膜片鉗是一種用于研究生物膜電生理特性的技術,它可以在單細胞或組織切片上記錄膜電位的變化。這種技術可以用來研究細胞膜中的離子通道、離子泵以及神經元的電活動等。在膜片鉗實驗中,研究者會將單細胞或組織切片放置在一個稱為膜片電極的微小玻璃管中。這個電極會緊密地貼合在細胞或組織的表面,形成一個高阻抗的界面,使得研究者可以精確地測量細胞膜電位的變化。膜片鉗實驗的結果通常以電流-時間曲線(i-t曲線)的形式呈現(xiàn)。這些曲線可以顯示出在給定的時間內通過特定通道的電流強度,從而幫助研究者了解通道的性質和功能。除了測量電流外,膜片鉗還可以用來記錄膜電位的變化。這些變化可以反映出細胞對于各種刺激的反應,例如神經元的興奮或抑制。因此,膜片鉗是一種非常有用的工具,可以幫助研究者深入了解細胞和組織的生理學特性??偟膩碚f,膜片鉗是一種強大的電生理技術,可以用來研究細胞膜中的離子通道和離子泵的功能,以及神經元的電活動等。它對于理解細胞和組織的生理學特性,以及開發(fā)新的藥物和zhi療策略都具有重要的意義。全細胞膜片鉗記錄是應用較早,也是普遍的鉗位技術。美國全自動膜片鉗多少錢
膜片鉗技術與其它技術相結合Neher等**將膜片鉗技術與Fura2熒光測鈣技術結合,同時進行如細胞內熒光強度、細胞膜離子通道電流及細胞膜電容等多指標變化的快速交替測定,這樣便可得出同一事件過程中,多種因素各自的變化情況,進而可分析這些變化間的相互關系。Neher將可光解出鈣離子的鈣螯合物引入膜片鉗技術,進而可以定量研究鈣離子濃度與分泌率的關系及比較大分泌率等指標。他又創(chuàng)膜片鉗的膜電容檢測與碳纖電極電化學檢測聯(lián)合運用的技術。之后又將光電聯(lián)合檢測技術與碳纖電極電化學檢測技術首先結合起來。這種結合既能研究分泌機制,又能鑒別分泌物質,還能互相彌補各單種方法的不足。Eberwine等于1991年首先將膜片鉗技術與RT-PCR技術結合起來運用,可對形態(tài)相似而電活動不同的結果作出分子水平的解釋,從此開始了膜片鉗與分子生物學技術相結合的時代∶基因重組技術,膜通道蛋白重建技術。滔博生物TOP-Bright專注基于多種離子通道靶點的化合物體外篩選,服務于全球藥企的膜片鉗公司,快速獲得實驗結果,專業(yè)團隊,7*47小時隨時人工在線咨詢.德國單電極膜片鉗專題通過研究離子通道的離子流, 從而了解離子運輸、信號傳遞等信息。
把膜電位鉗位電壓調到-80--100mV,再用鉗位放大器的控制鍵把全細胞瞬態(tài)充電電流調定至零位(EPC-10的控制鍵稱為C-slow和C-series;Axopatch200標為全細胞電容和系列電阻)。寫下細胞的電容值Cc和未補整的系列電阻值Rs,用于消除全細胞瞬態(tài)電流,計算鉗位的固定時間(即RsCc),然啟根據(jù)歐姆定律從測定脈沖電流的振幅算出細胞的電阻RC。緩慢調節(jié)Rs旋鈕注意測定脈沖反應的變化,逐漸增加補整的比例。如果RS補整非常接近振蕩的閾值,RS或Cc的微細變化都會達到震蕩的閾值,產生電壓的振蕩而使細胞受損。因此應當在RS補整水平寫不穩(wěn)定閾值之間留有10%-20%的余地為安全。準備資料收集和脈沖序列的測定。
膜片鉗技術的建立1.拋光及填充好玻璃管微電極,并將它固定在電極夾持器中。2.通過一個與電極夾持器連接的導管給微電極內一個壓力,一直到電極浸入記錄槽溶液中。3.當電極浸沒在溶液中時給電極一個測定脈沖(命令電壓,如5-10ms,10mV)讀出電流,按照歐姆定律計算電阻。4.通過膜片鉗放大器的控制鍵將微電極前列的連接電位(junctionpotentials)調至零位,這種電位差是由于電極內填充溶液與浸浴液不同離子成分的遷移造成的。5.用微操縱器將微電極前列在直視下靠近要記錄的細胞表面,并觀察電流的變化,直至阻抗達到1GΩ以上形成"干兆封接"6.調整靜息膜電位到期望的鉗位電壓的水平,使放大器從"搜尋"轉到"電壓鉗"時細胞不至于鉗位到零。 膜片鉗的設計使得夾持力均勻,不會損壞薄片材料。
把膜電位鉗位電壓調到-80--100mV,再用鉗位放大器的控制鍵把全細胞瞬態(tài)充電電流調定至零位(EPC-10的控制鍵稱為C-slow和C-series;Axopatch200標為全細胞電容和系列電阻)。寫下細胞的電容值Cc和未補整的系列電阻值Rs,用于消除全細胞瞬態(tài)電流,計算鉗位的固定時間(即RsCc),然啟根據(jù)歐姆定律從測定脈沖電流的振幅算出細胞的電阻RC。緩慢調節(jié)Rs旋鈕注意測定脈沖反應的變化,逐漸增加補整的比例。如果RS補整非常接近振蕩的閾值,RS或Cc的微細變化都會達到震蕩的閾值,產生電壓的振蕩而使細胞受損。因此應當在RS補整水平寫不穩(wěn)定閾值之間留有10%-20%的余地為安全。準備資料收集和脈沖序列的測定。 膜片鉗記錄技術與較早的單電極電壓鉗位相比進步了很多,尤其在單離子通道鉗位記錄方面。芬蘭細胞膜片鉗技術
膜片鉗技術是用玻璃微電極吸管把只含1-3個離子通道、面積為幾個平方微米的細胞膜通過負壓吸引封接起來。美國全自動膜片鉗多少錢
全細胞膜片鉗記錄(whole-cellpatch-clamprecording)是應用*早,也是*廣的鉗位技術,它相當于連續(xù)的單電極電壓鉗位記錄,也就是說全細胞記錄類似于傳統(tǒng)的細胞內記錄,但它具有更大的優(yōu)越性,如高分辨率、低噪聲、極好的穩(wěn)定性以及能控制細胞內的成分等。全細胞記錄技采測定的是一個細胞內全部**通道的電流,記錄過程中電極的溶液取代了原細胞質的成分。雖然膜片鉗記錄技術與*初的單電極電壓鉗位相比進步了很多,尤其在單離子通道鉗位記錄方面,細胞或腦片的組織選擇及實驗溶液的制備仍然是很重要的步驟。滔博生物TOP-Bright專注基于多種離子通道靶點的化合物體外篩選,服務于全球藥企的膜片鉗公司,快速獲得實驗結果,專業(yè)團隊,7*45小時隨時人工在線咨詢.美國全自動膜片鉗多少錢