HE染色細胞核灰藍原因：（1）組織處理溫度過高、過熱，在石蠟停留的時間過長；（2）固定時間太短，接下來就直接在高濃度的乙醇中行脫水處理。對策：理論上來說，加熱處理*在組織浸蠟步驟才使用，組織不能在熱的蠟液中停留過長時間。如果由于某些原因不能進行下步包埋處理，完成浸蠟處理后的組織，可將組織連同塑料包埋盒一并放置在室溫空氣中，冷卻凝固，以備包埋。待需要包埋時再重新加溫直至石蠟融化即可。組織在處理前必須確保固定良好，脫水比較好能從低濃度的乙醇開始。HE染色的實驗?zāi)康囊约皩嶒灲Y(jié)果分析。河北質(zhì)量好的HE染色

HE染色標本一般是針對石蠟標本，脂滴和石蠟都是的有機物， 都具有非極，脂滴應(yīng)該可以溶解石蠟的。 HE染色就是用蘇木精和伊紅對細胞內(nèi)的核糖體和細胞質(zhì)染色的方法。 H:Hematoxylin，蘇木精 E:Eosin，伊紅 蘇木精（Hematoxylin,H）是一種堿染料，可將細胞核和細胞內(nèi)核糖體染成藍紫色，被堿染料染色的結(jié)構(gòu)具有嗜堿。 伊紅（，E）是一種酸染料，能將細胞質(zhì)染成紅色或淡紅色，被酸染料染色的結(jié)構(gòu)具有嗜酸。染色前，須用二甲苯脫去切片中的石蠟，再經(jīng)由高濃度到低濃度酒精，***入蒸餾水，就可染色。南京英瀚斯生物內(nèi)蒙古比較好的HE染色公司專業(yè)的HE染色服務(wù)平臺，南京英瀚斯生物。

HE染色原理：一、細胞核染色原理：蘇木精為堿性天然染料，可使細胞核著色。細胞核內(nèi)染色質(zhì)的成分主要是DNA，在DNA的雙螺旋結(jié)構(gòu)中，兩條核苷酸鏈上的磷酸基向外。使DNA雙螺旋的外側(cè)帶負電荷，呈酸性，很容易與帶正電荷的蘇木精堿性燃料以離子鍵或氫鍵結(jié)合而被染色。蘇木精在堿性溶液中呈藍色，所以細胞核被染成藍色。二、細胞漿染色原理：細胞漿內(nèi)主要成分是蛋白質(zhì)，為兩性化合物、細胞漿的染色與pH值有密切關(guān)系，當pH調(diào)到蛋白質(zhì)等電點4.7-5.0時，胞漿對外不顯電性，此時酸或堿性染料不易染色。當pH調(diào)到6.7-6.8時，大于蛋白質(zhì)的等電點pH值，表現(xiàn)酸性電離，而帶負電荷的陰離子，可被帶正電荷的染料染色，現(xiàn)時胞核也被染色，核和胞漿難以區(qū)分。因此必須把pH調(diào)至胞漿等電點以下，在染液中加入醋酸使胞漿帶正電荷（陽離子），就可被帶負電荷（陰離子）的染料染色。伊紅Y是一種化學(xué)合成的酸性染料，在水中離解成帶負電荷的陰離子，與蛋白質(zhì)的氨基正電荷（陽離子）結(jié)合而使細胞漿染色，細胞漿、紅細胞、肌肉、結(jié)締組織，嗜伊紅顆料等被***成不同程度的紅色或粉紅色，與藍色的細胞核形成鮮明的對比

HE染色常見問題：Q3：細胞核染色過淺，顏色暗淡答：切片在蘇木素染液中停留過短，或蘇木素過度氧化失效，或分化時間太長。對策：重新染色。將組織切片放入0.01%氫氧化鈉、0.5%氨水、飽和的碳酸氫鈉溶液、乙醇溶液，每個3-5min即可，接著重新染色?？梢赃m當?shù)亟M織的嗜堿性以增強核染色，如Zenker液固定的切片可放入5%碳酸氫鈉溶液中3h，自來水沖洗5-10min染色，或Bouin液固定的切片可放入5%碳酸氫鈉溶液中1h，自來水沖洗10min染色。Q4：細胞核染色過深，胞漿著藍色答：切片在蘇木素染液中停留過長；或切片太厚；或分化時間太短。這種情況首先鏡下看看切片厚度(比較好厚度1-2層細胞核)，要么重新染色，要么重新制片。南京英瀚斯，專業(yè)的病理染色實驗服務(wù)平臺。HE染色，即是蘇木精-伊紅染色法，是形態(tài)學(xué)比較常用的染色方法。

HE染色實驗步驟：（1）樣品制備：對于貼壁生長細胞，胰酶消化，調(diào)整細胞濃度約1×105/ml，滴加于蓋玻片上(置于6孔板中)，培養(yǎng)相應(yīng)時間后，取出細胞爬片，用PBS洗滌3次。（2）樣品固定：95%乙醇固定20min，PBS洗滌2次，每次1min。（3）染核：蘇木素染液染色2-3min，自來水洗滌。（4）分色：鏡下觀察，若細胞核染色過深，用1%鹽酸酒精溶液分色數(shù)秒，自來水洗滌。（5）染胞質(zhì)：浸入伊紅染液染色1min，自來水洗滌。（6）吹干或自然晾干細胞爬片后，中性樹膠封片。若細胞用4%多聚甲醛固定，則染色時間相應(yīng)延長，蘇木素染色12-15min，伊紅5min即可HE染色取材和樣本保存方式。河北質(zhì)量好的HE染色

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HE染色注意事項：1．組織切片的脫蠟步驟應(yīng)徹底，否則無論進行那種染色都會發(fā)生困難。脫蠟時間要充分，若溶蠟劑使用過久應(yīng)及時更換以免效率降低，若室溫過低，可將溶蠟劑置于溫箱中進行脫蠟。  2．蘇木素染液使用一段時間后表面易出現(xiàn)亮晶狀飄浮物，這可能是液體表面的過氧化物，必須過濾除去，以防沉渣污染組織切片。蘇木素液一般染過三、四百張切片后，著色力會減弱，著色不鮮艷，呈灰藍色時應(yīng)及時更換新液。  3．染色的時間長短需依據(jù)：染劑對組織的染色作用，室溫條件，切片厚薄，固定液的類別，染液的新舊而進行調(diào)節(jié)。所以在染色時必須使用顯微鏡觀察染色程度以利掌握時間。  4．分化十分重要。分化步驟的準確也是染色成敗的關(guān)鍵，若分化失當則必然引起染色不勻或過淡，過深等現(xiàn)象，因此分化后一定要鏡檢，觀察胞核是否清晰，胞漿呈淡白色。否則需再次分化，不然一旦復(fù)染后，組織會呈紫藍色即“藍蓋紅”現(xiàn)象。  5．還原液不宜過濃，若堿性太強易使組織脫落故以淡為宜。  6．伊紅宜淡染，復(fù)染過深胞核會不清晰，影響鏡檢。 河北質(zhì)量好的HE染色