免疫組化的結(jié)果分析:
免疫組化實(shí)驗(yàn)通常需要設(shè)置陽性對(duì)照、陰性對(duì)照(或替代對(duì)照)(陽性對(duì)照是排除方法和實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)有無問題;陰性對(duì)照與替代對(duì)照是排除有無非特異性染色)。一般情況下,陽性對(duì)照顏色的特點(diǎn)為:Ag定位,包漿、胞核、胞膜、間質(zhì)具有結(jié)構(gòu)性。且染色的強(qiáng)度不同(顏色深淺不一);陰性對(duì)照的特點(diǎn)為:染色細(xì)胞與組織無區(qū)別,顏色具有彌散性,分布均勻。
英瀚斯生物可承接各類病理染色,包括免疫組化。
說明:免疫組化實(shí)驗(yàn)可以對(duì)結(jié)果進(jìn)行定量分析,但要實(shí)驗(yàn)得到的必須是高質(zhì)量的染色切片,要求背景染色淺且特異性染色較深,這樣分析的結(jié)果才會(huì)比較準(zhǔn)確。 免疫組化protocol,詳情請(qǐng)看英瀚斯生物官網(wǎng)。福建動(dòng)物組織免疫組化多少錢
免疫組化分類中免疫酶標(biāo)方法,英瀚斯生物為您介紹。免疫酶標(biāo)方法是繼免疫熒光后,于60年代發(fā)展起來的技術(shù)?;驹硎窍纫悦笜?biāo)記的抗體與組織或細(xì)胞作用,然后加入酶的底物,生成有色的不溶性產(chǎn)物或具有一定電子密度的顆粒,通過光鏡或電鏡,對(duì)細(xì)胞表面和細(xì)胞內(nèi)的各種抗原成分進(jìn)行定位研究。免疫酶標(biāo)技術(shù)是目前定位準(zhǔn)確、對(duì)比度好、染色標(biāo)本可長(zhǎng)期保存,適合于光、電鏡研究等。免疫酶標(biāo)方法的發(fā)展非常迅速,已經(jīng)衍生出了多種標(biāo)記方法,目前在病理診斷中廣為使用的當(dāng)屬***法(過氧化物酶-抗過氧化物酶)、ABC法(卵白素-生物素-過氧化物酶復(fù)合物)、SP法(鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶)、即用型二步法(聚合物鏈接)等。浙江組織免疫組化英瀚斯生物,可做免疫組化定量分析。
免疫組化在什么情況下進(jìn)行組織抗原修復(fù),抗原修復(fù)的條件是什么?
(1)由于組織中部分抗原在甲醛或多聚甲醛固定過程中,發(fā)生了蛋白之間交聯(lián)及醛基的封閉作用,從而失去抗原性。通過抗原修復(fù),使得細(xì)胞內(nèi)抗原決定族重新暴露,提高抗原檢測(cè)率。
(2)修復(fù)方法從強(qiáng)到弱一般分為三種,高壓修復(fù)、微波修復(fù)、胰酶修復(fù)。修復(fù)液也分為若干種(具體的可以查閱相關(guān)資料,大量的:中性的、高pH的等)。
(3)微波修復(fù),我們一般用6min*4次,效果不錯(cuò)。
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免疫組化染色呈陰性結(jié)果的原因有哪些?
1、抗體濃度和質(zhì)量問題以及抗體來源選擇錯(cuò)誤。不是抗體濃度越高就越易出現(xiàn)陽性結(jié)果,抗原抗體反應(yīng)有前帶和后帶效應(yīng),必須摸索比較好濃度。
2、抗原修復(fù)不全,對(duì)于甲醛固定的組織必須用充分抗原修復(fù)來打開抗原表位,以利于與抗體結(jié)合;建議微波修復(fù)用高火4次*6min試試。有人做過實(shí)驗(yàn),這是比較好的時(shí)間和次數(shù)。若不行,還可高壓修復(fù)。
3、組織切片本身這種抗原含量低。
4、血清封閉時(shí)間過長(zhǎng)。
5、DAB孵育時(shí)間過短。
6、細(xì)胞通透不全,抗體未能充分進(jìn)入胞內(nèi)參與反應(yīng)。
7、開始做免疫組化,建議一定要首先做個(gè)陽性對(duì)照片,排除抗體等問題。 做好免疫組化,你需要了解這些!
免疫組化有哪幾種分類 ?
1)按標(biāo)記物質(zhì)的種類,如熒光染料、放射性同位素、酶(主要有辣根過氧化物酶和堿性磷酸酶)、鐵蛋白、膠體金等,可分為免疫熒光法、放射免疫法、免疫酶標(biāo)法和免疫金銀法等。
2)按染色步驟可分為直接法(又稱一步法)和間接法(二步、三步或多步法)。與直接法相比,間接法的靈敏度提高了許多。
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3)按結(jié)合方式可分為抗原-抗體結(jié)合,如過氧化物酶-抗過氧化物酶(***)法;親和連接,如卵白素-生物素-過氧化物酶復(fù)合物(ABC)法、鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶連結(jié)(SP)法等,其中SP法是比較常用的方法;聚合物鏈接,如即用型二步法,此方法尤其適合于內(nèi)源性生物素含量高的組織抗原檢測(cè)。 免疫組化流程是什么樣的?福建病理免疫組化實(shí)驗(yàn)
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免疫組化的局限性。靈敏度高、精確性和特異性是一種理想的cancer標(biāo)記物必須具有的,但至今所發(fā)現(xiàn)的cancer標(biāo)記物還沒有能完全滿足這些標(biāo)準(zhǔn)。某些正常細(xì)胞也分泌一些cancer標(biāo)記物,因此cancer細(xì)胞學(xué)并不是單獨(dú)產(chǎn)生一種標(biāo)記物,即選用一組抗體比單一抗體更有利。在cancer診斷中評(píng)估免疫組化的局限性主要在抗體特異性和解釋方面。在免疫組化操作中都必須有適當(dāng)?shù)年栃耘c陰性對(duì)照,作為技術(shù)完整性質(zhì)量控制,如對(duì)照組被忽略或不理想時(shí),免疫組化染色的結(jié)果要謹(jǐn)慎對(duì)待,免疫組化的正確結(jié)果不僅要依靠技術(shù)步驟上規(guī)范化操作,而且有賴于正確的解釋,在報(bào)告免疫組化染色結(jié)果時(shí)不應(yīng)孤立地解釋,應(yīng)考慮到診斷與鑒別診斷、所應(yīng)用的抗體特性、所研究組織性質(zhì),同時(shí)還要注意假陽性與假陰性結(jié)果的干擾。福建動(dòng)物組織免疫組化多少錢