HE染色原理:易于被堿性或酸性染料著色的性質(zhì)稱(chēng)為嗜堿性(basophilia)和嗜酸性(acidophilia);而對(duì)堿性染料和酸性染料親和力都比較弱的現(xiàn)象稱(chēng)為中性(neutrophilia)。構(gòu)成組織內(nèi)蛋白質(zhì)的氨基酸的種類(lèi)很多,它們有不同的等電點(diǎn)。在普通染色法中,染色液的酸堿度為pH6左右,細(xì)胞內(nèi)的酸性物質(zhì)如細(xì)胞核的染色質(zhì)、腺細(xì)胞和神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)及透明軟骨基質(zhì)等均被堿性染料染色,這些物質(zhì)稱(chēng)為嗜堿性。而細(xì)胞質(zhì)中的其它蛋白質(zhì)如紅細(xì)胞中的血紅蛋白、嗜酸粒細(xì)胞的顆粒及膠原纖維和肌纖維等被酸性染料染色,這些物質(zhì)稱(chēng)為嗜酸型。如果改變?nèi)旧旱乃釅A度,pH值升高時(shí),則原來(lái)被酸性染料染色的物質(zhì)可變?yōu)槭葔A性;pH值降低時(shí),原來(lái)被堿性染料染色的物質(zhì)則可變?yōu)槭人嵝?。所以說(shuō)染色液的pH值可以影響染色的反應(yīng)。脫氧核糖核酸(DNA)兩條鏈上的磷酸基向外,帶負(fù)電荷,呈酸性,很容易與帶正電荷的蘇木精堿性染料以離子鍵結(jié)合而被染色。蘇木精在堿性溶液中呈藍(lán)色,所以細(xì)胞核被染成藍(lán)色。冰凍切片是否可以做HE染色?甘肅病理HE染色
HE染色石蠟和冰凍切片樣本的處理,樣品處理:a.對(duì)于石蠟切片:二甲苯中脫蠟5-10分鐘;換用新鮮的二甲苯,再脫蠟5-10分鐘;無(wú)水乙醇5分鐘;90%乙醇2分;70%乙醇2分鐘;蒸餾水2分鐘.b.對(duì)于冰凍切片:蒸餾水2分鐘。c對(duì)于培養(yǎng)細(xì)胞:用4%多聚甲醛固定10分鐘以上。蒸餾水洗滌2分鐘。換用新鮮的蒸餾水,再洗滌2分鐘。蘇木素伊紅(HE)染色對(duì)于上述處理好的樣品:蘇木素染色液染色5-10分鐘(可以根據(jù)染色結(jié)果和要求調(diào)整時(shí)間)。浸自來(lái)水中沖洗去多余的染色液,約10分鐘。蒸餾水再洗滌一遍(數(shù)秒鐘)。95%乙醇5秒。伊紅染色液染色30秒-2分鐘(可以根據(jù)染色結(jié)果和要求調(diào)整時(shí)間)。此時(shí),如果需要直接觀察,可以用70%乙醇洗滌2次。如需脫水、透明后封片按后續(xù)步驟進(jìn)行,70%乙醇洗滌后仍可按照后續(xù)步驟進(jìn)行脫水、透明和封片處理。甘肅病理HE染色HE染色結(jié)果如果使用計(jì)算機(jī)分析軟件分析?
HE染色主要是為通細(xì)胞及胞核形態(tài)、大小來(lái)區(qū)別各種細(xì)胞的,并不是直接通過(guò)顏色來(lái)區(qū)分的蘇木精染液為堿性,主要使細(xì)胞核內(nèi)的染色質(zhì)與胞質(zhì)內(nèi)的核糖體著紫藍(lán)色;伊紅為酸性染料,主要使細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞外基質(zhì)中的成分著紅色.炎性細(xì)胞一類(lèi)人體內(nèi)的免疫細(xì)胞,包括中性粒細(xì)胞、嗜酸粒細(xì)胞、單核巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和漿細(xì)胞.淋巴細(xì)胞是**容易和其它幾種細(xì)胞區(qū)分的,細(xì)胞小而圓,核漿比很大,核濃染成深藍(lán)紫色.漿細(xì)胞大小介于淋巴細(xì)胞和巨噬/多核/巨細(xì)胞之間,胞漿略嗜堿,核偏位,核染色深,高倍鏡下可見(jiàn)核呈車(chē)輪狀.多核細(xì)胞和巨細(xì)胞的概念是不是有點(diǎn)重疊,多核細(xì)胞故名思意是有多個(gè)核的大型細(xì)胞,如朗漢氏巨細(xì)胞,常在肺結(jié)核的干酪樣壞死灶周?chē)霈F(xiàn),多個(gè)核排成一圈,異物巨細(xì)胞也是有許多個(gè)核的體積巨大的細(xì)胞,這兩種巨細(xì)胞胞質(zhì)都偏酸.巨噬細(xì)胞似乎在不同的組織中有不同的名稱(chēng).
HE染色全名蘇木精—伊紅染色法,屬于化學(xué)染色法,其主要依靠蘇木精染液為堿性,主要使細(xì)胞核內(nèi)的染色質(zhì)與胞質(zhì)內(nèi)的核糖體著紫藍(lán)色;伊紅為酸性染料,主要使細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞外基質(zhì)中的成分著紅色。實(shí)驗(yàn)過(guò)程:1、石蠟切片脫蠟至水:依次將切片放入二甲苯Ⅰ20min-二甲苯Ⅱ20min-無(wú)水乙醇Ⅰ5min-無(wú)水乙醇Ⅱ5min-75%酒精5min,自來(lái)水洗。2、蘇木素染色:切片入蘇木素染液染3-5min,自來(lái)水洗,分化液分化,自來(lái)水洗,返藍(lán)液返藍(lán),流水沖洗。3、伊紅染色:切片依次入85%、95%的梯度酒精脫水各5min,入伊紅染液中染色5min。4、脫水封片:切片依次放入無(wú)水乙醇I5min-無(wú)水乙醇II5min-無(wú)水乙醇Ⅲ5min-二甲Ⅰ5min-二甲苯Ⅱ5min透明,中性樹(shù)膠封片。5、顯微鏡鏡檢,圖像采集分析。結(jié)果判讀:細(xì)胞核呈藍(lán)色,細(xì)胞質(zhì)呈紅色HE染色 ,石蠟切片技術(shù)里常用的染色法之一。
HE染色觀察細(xì)胞凋亡,凋亡檢測(cè)中形態(tài)學(xué)方法是**直觀、可靠的方法之一。對(duì)組織和各種細(xì)胞進(jìn)行染色后,在光學(xué)顯微鏡、熒光顯微鏡或電子顯微鏡下觀察,通過(guò)觀察細(xì)胞的形態(tài)或染色的類(lèi)型來(lái)判斷凋亡的發(fā)生與否。細(xì)胞涂片或細(xì)胞甩片的制備:對(duì)于貼壁細(xì)胞,可將蓋玻片放于培養(yǎng)器皿中,讓培養(yǎng)細(xì)胞長(zhǎng)于玻片上,然后用藥物誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡后取出,用4%多聚甲醛固定5min。對(duì)于懸浮細(xì)胞,用藥物誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡后,離心1000r/min收集細(xì)胞,用PBS洗2次,收集調(diào)整細(xì)胞數(shù)為1X105/ml,涂片或用離心甩片,用4%多聚甲醛固定5min;在光學(xué)顯微鏡下,貼壁細(xì)胞由原來(lái)的梭形或多角形變小、變圓,核呈藍(lán)色或藍(lán)黑色,胞漿呈淡紅色,核固縮、破碎,形成凋亡小體等。懸浮細(xì)胞,整個(gè)細(xì)胞皺縮,核固縮,破碎,形成凋亡小體,染色質(zhì)顏色加深等。HE染色是組織學(xué)、病理學(xué)教學(xué)與科研中比較基礎(chǔ)、使用比較普遍的技術(shù)方法之一。廣東結(jié)果客觀的HE染色分析
HE染色試驗(yàn)技術(shù)及注意事項(xiàng)。甘肅病理HE染色
HE 染色是病理的主要常規(guī)染色,其命名是因?yàn)橹饕褂玫膬煞N試劑分別為Hematoxylin與Eosin Y,藉由電荷與吸附性的差異,組織結(jié)構(gòu)對(duì)不同染料的結(jié)合程度不同,我們可以發(fā)現(xiàn)Hematoxylin呈色在細(xì)胞核,Eosin Y則表現(xiàn)在細(xì)胞質(zhì)與間質(zhì),染色優(yōu)良的片子可以幫助我們?cè)陲@微鏡下看到清晰的細(xì)胞型態(tài)與變化。染色步驟依試劑提供者的建議而有所差異,而且每個(gè)實(shí)驗(yàn)室需要的顏色深淺不一,使用者可以依自己的需求另行調(diào)整,以下是力沛有限公司建議的HE染色步驟甘肅病理HE染色