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膜片鉗基本參數(shù)
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  • Patch Clamp
  • 型號
  • 型號齊全
膜片鉗企業(yè)商機(jī)

Flip-Tip翻轉(zhuǎn)技術(shù)、將一定密度的細(xì)胞懸液灌注在玻璃電極中,下降到電極前列的單個細(xì)胞通過在電極外施加負(fù)壓可以與玻璃電極前列形成穩(wěn)定的高阻封接,打破露在玻璃電極前列開口外的細(xì)胞膜就形成了全細(xì)胞記錄模式。德國Flyion公司的Flyscreen8500系統(tǒng)采用的就是這一技術(shù),其通量比較高為6,即一次可同時記錄6個細(xì)胞。它的***特點是∶(1)仍然采用玻璃毛坯作為電極(2)藥物施加微量、快速。SealChip技術(shù);完全摒棄了玻璃電極,而是采用SealChip平面電極芯片一定密度的細(xì)胞懸液灌注在芯片上面,隨機(jī)下降到芯片上約1-2μm的孔上并在自動負(fù)壓的吸引下形成高阻封接,打破孔下面的細(xì)胞膜形成全細(xì)胞記錄模式。采用這一技術(shù)的美國Axon(MDS)公司的PatchXpress7000A系統(tǒng)是高通量全自動膜片鉗技術(shù)的典范,是離子通道藥物研發(fā)的**性工具,在國外實驗室和制藥廠***用于hERG通道藥理學(xué)的研究。其通量比較高為16,即一次可同時記錄16個細(xì)胞同時,其藥物施加微量、快速,不僅用于藥物篩選,還大量用于離子通道的基礎(chǔ)研究。早期的研究多使用雙電極電壓鉗技術(shù)作細(xì)胞內(nèi)電活動的記錄。進(jìn)口高通量全自動膜片鉗

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膜片鉗技術(shù)是1976年由諾貝爾獎得主Neher和Sakmann發(fā)展起來的一種記錄胞膜離子通道電生理活動的技術(shù)。該技術(shù)的應(yīng)用將細(xì)胞水平和分子水平的生理學(xué)研究聯(lián)系在一起,已成為現(xiàn)代細(xì)胞電生理研究的常規(guī)方法,廣泛應(yīng)用于生物、生理、病理、藥理、神經(jīng)科學(xué)、植物和微生物等領(lǐng)域并取得了豐碩的研究成果。膜片鉗技術(shù)點燃了細(xì)胞和分子水平的生理學(xué)研究的**之火,與基因克隆技術(shù)(genecloning)并駕齊驅(qū),給生命科學(xué)研究帶來了巨大的前進(jìn)動力。鈣成像技術(shù)被廣泛應(yīng)用于實時監(jiān)測神經(jīng)元、心肌以及多種細(xì)胞胞內(nèi)鈣離子的變化,從而檢測神經(jīng)元、心肌的活動情況。這些技術(shù)是人們觀測神經(jīng)以及多種細(xì)胞活動為直接的手段,現(xiàn)已發(fā)展為生命科學(xué)研究的熱點,也是國家自然科學(xué)基金等鼓勵申報的重要領(lǐng)域。日本雙分子層膜片鉗研究細(xì)胞是動物和人體的基本組成單元,細(xì)胞與細(xì)胞內(nèi)的通信,是依靠其膜上的離子通道進(jìn)行的。

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高阻封接問題的解決不僅改善了電流記錄性能,還隨之出現(xiàn)了研究通道電流的多種膜片鉗方式。根據(jù)不同的研究目的,可制成不同的膜片構(gòu)型。細(xì)胞吸附膜片(cell-attachedpatch)將兩次拉制后經(jīng)加熱拋光的微管電極置于清潔的細(xì)胞膜表面上,形成高阻封接,在細(xì)胞膜表面隔離出一小片膜,既而通過微管電極對膜片進(jìn)行電壓鉗制,分辨測量膜電流,稱為細(xì)胞貼附膜片。由于不破壞細(xì)胞的完整性,這種方式又稱為細(xì)胞膜上的膜片記錄。此時跨膜電位由玻管固定電位和細(xì)胞電位決定。因此,為測定膜片兩側(cè)的電位,需測定細(xì)胞膜電位并從該電位減去玻管電位。從膜片的通道活動看,這種形式的膜片是極穩(wěn)定的,因細(xì)胞骨架及有關(guān)代謝過程是完整的,所受的干擾小。

電壓鉗技術(shù),是20世紀(jì)初由Cole發(fā)明,Hodgkin和Huxley完善,其設(shè)計的主要目的是為了證明動作電位的產(chǎn)生機(jī)制,即動作電位的峰電位是由于膜對鈉的通透性發(fā)生了一過性的增大過程。但當(dāng)時沒有直接測定膜通透性的方法,于是就用膜對某種離子的電導(dǎo)來**該種離子的通透性,膜電導(dǎo)測定的依據(jù)是電學(xué)中的歐姆定律,如膜的Na電導(dǎo)GNa與電化學(xué)驅(qū)動力(Em-ENa)和膜電流INa的關(guān)系GNa=INa/(Em-ENa).因此可通過測量膜電流,再利用歐姆定律來計算膜電導(dǎo),但是,利用膜電流來計算膜電導(dǎo)時,記錄膜電流期間的膜電位必須保持不變,否則膜電流的變化就不能**膜電導(dǎo)的變化。這一條件是利用電壓鉗技術(shù)實現(xiàn)的。下張幻燈中的右邊兩張圖是Hodgkin和Huxley在半個世紀(jì)以前利用電壓鉗記錄的搶烏賊的動作電位和動作電位過程中的膜電流的變化圖,他們的實驗***證明參與動作電位的離子流由Na,k,漏(Cl)三種成分組成。并對這些離子流進(jìn)行了定量分析。這一技術(shù)對闡明動作電位的本質(zhì)和離子通道的的研究做出了極大的貢獻(xiàn)。在細(xì)胞膜的電興奮過程中,脂質(zhì)層膜電容的反應(yīng)是被動的,其電流電壓曲線是線性的。

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把膜電位鉗位電壓調(diào)到-80--100mV,再用鉗位放大器的控制鍵把全細(xì)胞瞬態(tài)充電電流調(diào)定至零位(EPC-10的控制鍵稱為C-slow和C-series;Axopatch200標(biāo)為全細(xì)胞電容和系列電阻)。寫下細(xì)胞的電容值Cc和未補整的系列電阻值Rs,用于消除全細(xì)胞瞬態(tài)電流,計算鉗位的固定時間(即RsCc),然啟根據(jù)歐姆定律從測定脈沖電流的振幅算出細(xì)胞的電阻RC。緩慢調(diào)節(jié)Rs旋鈕注意測定脈沖反應(yīng)的變化,逐漸增加補整的比例。如果RS補整非常接近振蕩的閾值,RS或Cc的微細(xì)變化都會達(dá)到震蕩的閾值,產(chǎn)生電壓的振蕩而使細(xì)胞受損。因此應(yīng)當(dāng)在RS補整水平寫不穩(wěn)定閾值之間留有10%-20%的余地為安全。準(zhǔn)備資料收集和脈沖序列的測定。膜片鉗80%的工夫在于刺備細(xì)胞。德國單電極膜片鉗市場價

膜電導(dǎo)測定的依據(jù)是電學(xué)中的歐姆定律。進(jìn)口高通量全自動膜片鉗

ePatch的設(shè)計的一些亮點還包括:可以在軟件中伴隨數(shù)據(jù)進(jìn)行實驗記錄,你不用再專門拿一個實驗記錄本了,也不用再擔(dān)心本本上記錄的內(nèi)容找不到對應(yīng)的數(shù)據(jù)了,系統(tǒng)會把他們一一對應(yīng)起來。電壓電流刺激模式的編輯更為傻瓜,眾多的模塊,直接拖拽就可以,還伴隨著示例圖,讓你對你編輯的程序一目了然。實時的全細(xì)胞參數(shù)估算,包括封接電阻,膜電容,膜電阻等重要參數(shù)強大的在線分析功能,包括電壓鉗模式下的I/V graph,event detection,F(xiàn)FT,以及電流鉗模式下的AP threshold detection,AP frequency,AP slope等數(shù)據(jù)可保存成多種格式,你要是個程序達(dá)人,可以支持使用Matlab進(jìn)行數(shù)據(jù)分析,如果沒有這樣的經(jīng)驗也沒有問題,數(shù)據(jù)可以保存成.abf用的Clampfit直接分析。進(jìn)口高通量全自動膜片鉗

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