目前幾種常用免疫組化方法簡單介紹
1）免疫熒光方法是**早建立的免疫組織化學技術(shù)。由于免疫熒光技術(shù)特異性強、靈敏度高、快速簡便，所以在臨床病理診斷、檢驗中應(yīng)用較廣。它利用抗原抗體特異性結(jié)合的原理，先將已知抗體標上熒光素，以此作為探針檢查細胞或組織內(nèi)的相應(yīng)抗原，在熒光顯微鏡下觀察。當抗原抗體復(fù)合物中的熒光素受激發(fā)光的照射后即會發(fā)出一定波長的熒光，從而可確定組織中某種抗原的定位，進而還可進行定量分析。
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2）免疫酶標方法免疫酶標方法是繼免疫熒光后，于60年代發(fā)展起來的技術(shù)?；驹硎窍纫悦笜擞浀目贵w與組織或細胞作用，然后加入酶的底物，生成有色的不溶性產(chǎn)物或具有一定電子密度的顆粒，通過光鏡或電鏡，對細胞表面和細胞內(nèi)的各種抗原成分進行定位研究。免疫酶標技術(shù)是目前**常用的技術(shù)。本方法與免疫熒光技術(shù)相比的主要優(yōu)點是：定位準確，對比度好，染色標本可長期保存，適合于光、電鏡研究等。免疫酶標方法的發(fā)展非常迅速，已經(jīng)衍生出了多種標記方法，且隨著方法的不斷改進和創(chuàng)新，其特異性和靈敏度都在不斷提高，使用也越來越方便。目前在病理診斷中廣為使用的有ABC法、SP三步法、即用型二步法檢測系統(tǒng)等。
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免疫組化的局限性。靈敏度高、精確性和特異性是一種理想的cancer標記物必須具有的，但至今所發(fā)現(xiàn)的cancer標記物還沒有能完全滿足這些標準。某些正常細胞也分泌一些cancer標記物，因此cancer細胞學并不是單獨產(chǎn)生一種標記物，即選用一組抗體比單一抗體更有利。在cancer診斷中評估免疫組化的局限性主要在抗體特異性和解釋方面。在免疫組化操作中都必須有適當?shù)年栃耘c陰性對照，作為技術(shù)完整性質(zhì)量控制，如對照組被忽略或不理想時，免疫組化染色的結(jié)果要謹慎對待，免疫組化的正確結(jié)果不僅要依靠技術(shù)步驟上規(guī)范化操作，而且有賴于正確的解釋，在報告免疫組化染色結(jié)果時不應(yīng)孤立地解釋，應(yīng)考慮到診斷與鑒別診斷、所應(yīng)用的抗體特性、所研究組織性質(zhì)，同時還要注意假陽性與假陰性結(jié)果的干擾。吉林病理免疫組化注意事項有沒有推薦的免疫組化外包公司？
在臨床應(yīng)用中，免疫組化還可以進一步分類不同qi官與組織交界處cancer。由于重疊的特征，在一些組織qi官交界處的cancer，只憑組織學基礎(chǔ)對cancer進行分類很困難。如胃腸道梭形細胞肉瘤是肌肉起源的平滑肌肉瘤，是間質(zhì)起源的胃腸道間質(zhì)瘤(GIST)，還是神經(jīng)起源的神經(jīng)鞘瘤;同樣發(fā)生于組織交界處的cancer有睪丸胚胎cancer與精原細胞cancer，兩者較難區(qū)別，且醫(yī)療與預(yù)后明顯的不同，但用免疫組化檢測角蛋白就較易于區(qū)別:角蛋白陰性則為精原細胞cancer，而角蛋白陽性則為胚胎cancer。
病理醫(yī)師日常工作中經(jīng)常說的一句話應(yīng)該就是“做個免疫組化吧”；不管是臨床醫(yī)師，還是患者，他們問的多的問題則是“為什么要做免疫組化？”病理醫(yī)師通過“特殊染色”來進行細胞的識別。這一做法的依據(jù)是特定細胞和組織中的成分不同、則化學性質(zhì)不同，通過染色的方法則可以呈現(xiàn)不同顏色。不過，由于組織固定或儲存等，會造成相應(yīng)物質(zhì)的活性降低甚至消失，因而限制了特殊染色方法的應(yīng)用。隨著免疫學研究的進展，根據(jù)抗原與相應(yīng)抗體間特異性結(jié)合的性質(zhì)，則有了現(xiàn)在免疫組化的方法：不同細胞、不同組織中抗原有一定差異，抗體與被測組織中的特定抗原結(jié)合，進而通過一定顯色方法將結(jié)合的抗體顯示出來。如有相應(yīng)顯色，則證實可能有被測抗原；無顯色則可能無被測抗原。當然，這一方法中需注意相應(yīng)的“例外”，如抗體的非特異性結(jié)合、非特異性顯色，則容易造成“假陽性”；或者雖有相關(guān)抗原、但所用抗體與該抗原并未結(jié)合等，則容易造成“假陰性”。隨著免疫組化的應(yīng)用經(jīng)驗的增加，這些問題在常規(guī)應(yīng)用中盡量得以避免，前者如各種顯色方法的優(yōu)化；后者如抗原修復(fù)方法的優(yōu)化、新型抗體開發(fā)及選擇。臨床樣本檢測，免疫組化，英瀚斯生物專業(yè)病理。
免疫組化分類中，免疫熒光方法，英瀚斯生物為您進行介紹。一開始建立的免疫組織化學技術(shù)。它利用抗原抗體特異性結(jié)合的原理，先將已知抗體標上熒光素，以此作為探針檢查細胞或組織內(nèi)的相應(yīng)抗原，在熒光顯微鏡下觀察。當抗原抗體復(fù)合物中的熒光素受激發(fā)光的照射后即會發(fā)出一定波長的熒光，從而可確定組織中某種抗原的定位，進而還可進行定量分析。由于免疫熒光技術(shù)特異性強、靈敏度高、快速簡便，所以在臨床病理診斷、檢驗中應(yīng)用比較廣。免疫組化方法步驟是什么？吉林病理免疫組化注意事項
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免疫組化實驗流程介紹：
英瀚斯生物為您整理總結(jié)免疫組化詳細步驟：
1、SP三步法
1）石蠟切片，常規(guī)脫蠟至水。
2）0.3%或3%H2O2去離子水（無色液體）孵育10-30分鐘，以滅活內(nèi)源性過氧化物酶活性。
3）蒸餾水沖洗，PBS浸泡5分鐘
4）候選步驟：采用抗原修復(fù)：微波（建議30分鐘內(nèi)4次中火）、高壓、酶修復(fù)方法。自然冷卻，再用3分鐘×3次.
5）血清封閉：室溫15-30分鐘，盡可能與二抗來源一致。傾去，勿洗。
6）滴加適當比例稀釋的一抗，37℃孵育2~3小時或4℃過夜（比較好復(fù)溫）。PBS沖洗，3分鐘×5次。
7）滴加生物素標記的二抗，室溫或37℃孵育30分鐘-1h。
8）PBS沖洗，3分鐘×5次。
9）滴加SP（鏈霉親和素-過氧化物酶），室溫或37℃孵育30分鐘-1h。
10）PBS沖洗，3分鐘×5次。
11）顯色劑顯色（DAB等）。
12）自來水充分沖洗。
13）可進行復(fù)染，脫水，透明。
14）選擇適當?shù)姆馄瑒┓馄?吉林病理免疫組化注意事項
