免疫組化應(yīng)該選擇石蠟切片還是冰凍切片？
（1）要求做冰凍切片的不一定能做石蠟切片，這是***我向一老師請教得出的結(jié)論。因為作石蠟切片時要高溫烤片，可能會破壞組織的抗原性，如果組織的抗原性較穩(wěn)定，則可作石蠟切片；但是要求做石蠟切片的，可作冰凍切片。
（2）冰凍切片的優(yōu)點(diǎn)是能夠較好的保存組織的抗原免疫活性，做免疫組化時不需抗原修復(fù)這一步。缺點(diǎn)是細(xì)胞內(nèi)易形成冰晶而破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu)，可能會使抗原彌散；切片厚度較石蠟的厚，做的片子沒石蠟的漂亮。當(dāng)你買一抗時，目錄上都寫著做什么樣的切片，如果它寫著只能做冰凍，就不能做石蠟，如寫著兩者都可，那就都能做。
（3）石蠟切片的優(yōu)點(diǎn)可以保持組織細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)，且容易存放在室溫，而冰凍切片比較麻煩，一定要存在-80度的低溫冰箱中，尤其是用來做原位雜交的的切片，為了防止RNA降解，保存一貫很重要。由于石蠟切片可以切到4微米左右，所以原位雜交探針容易滲透到組織中去，容易成功，而且得到的顏色/形態(tài)都較冰凍切片好。
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免疫組化染色切片的好壞直接影響著病理醫(yī)生對其染色結(jié)果的判斷，進(jìn)而影響病理診斷，所以制作一張良好的免疫組化切片至關(guān)重要，它需要病理醫(yī)生與病理技師兩者間的相互協(xié)調(diào)，密切配合和共同努力，病理醫(yī)生選擇抗體，設(shè)置對照，判讀結(jié)果，指導(dǎo)技術(shù);而技術(shù)人員進(jìn)行實驗操作，保證染色質(zhì)量。在免疫組化切片的制作過程存在多個環(huán)節(jié)，每一環(huán)節(jié)的失誤都可能影響檢測結(jié)果，如抗原保存，蛋白酶消化，增強(qiáng)技術(shù)及對抗體的管理、使用和試劑的濃度等等，因此制作一張高質(zhì)量的免疫組織化學(xué)切片是多方面相互配合的結(jié)果。新疆小鼠免疫組化注意事項英瀚斯生物為您詳解免疫組化實驗指南！
在臨床應(yīng)用中，免疫組化還可以進(jìn)一步分類不同qi官與組織交界處cancer。由于重疊的特征，在一些組織qi官交界處的cancer，只憑組織學(xué)基礎(chǔ)對cancer進(jìn)行分類很困難。如胃腸道梭形細(xì)胞肉瘤是肌肉起源的平滑肌肉瘤，是間質(zhì)起源的胃腸道間質(zhì)瘤(GIST)，還是神經(jīng)起源的神經(jīng)鞘瘤;同樣發(fā)生于組織交界處的cancer有睪丸胚胎cancer與精原細(xì)胞cancer，兩者較難區(qū)別，且醫(yī)療與預(yù)后明顯的不同，但用免疫組化檢測角蛋白就較易于區(qū)別:角蛋白陰性則為精原細(xì)胞cancer，而角蛋白陽性則為胚胎cancer。
免疫組化的DAB顯色時間如何把握？
1、DAB顯色時間不是固定的，主要由顯微鏡下控制顯色時間，到出現(xiàn)淺棕色本底時即可沖洗；
2、DAB顯色時間很短（如幾秒或幾十秒）就出現(xiàn)很深的棕褐色，這很可能說明你的抗體濃度過高或抗體孵育時間過長，需要下調(diào)抗體濃度或縮短你的抗體孵育時間；
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3、此外，若很短時間就出現(xiàn)背景很深，還有可能你前面的封閉非特異性蛋白不全，需要延長封閉時間；
4、DAB顯色時間很長（如超過十幾分鐘）才出現(xiàn)陽性染色，一方面可能說明你的抗體濃度過低或孵育時間過短（比較好一抗4度過夜）；另一方面就是封閉時間過長。 英瀚斯生物自有專業(yè)病理染色實驗室，可做免疫組化。
免疫組化染色呈陰性結(jié)果的原因有哪些？
1、抗體濃度和質(zhì)量問題以及抗體來源選擇錯誤。不是抗體濃度越高就越易出現(xiàn)陽性結(jié)果，抗原抗體反應(yīng)有前帶和后帶效應(yīng)，必須摸索比較好濃度。
2、抗原修復(fù)不全，對于甲醛固定的組織必須用充分抗原修復(fù)來打開抗原表位，以利于與抗體結(jié)合；建議微波修復(fù)用高火4次*6min試試。有人做過實驗，這是比較好的時間和次數(shù)。若不行，還可高壓修復(fù)。
3、組織切片本身這種抗原含量低。
4、血清封閉時間過長。
5、DAB孵育時間過短。
6、細(xì)胞通透不全，抗體未能充分進(jìn)入胞內(nèi)參與反應(yīng)。
7、開始做免疫組化，建議一定要首先做個陽性對照片，排除抗體等問題。 做免疫組化需要多少錢？新疆小鼠免疫組化注意事項
做免疫組化的目的是什么？云南做得好的免疫組化要多久
免疫組化如何比較大限度地降低組織非特異性染色？
（1）縮短一抗/二抗孵育時間、稀釋抗體來控制。這是重要的一條。
（2）一抗用多克隆抗體易出現(xiàn)非特異性著色，建議試用單克隆抗體看看。
（3）內(nèi)源性過氧化物酶和生物素在肝臟、腎臟等組織含量很高（含血細(xì)胞多的組織），需要通過延長滅活時間和增加滅活劑濃度來降低背景染色；
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（4）非特異性組分與抗體結(jié)合，這需要通過延長二抗來源的動物免疫血清封閉時間和適當(dāng)增加濃度來加強(qiáng)封閉效果；
（5）縮短DAB孵育時間或降低DAB濃度/過氧化氫濃度等；
（6）適當(dāng)增加PBS沖洗次數(shù)和浸洗時間，在一抗、二抗或SP孵育之后的浸洗尤為重要；
（7）防止標(biāo)本染色過程中出現(xiàn)干片，這容易增強(qiáng)非特異性著色。 云南做得好的免疫組化要多久
