免疫組化分類中,免疫熒光方法,英瀚斯生物為您進行介紹。一開始建立的免疫組織化學技術(shù)。它利用抗原抗體特異性結(jié)合的原理,先將已知抗體標上熒光素,以此作為探針檢查細胞或組織內(nèi)的相應抗原,在熒光顯微鏡下觀察。當抗原抗體復合物中的熒光素受激發(fā)光的照射后即會發(fā)出一定波長的熒光,從而可確定組織中某種抗原的定位,進而還可進行定量分析。由于免疫熒光技術(shù)特異性強、靈敏度高、快速簡便,所以在臨床病理診斷、檢驗中應用比較廣。英瀚斯生物實驗外包,多種病理染色熟練掌握,可做免疫組化!湖南病理免疫組化外包
免疫組化技術(shù)應用于臨床cancer良惡性的判斷,英瀚斯生物為您介紹。對于反應性增生還是cancer性增生,可用免疫球蛋白(Ig)的輕鏈抗體檢測B淋巴細胞增生的單克隆或多克隆性來區(qū)別。在濾泡反應性增生時,濾泡反應中心的細胞不表達細胞凋亡蛋白(bcl-2),bcl-2陰性;而在濾泡性淋巴瘤中,由于90%以上cancer性濾泡細胞有bcl-2的高表達,bcl-2陽性。而增殖細胞核抗原(PCNA),周期素(Cycling),核抗原(Ki-67)通過對cancer細胞增生的程度作出評價,從而提示增生細胞的良惡性。湖南小鼠免疫組化檢測英瀚斯生物,專業(yè)病理染色切片平臺,免疫組化效果好!
什么是免疫組化?免疫組化的原理是什么?
1、定義:用標記的特異性抗體對組織切片或細胞標本中某些化學成分的分布和含量進行組織和細胞原位定性、定位或定量研究,這種技術(shù)稱為免疫組織化學(immunohistochemistry)技術(shù)或免疫細胞化學(immunocytochemistry)技術(shù)。
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2、原理:根據(jù)抗原抗體反應和化學顯色原理,組織切片或細胞標本中的抗原先和一抗結(jié)合,再利用一抗與標記生物素、熒光素等的二抗進行反應,前者再用標記辣根過氧化物酶(HRP)或堿性磷酸酶(AKP)等的抗生物素(如鏈霉親和素等)結(jié)合,通過呈色反應或熒光來顯示細胞或組織中化學成分,在光學顯微鏡或熒光顯微鏡下可清晰看見細胞內(nèi)發(fā)生的抗原抗體反應產(chǎn)物,從而能夠在細胞爬片或組織切片上原位確定某些化學成分的分布和含量。
免疫組化原理及實驗步驟——實驗外包。眾所周知,抗體與抗原之間的結(jié)合具有高度的特異性。免疫組化正是利用這一特性,即先將組織或細胞中的某些化學物質(zhì)提取出來,以其作為抗原或半抗原去免疫實驗動物,制備特異性抗體,再用這種抗體(第1抗體)作為抗原去免疫動物制備第二抗體,并用某種酶(常用辣根過氧化物酶)或生物素等處理后再與前述抗原成分結(jié)合,形成抗原 - 一抗 - 二抗復合物,將抗原放大,由于抗體與抗原結(jié)合后形成的免疫復合物是無色的,因此,還必須借助于組織化學方法將抗原抗體反應部位顯示出來。通過抗原抗體反應及呈色反應,顯示細胞或組織中的化學成分,在顯微鏡下可清晰看見細胞內(nèi)發(fā)生的抗原抗體反應產(chǎn)物,從而能夠在細胞或組織原位確定某些化學成分的分布、含量。免疫組化檢測經(jīng)驗總結(jié)!
確定來源不明的轉(zhuǎn)移瘤的原發(fā)部位,臨床上免疫組化也可以進行操作。對于來源不明的轉(zhuǎn)移瘤,用免疫組化技術(shù)有助于確定惡性cancer的組織學來源,進一步確定原發(fā)部位。如角蛋白抗體(CK20)在胃腸道cancer、膽管cancer、胰腺cancer中陽性,而在肺cancer、乳腺cancer、腎cancer中陰性;Tg陽性可考慮甲狀腺轉(zhuǎn)移;波形蛋白(Vimentin)陽性支持肉瘤的診斷;前列腺特異性抗原(PSA)陽性可考慮前列腺轉(zhuǎn)移;甲狀腺球蛋白陽性可考慮甲狀腺濾泡細胞cancer;肌動蛋白(Actin)、肌球蛋白(Myosin)、結(jié)蛋白(Desmin)、肌紅蛋白(Myoglobin)陽性可考慮橫紋肌肉瘤;S-100蛋白陽性支持黑色素瘤的診斷;等等這些都為cancer的醫(yī)療及預后提供了依據(jù)。有沒有做免疫組化比較好的公司?河北組織免疫組化檢測
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英瀚斯生物為您整理免疫組化實驗步驟
1、石蠟切片置于65℃烘箱中烘片2h,脫蠟至水,用PBS沖洗三次,每次5min。
2、切片置于EDTA緩沖液中微波修復,中火至沸后斷電,間隔10min低火至沸。
3、自然冷卻后PBS洗3次,每次5min。4、切片放入3%過氧化氫溶液,室溫下孵育10min,以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶。
5、PBS洗3次,每次5min,甩干后5%BSA封閉20min(封閉電荷)。
6、去除BSA液,每張切片加入50μl稀釋的一抗覆蓋組織,4℃過夜。
7、PBS洗3次,每次5min。
8、去除PBS液,每張切片加50μl-100μl相應種屬的二抗,4℃孵育50min。
9、PBS洗3次,每次5min。
10、去除PBS液,每張切片加50-100μl新鮮配制DAB溶液,顯微鏡控制顯色。
11、顯色完全后,蒸餾水或自來水沖洗,蘇木素復染,1%鹽酸酒精分化(1s),自來水沖洗,氨水返藍,流水沖洗。
12、切片經(jīng)過梯度酒精(70-100%)10min一個梯度,脫水干燥,二甲苯透明,中性樹膠封固。 湖南病理免疫組化外包