體顯色時進行監(jiān)控，避免顯色時間過長。
英瀚斯專業(yè)實驗檢測，各類染色、免疫組化、免疫熒光等。 免疫組化實驗原理，操作步驟盡在英瀚斯實驗外包。貴州病理免疫組化注意事項
免疫組化分類中，免疫熒光方法，英瀚斯生物為您進行介紹。一開始建立的免疫組織化學(xué)技術(shù)。它利用抗原抗體特異性結(jié)合的原理，先將已知抗體標(biāo)上熒光素，以此作為探針檢查細胞或組織內(nèi)的相應(yīng)抗原，在熒光顯微鏡下觀察。當(dāng)抗原抗體復(fù)合物中的熒光素受激發(fā)光的照射后即會發(fā)出一定波長的熒光，從而可確定組織中某種抗原的定位，進而還可進行定量分析。由于免疫熒光技術(shù)特異性強、靈敏度高、快速簡便，所以在臨床病理診斷、檢驗中應(yīng)用比較廣。江西組織免疫組化外包英瀚斯生物，專業(yè)病理老師負(fù)責(zé)免疫組化外包！
免疫組化結(jié)果中的假陰性是指所有抗體標(biāo)記的切片均呈陰性，無陽性信號，假陰性結(jié)果不是真實的反應(yīng)。導(dǎo)致假陰性結(jié)果的原因有:(1)抗原修復(fù)方法選擇不當(dāng)，根據(jù)不同的抗原特點采用不同的修復(fù)方法，大多數(shù)抗體要求熱修復(fù)，熱修復(fù)又包括高壓修復(fù)、微波修復(fù)及煮沸熱修復(fù);而對某些細胞內(nèi)抗原和細胞間質(zhì)抗原需要用酶消化，如表皮生長因子(EGFR)要求胃蛋白酶(Pepsin)消化，而Vimentin則不用修復(fù);(2)一抗本身的問題:一抗效價降低或失效。在免疫組化中染色結(jié)果的假陰性會導(dǎo)致錯診或漏診，進而影響臨床診斷及延誤醫(yī)療。解決這一問題的可通過設(shè)立陽性對照，比較兩者染色結(jié)果。若陽性對照有表達，表明試劑和染色體系及實驗步驟均無問題;若陽性對照無表達，則檢測過程中某一試劑或某個步驟存在問題，應(yīng)逐一查找原因。
在臨床應(yīng)用中，免疫組化還可以進一步分類不同qi官與組織交界處cancer。由于重疊的特征，在一些組織qi官交界處的cancer，只憑組織學(xué)基礎(chǔ)對cancer進行分類很困難。如胃腸道梭形細胞肉瘤是肌肉起源的平滑肌肉瘤，是間質(zhì)起源的胃腸道間質(zhì)瘤(GIST)，還是神經(jīng)起源的神經(jīng)鞘瘤;同樣發(fā)生于組織交界處的cancer有睪丸胚胎cancer與精原細胞cancer，兩者較難區(qū)別，且醫(yī)療與預(yù)后明顯的不同，但用免疫組化檢測角蛋白就較易于區(qū)別:角蛋白陰性則為精原細胞cancer，而角蛋白陽性則為胚胎cancer。做免疫組化的目的是什么？
免疫組化如何比較大限度地降低組織非特異性染色？
（1）縮短一抗/二抗孵育時間、稀釋抗體來控制。這是重要的一條。
（2）一抗用多克隆抗體易出現(xiàn)非特異性著色，建議試用單克隆抗體看看。
（3）內(nèi)源性過氧化物酶和生物素在肝臟、腎臟等組織含量很高（含血細胞多的組織），需要通過延長滅活時間和增加滅活劑濃度來降低背景染色；
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（4）非特異性組分與抗體結(jié)合，這需要通過延長二抗來源的動物免疫血清封閉時間和適當(dāng)增加濃度來加強封閉效果；
（5）縮短DAB孵育時間或降低DAB濃度/過氧化氫濃度等；
（6）適當(dāng)增加PBS沖洗次數(shù)和浸洗時間，在一抗、二抗或SP孵育之后的浸洗尤為重要；
（7）防止標(biāo)本染色過程中出現(xiàn)干片，這容易增強非特異性著色。 免疫組化技術(shù)的原理、分類和優(yōu)點！內(nèi)蒙古做得好的免疫組化外包
免疫組化結(jié)果分析是什么？貴州病理免疫組化注意事項
免疫組化結(jié)果要如何分析？
（1）陽性著色細胞計數(shù)法。在40*光鏡下，隨機選擇不重疊的10個視野，機器或人工計數(shù)陽性著色細胞，每組3~6張不同動物組織切片，然后進行組間比較即可。
（2）灰密度分析法?？梢酝ㄟ^在不同組別和不同動物組織切片上選擇相同區(qū)域、相同條件下用image j進行灰密度分析，然后進行統(tǒng)計分析即可。
（3）評分法。用光學(xué)顯微鏡下對組織切片分別按染色程度（0~3分為陰性著色、淡黃色、淺褐色、深褐色）、陽性范圍進行評分（1~4分為0~25%、26~50%、51~75%、76~100%），**終可以分?jǐn)?shù)相加，再進行比較。對于以上這幾種方法，各有利弊，請細心選擇。要想得到正確結(jié)果的前提是你要做出著色均勻、背景很淺的高質(zhì)量切片。
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