做免疫組化時如何選擇一抗？

1、單克隆和多克隆抗體的選擇。由一種克隆產(chǎn)生的特異性抗體叫做單克隆抗體。單克隆抗體能目標明確地與單一的特異抗原決定簇結(jié)合，就像導(dǎo)彈精確地命中目標一樣。另一方面，即使是同一個抗原決定簇，在機體內(nèi)也可以由好幾種克隆來產(chǎn)生抗體，形成好幾種單克隆抗體混雜物，稱為多克隆抗體。在抗原抗體反應(yīng)中，一般單克隆抗體特異性強，但親和力相對小，檢測抗原靈敏度相對就低；而多克隆抗體特異性稍弱，但抗體的親和力強，靈敏度高，但易出現(xiàn)非特異性染色（可以通過封閉等避免）。

2、應(yīng)用范圍的選擇。有的一抗只能用于Westernblotting，或免疫組化、免疫熒光、免疫沉淀等；甚至標明石蠟切片或冰凍切片。

3、種屬反應(yīng)性的選擇（speciesreactivity）。這一點很重要，表明這種抗體可能存在種屬差別，且這種抗體適合檢測哪種種屬動物體內(nèi)的抗原。

4、種屬來源，一般兔來源的多是多克隆抗體；而小鼠來源的多是單克隆抗體，但也有另外。根據(jù)此來源來選擇相應(yīng)的二抗。

5、生產(chǎn)廠家的選擇。

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關(guān)于免疫組化，抗體和抗原之間的結(jié)合具有高度的特異性，免疫組織化學正是利用了這一原理。先將組織或細胞中的某種化學物質(zhì)提取出來，以此作為抗原或半抗原，通過免疫動物后獲得特異性的抗體，再以此抗體去探測組織或細胞中的同類的抗原物質(zhì)。由于抗原與抗體的復(fù)合物是無色的，因此還必須借助于組織化學的方法將抗原抗體結(jié)合的部位顯示出來，以其達到對組織或細胞中的未知抗原進行定性，定位或定量的研究。南京英瀚斯生物科技有限公司有設(shè)計免疫組化的實驗哦！如果您對此有希望了解更多，可以與我們聯(lián)系！河北大鼠免疫組化是什么在南京英瀚斯做的免疫組化，效果不錯！

免疫組化臨床應(yīng)用對“未分化”cancer的分類。未分化cancer包括cancer或肉瘤，在HE切片上由于cancer的“未分化”而缺少cancer細胞的起源特征不能分類，初步區(qū)分組織學類型用非特異性抗體，在其基礎(chǔ)上再選用特異性抗體做進一步鑒定。如分化差的cancer可顯示Vimentin或S-100蛋白，有時淋巴瘤可以表達上皮膜抗原，一些黑色素瘤表現(xiàn)出角蛋白，這同時也強調(diào)了在cancer診斷中應(yīng)使用一組抗體而不是單個抗體。如果您有實驗外包的需求，可以與我們南京英瀚斯生物進行聯(lián)系，我們也有做免疫組化的服務(wù)！

實驗失敗常見問題分析有哪些：

為什么在顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)所有的切片都成陰性？

答：這種現(xiàn)象主要是由操作不當導(dǎo)致，可能的原因有：1.染色操作不當，致使染色失??；2.漏加一種抗體或者制備出的抗體沒有活性；3.緩沖液中有疊氮化鈉，抑制了酶的活性；4.復(fù)染或脫水劑使用不當?shù)?。建議逐一排查，找到原因后重新進行實驗。

在顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)所有的切片都成陽性，這是為什么？答：與上一個問題類似，出現(xiàn)的原因也是試驗操作存在問題，可能的原因有：1.切片在染色過程中抗體過濃，或者干片了；使用的呈色底物溶液已變色或呈色反應(yīng)時間過長；3.抗體溫育的時間過長等。

在顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)切片的背景很深，這是為什么？答：以下幾方面會導(dǎo)致切片的背景過深：1.蛋白質(zhì)封閉不夠或所用血清溶血，造成抗體的非特異性反應(yīng)；2.內(nèi)源性過氧化酶沒有完全阻斷，顯色過程中過氧化酶與酶底物反應(yīng)，造成背景；3.底物呈色反應(yīng)時間過長或呈色反應(yīng)后漂洗不徹底。 英瀚斯生物，組織包埋、切片、染色、免疫組化拍照、報告分析，一站式搞定！

免疫組化實驗注意事項總結(jié)：

?本實驗室所用切片一般是石蠟切片。

?烘片：使蠟片水分蒸發(fā)，石蠟軟化，組織切片牢固貼在玻片上；烘片至跟烘片前透明度有差異。

?抗原修復(fù)時，使片子始終浸沒在修復(fù)液中，液體不能干。

?一抗孵育在37度培養(yǎng)箱，濕盒放置1h，省時間和結(jié)合效果好，不要超過1h，容易過染。

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?二抗使用：兩個二抗放大信號或一個二抗；若抗體信號強，可不用放大信號，盡量增大信噪比。

?10XDAB在常溫溶解，盡可能現(xiàn)用現(xiàn)配，放于4度儲存時間久了效果不佳。

?復(fù)水和脫水時所用的梯度酒精不可混用，要區(qū)分開。

?加抗體和顯色液時，都要將片子甩干，在半干半濕的狀態(tài)下再加，不然容易造成溶液的二次稀釋。

?整個操作過程中在顯色之前，一定不能干片。 免疫組化公司哪家好？江西靠譜免疫組化實驗

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確定cancer分期，免疫組化技術(shù)應(yīng)用于臨床可以進行處理哦，英瀚斯生物為您處理。cancer分期是判斷預(yù)后的一個指標，與是否浸潤、有無淋巴管或血管侵襲密切相關(guān)，而通過免疫組化方法可以判斷cancer是否浸潤、有無淋巴管或血管侵襲。層黏連蛋白和Ⅳ型膠原的單克隆抗體可以清楚的顯示基膜的主要成分，用于區(qū)分原位*和浸潤*，一旦上皮性*突破基膜為浸潤，未突破基膜為原位;顯示血管和淋巴管內(nèi)皮細胞的標記物第八因子相關(guān)蛋白、D2-40等則可清楚顯示cancer對血管或淋巴管的浸潤。因此對許多cancer的良惡性鑒別及有無血管或淋巴管浸潤，免疫組化結(jié)果作為主要的鑒別依據(jù)。安徽免疫組化要多久