HE染色多聚甲醛保存組織的注意事項(xiàng):多聚甲醛放置過久其中的醛基可能會(huì)被氧化為酸,使溶液pH降低,從而影響染色。不同細(xì)胞或組織樣品所需的固定時(shí)間有所不同,應(yīng)當(dāng)根據(jù)細(xì)胞或組織的種類以及組織塊的大小來調(diào)整固定時(shí)間。多聚甲醛雖然作用溫和,但能硬化組織,固定時(shí)間過久會(huì)導(dǎo)致組織變脆,切片時(shí)易碎。因此固定時(shí)間通常不宜超過24小時(shí)。多聚甲醛可長(zhǎng)期存在于固定過的細(xì)胞或組織樣品中,固定完成后用適當(dāng)?shù)南礈煲夯蛩疀_洗數(shù)小時(shí)仍會(huì)有殘留,因此后續(xù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果如果受醛基影響,須盡量洗去殘留的多聚甲醛。醛基與抗原蛋白的氨基交聯(lián)形成羧甲基,使抗原決定簇的三維構(gòu)象出現(xiàn)空間障礙。分子間交聯(lián)形成的網(wǎng)格結(jié)構(gòu)可能部分或完全掩蓋某些抗原決定簇,使之不能充分暴露,可造成假陰性的染色,影響免疫組化結(jié)果。因此,4%多聚甲醛固定的細(xì)胞或組織樣品在進(jìn)行免疫組化檢測(cè)時(shí),有時(shí)需要對(duì)抗原先進(jìn)行修復(fù),然后才能進(jìn)行免疫染色等后續(xù)操作。HE染色,即是蘇木精-伊紅染色法,是形態(tài)學(xué)比較常用的染色方法。浙江推薦的HE染色價(jià)格
HE染色伊紅著色淡分析及應(yīng)對(duì)原因:(1)伊紅染液的pH值可能大于5;(2)藍(lán)化液殘留過多;(3)切片太??;(4)切片經(jīng)伊紅染色后在乙醇脫水時(shí)間過長(zhǎng)。對(duì)策:檢查伊紅染液的pH值,如果必要的話,用乙酸將其調(diào)節(jié)在4~5之間,從而使伊紅染色彩艷麗。確保每次藍(lán)化步驟完成后,使用的弱堿性溶液被充分洗去,玻片上沒有殘留的弱堿性溶液。檢查切片的厚度。脫水時(shí)不要讓切片在低濃度乙醇停留時(shí)間過長(zhǎng),因?yàn)楹嗟牡蜐舛纫掖紩?huì)將伊紅的顏色分化掉。浙江推薦的HE染色價(jià)格HE染色取材和樣本保存方式。
HE染色在**染色中的應(yīng)用,小細(xì)胞肺*是肺*中分化程度比較低、惡性程度比較高的一種惡性**,生長(zhǎng)迅速,轉(zhuǎn)移較早,五年存活率*為1%-2%,預(yù)后非常差。其小細(xì)胞肺***細(xì)胞HE染色的特征,主要表現(xiàn)為組織結(jié)構(gòu),包括巢狀、小梁狀、實(shí)性片狀,常有菊形團(tuán)形成,*巢周圍的瘤細(xì)胞呈柵欄狀排列,*細(xì)胞較小,一般小于三個(gè)靜止的淋巴細(xì)胞,呈圓形、卵圓形或短梭形,胞質(zhì)稀少,胞界不清,核染色質(zhì)呈細(xì)顆粒狀,核仁缺乏或不明顯,核分裂象每十個(gè)高倍視野大于十一個(gè),常見大片狀壞死。
HE染色堿染料染主要使細(xì)胞核內(nèi)的染色質(zhì)與胞質(zhì)內(nèi)的核糖體著色。學(xué)上常用的一種染色方法為蘇木精 伊紅染色法。蘇木精 伊紅染色法 ( hematoxylin-eosin staining ) ,簡(jiǎn)稱HE染色法 ,石蠟切片技術(shù)里常用的染色法之一 。蘇木精染液為堿 ,主要使細(xì)胞核內(nèi)的染色質(zhì)與胞質(zhì)內(nèi)的核糖體著紫藍(lán)色 ;伊紅為酸染料 ,主要使細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞外基質(zhì)中的成分著紅色 。細(xì)胞核被蘇木精染成鮮明的藍(lán)色,軟骨基質(zhì)、鈣鹽顆粒呈深藍(lán)色,粘液呈灰藍(lán)色。細(xì)胞漿被伊紅染成深淺不同的粉紅色至桃紅色,胞漿內(nèi)嗜酸顆粒呈強(qiáng)的鮮紅色。膠原纖維呈淡粉紅色,力纖維呈亮粉紅色,紅血球呈橘紅色,蛋白液體呈粉紅色。HE染色,優(yōu)先南京英瀚斯生物。
HE染色構(gòu)成組織內(nèi)蛋白質(zhì)的氨基酸的種類很多,它們有不同的等電點(diǎn)。在普通染色法中,染色液的酸堿度為pH6左右,細(xì)胞內(nèi)的酸性物質(zhì)如細(xì)胞核的染色質(zhì)、腺細(xì)胞和神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)及透明軟骨基質(zhì)等均被堿性染料染色,這些物質(zhì)稱為嗜堿性。而細(xì)胞質(zhì)中的其它蛋白質(zhì)如紅細(xì)胞中的血紅蛋白、嗜酸粒細(xì)胞的顆粒及膠原纖維和肌纖維等被酸性染料染色,這些物質(zhì)稱為嗜酸型。如果改變?nèi)旧旱乃釅A度,pH值升高時(shí),則原來被酸性染料染色的物質(zhì)可變?yōu)槭葔A性;pH值降低時(shí),原來被堿性染料染色的物質(zhì)則可變?yōu)槭人嵝?。所以說染色液的pH值可以影響染色的反應(yīng)。關(guān)于HE染色,常用的結(jié)果分析原理。山西性價(jià)比高的HE染色檢測(cè)
HE染色原理 試劑 染色步驟 注意事項(xiàng) 。浙江推薦的HE染色價(jià)格
HE染色觀察細(xì)胞凋亡,凋亡檢測(cè)中形態(tài)學(xué)方法是**直觀、可靠的方法之一。對(duì)組織和各種細(xì)胞進(jìn)行染色后,在光學(xué)顯微鏡、熒光顯微鏡或電子顯微鏡下觀察,通過觀察細(xì)胞的形態(tài)或染色的類型來判斷凋亡的發(fā)生與否。細(xì)胞涂片或細(xì)胞甩片的制備:對(duì)于貼壁細(xì)胞,可將蓋玻片放于培養(yǎng)器皿中,讓培養(yǎng)細(xì)胞長(zhǎng)于玻片上,然后用藥物誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡后取出,用4%多聚甲醛固定5min。對(duì)于懸浮細(xì)胞,用藥物誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡后,離心1000r/min收集細(xì)胞,用PBS洗2次,收集調(diào)整細(xì)胞數(shù)為1X105/ml,涂片或用離心甩片,用4%多聚甲醛固定5min;在光學(xué)顯微鏡下,貼壁細(xì)胞由原來的梭形或多角形變小、變圓,核呈藍(lán)色或藍(lán)黑色,胞漿呈淡紅色,核固縮、破碎,形成凋亡小體等。懸浮細(xì)胞,整個(gè)細(xì)胞皺縮,核固縮,破碎,形成凋亡小體,染色質(zhì)顏色加深等。浙江推薦的HE染色價(jià)格