膜片鉗是一種用于研究生物膜電生理特性的技術(shù),它可以在單細(xì)胞或組織切片上記錄膜電位的變化。這種技術(shù)可以用來研究細(xì)胞膜中的離子通道、離子泵以及神經(jīng)元的電活動等。在膜片鉗實(shí)驗(yàn)中,研究者會將單細(xì)胞或組織切片放置在一個(gè)稱為膜片電極的微小玻璃管中。這個(gè)電極會緊密地貼合在細(xì)胞或組織的表面,形成一個(gè)高阻抗的界面,使得研究者可以精確地測量細(xì)胞膜電位的變化。膜片鉗實(shí)驗(yàn)的結(jié)果通常以電流-時(shí)間曲線(i-t曲線)的形式呈現(xiàn)。這些曲線可以顯示出在給定的時(shí)間內(nèi)通過特定通道的電流強(qiáng)度,從而幫助研究者了解通道的性質(zhì)和功能。除了測量電流外,膜片鉗還可以用來記錄膜電位的變化。這些變化可以反映出細(xì)胞對于各種刺激的反應(yīng),例如神經(jīng)元的興奮或抑制。因此,膜片鉗是一種非常有用的工具,可以幫助研究者深入了解細(xì)胞和組織的生理學(xué)特性。總的來說,膜片鉗是一種強(qiáng)大的電生理技術(shù),可以用來研究細(xì)胞膜中的離子通道和離子泵的功能,以及神經(jīng)元的電活動等。它對于理解細(xì)胞和組織的生理學(xué)特性,以及開發(fā)新的藥物和zhi療策略都具有重要的意義。準(zhǔn)確、穩(wěn)定、高效,膜片鉗技術(shù)讓您的研究更上一層樓!芬蘭雙分子層膜片鉗專題
膜片鉗技術(shù)本質(zhì)上也屬于電壓鉗范疇,兩者的區(qū)別關(guān)鍵在于:①膜電位固定的方法不同;②電位固定的細(xì)胞膜面積不同,進(jìn)而所研究的離子通道數(shù)目不同。電壓鉗技術(shù)主要是通過保持細(xì)胞跨膜電位不變,并迅速控制其數(shù)值,以觀察在不同膜電位條件下膜電流情況。因此只能用來研究整個(gè)細(xì)胞膜或一大塊細(xì)胞膜上所有離子通道活動。目前電壓鉗主要用于巨大細(xì)胞的全性能電流的研究,特別在分子克隆的卵母細(xì)胞表達(dá)電流的鑒定中發(fā)揮著其他技術(shù)不能替代的作用。該技術(shù)的主要缺陷是必須在細(xì)胞內(nèi)插入兩個(gè)電極,對細(xì)胞損傷很大,在小細(xì)胞如元,就難以實(shí)現(xiàn),又因細(xì)胞形態(tài)復(fù)雜,很難保持細(xì)胞膜各處生物特性的一致。芬蘭雙分子層膜片鉗專題探索離子通道的舞動,膜片鉗是您的科學(xué)利器!
把膜電位鉗位電壓調(diào)到-80--100mV,再用鉗位放大器的控制鍵把全細(xì)胞瞬態(tài)充電電流調(diào)定至零位(EPC-10的控制鍵稱為C-slow和C-series;Axopatch200標(biāo)為全細(xì)胞電容和系列電阻)。寫下細(xì)胞的電容值Cc和未補(bǔ)整的系列電阻值Rs,用于消除全細(xì)胞瞬態(tài)電流,計(jì)算鉗位的固定時(shí)間(即RsCc),然啟根據(jù)歐姆定律從測定脈沖電流的振幅算出細(xì)胞的電阻RC。緩慢調(diào)節(jié)Rs旋鈕注意測定脈沖反應(yīng)的變化,逐漸增加補(bǔ)整的比例。如果RS補(bǔ)整非常接近振蕩的閾值,RS或Cc的微細(xì)變化都會達(dá)到震蕩的閾值,產(chǎn)生電壓的振蕩而使細(xì)胞受損。因此應(yīng)當(dāng)在RS補(bǔ)整水平寫不穩(wěn)定閾值之間留有10%-20%的余地為安全。準(zhǔn)備資料收集和脈沖序列的測定。
細(xì)胞是動物和人體的基本組成單元,細(xì)胞與細(xì)胞內(nèi)的通信,是依靠其膜上的離子通道進(jìn)行的,離子和離子通道是細(xì)胞興奮的基礎(chǔ),亦即產(chǎn)生生物電信號的基礎(chǔ),生物電信號通常用電學(xué)或電子學(xué)方法進(jìn)行測量。由此形成了一門細(xì)胞學(xué)科———電生理學(xué)(electrophysiology),即是用電生理的方法來記錄和分析細(xì)胞產(chǎn)生電的大小和規(guī)律的科學(xué)。早期的研究多使用雙電極電壓鉗技術(shù)作細(xì)胞內(nèi)電活動的記錄?,F(xiàn)代膜片鉗技術(shù)是在電壓鉗技術(shù)的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的。用膜片鉗技術(shù),輕松捕捉離子通道的每一個(gè)細(xì)微動作!
離子通道的近代觀念源于Hodgkin、Huxley、Katz等人在20世紀(jì)30—50年代的開創(chuàng)性研究。在1902年,Bernstein創(chuàng)造性地將Nernst的理論應(yīng)用到生物膜上,提出了“膜學(xué)說”。他認(rèn)為在靜息狀態(tài)下,細(xì)胞膜只對鉀離子具有通透性;而當(dāng)細(xì)胞興奮的瞬間,膜的破裂使其喪失了選擇通透性,所有的離子都可以自由通過。Cole等人在1939年進(jìn)行的高頻交變電流測量實(shí)驗(yàn)表明,當(dāng)動作電位被觸發(fā)時(shí),雖然細(xì)胞的膜電導(dǎo)大為增加,但膜電容卻只略有下降,這個(gè)事實(shí)表明膜學(xué)說所宣稱的膜破裂的觀點(diǎn)是不可靠的。1949年Cole在玻璃微電極技術(shù)的基礎(chǔ)上發(fā)明了電壓鉗位(voltageclamptechnique)技術(shù)滔博生物TOP-Bright專注基于多種離子通道靶點(diǎn)的化合物體外篩選,服務(wù)于全球藥企的膜片鉗公司,快速獲得實(shí)驗(yàn)結(jié)果,專業(yè)團(tuán)隊(duì),7*59小時(shí)隨時(shí)人工在線咨詢.膜片鉗技術(shù)已成為研究離子通道的"金標(biāo)準(zhǔn)"。全細(xì)胞膜片鉗蛋白質(zhì)分子水平
膜片鉗,開啟細(xì)胞電生理研究新篇章!芬蘭雙分子層膜片鉗專題
1976年德國馬普生物物理化學(xué)研究所Neher和Sakmann在青蛙肌細(xì)胞上用雙電極鉗制膜電位的同時(shí),記錄到ACh啟動的單通道離子電流,從而產(chǎn)生了膜片鉗技術(shù)。1980年Sigworth等在記錄電極內(nèi)施加5-50cmH2O的負(fù)壓吸引,得到10-100GΩ的高阻封接(Giga-seal),明顯降低了記錄時(shí)的噪聲實(shí)現(xiàn)了單根電極既鉗制膜片電位又記錄單通道電流的突破。1981年Hamill和Neher等對該技術(shù)進(jìn)行了改進(jìn),引進(jìn)了膜片游離技術(shù)和全細(xì)胞記錄技術(shù),從而使該技術(shù)更趨完善,具有1pA的電流靈敏度、1μm的空間分辨率和10μs的時(shí)間分辨率。1983年10月,《Single-ChannelRecording》一書問世,奠定了膜片鉗技術(shù)的里程碑。Sakmann和Neher也因其杰出的工作和突出貢獻(xiàn),榮獲1991年諾貝爾醫(yī)學(xué)和生理學(xué)獎(jiǎng)。滔博生物TOP-Bright專注基于多種離子通道靶點(diǎn)的化合物體外篩選,服務(wù)于全球藥企的膜片鉗公司,快速獲得實(shí)驗(yàn)結(jié)果,專業(yè)團(tuán)隊(duì),7*48小時(shí)隨時(shí)人工在線咨詢.芬蘭雙分子層膜片鉗專題