電壓鉗的原理∶用兩根前列直徑0.5um的電極插入細(xì)胞內(nèi),一根電極用作記錄電極以記錄跨膜電位,用另一根電極作為電流注入電極,以固定膜電位。從而實(shí)現(xiàn)固定膜電位的同時(shí)記錄膜電流。電位記錄電極引導(dǎo)的膜電位(Vm)輸入電壓鉗放大器的負(fù)輸入端,而人為控制的指令電位(Vc)輸入正輸入端,放大器的正負(fù)輸入端子等電位,向正輸入端子施加指令電位(Vc)時(shí),經(jīng)過短路負(fù)端子可使膜片等電較,即Vm=Vc,從而達(dá)到電位鉗制的目的,并可維持一定的時(shí)間。Vc的不同變化將導(dǎo)致Vm的變化,從而引起細(xì)胞膜上電壓依賴性離子通道的開放,通道開放引起的離子流反過來又引起Vm的變化,致使Vm≠Vc,Vc與Vm的任何差值都會(huì)導(dǎo)致放大器有電壓輸出,將相反極性的電流注入細(xì)胞,以使Vc=Vm,注入電流的大小與跨膜離子流相等,但方向相反。因而注入的電流被認(rèn)為是標(biāo)本興奮時(shí)的跨膜電流值(通道電流)。滔博生物TOP-Bright專注基于多種離子通道靶點(diǎn)的化合物體外篩選,服務(wù)于全球藥企的膜片鉗公司,快速獲得實(shí)驗(yàn)結(jié)果,專業(yè)團(tuán)隊(duì),7*25小時(shí)隨時(shí)人工在線咨詢.由于膜片鉗檢測的是PA級的微電流信號(hào),因此需要特殊的放大器及模數(shù)轉(zhuǎn)換器。單通道膜片鉗多少錢
全細(xì)胞膜片鉗記錄(Whole-cellpatch-clamprecording)是一種早期且使用頻繁的鉗夾技術(shù),相當(dāng)于連續(xù)單電極電壓鉗夾記錄,也就是說,全細(xì)胞記錄類似于傳統(tǒng)的細(xì)胞內(nèi)記錄,但具有更大的優(yōu)勢,如分辨率高、噪聲低、穩(wěn)定性好、細(xì)胞內(nèi)成分可控等。全細(xì)胞記錄技術(shù)測量一個(gè)細(xì)胞內(nèi)所有通道的電流,記錄過程中電極的溶液代替原生質(zhì)的成分。雖然膜片鉗記錄技術(shù)相對于原來的單電極電壓鉗有了很大的進(jìn)步,尤其是在單離子通道鉗記錄中,細(xì)胞或腦片的組織選擇和實(shí)驗(yàn)溶液的制備仍然是非常重要的步驟。膜片鉗價(jià)格膜片鉗記錄不但能夠在神經(jīng)元胞體及其樹突上進(jìn)行,而且可同時(shí)在這兩個(gè)不同的部位作膜片鉗記錄。
電壓鉗的缺點(diǎn)∶電壓鉗技術(shù)目前主要用于巨火細(xì)胞的全細(xì)胞電流研究,特別在分子克隆的卵母細(xì)胞表達(dá)電流的鑒定中發(fā)揮其它技術(shù)不能替代的作用。但也有其致命的弱點(diǎn)1、微電極需刺破細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞,以致造成細(xì)胞漿流失,破壞了細(xì)胞生理功能的完整性;2、不能測定單一通道電流。因?yàn)殡妷恒Q制的膜面積很大,包含著大量隨機(jī)開放和關(guān)閉著的通道,而且背景噪音大,往往掩蓋了單一通道的電流。3、對體積小的細(xì)胞(如哺乳類***元,直徑在10-30μm之間)進(jìn)行電壓鉗實(shí)驗(yàn),技術(shù)上有更大的困難。由于電極需插入細(xì)胞,不得不將微電極的前列做得很細(xì),如此細(xì)的前列致使電極阻抗很大,常常是60~-8OMΩ或120~150MΩ(取決于不同的充灌液)。這樣大的電極阻抗不利于作細(xì)胞內(nèi)電流鉗或電壓鉗記錄時(shí)在短時(shí)間(μs)內(nèi)向細(xì)胞內(nèi)注入電流,達(dá)到鉗制膜電壓或膜電流之目的。再者,在小細(xì)胞上插入的兩根電極可產(chǎn)生電容而降低測量電壓電極的反應(yīng)能力。
80年代初發(fā)展起來的膜片鉗技術(shù)(patchclamptechnique)為了解生物膜離子單通道的門控動(dòng)力學(xué)特征及通透性、選擇性膜信息提供了直接的手段。該技術(shù)的興起與應(yīng)用,使人們不僅對生物體的電現(xiàn)象和其他生命現(xiàn)象更進(jìn)一步的了解,而且對于疾病和藥物作用的認(rèn)識(shí)也不斷的更新,同時(shí)還形成了許多病因?qū)W與藥理學(xué)方面的新觀點(diǎn)。膜片鉗技術(shù)是一種以記錄通過離子通道的離子電流來反映細(xì)胞膜單一的或多個(gè)的離子通道分子活動(dòng)的技術(shù)。它和基因克隆技術(shù)(genecloning)并架齊驅(qū),給生命科學(xué)研究帶來了巨大的前進(jìn)動(dòng)力。滔博生物TOP-Bright專注基于多種離子通道靶點(diǎn)的化合物體外篩選,服務(wù)于全球藥企的膜片鉗公司,快速獲得實(shí)驗(yàn)結(jié)果,專業(yè)團(tuán)隊(duì),7*27小時(shí)隨時(shí)人工在線咨詢.膜片鉗記錄技術(shù)與較早的單電極電壓鉗位相比進(jìn)步了很多,尤其在單離子通道鉗位記錄方面。
在膜片鉗技術(shù)的發(fā)展過程中主要形成了五種記錄模式,即細(xì)胞貼附模式(cell-attachedmode或loose-seal-cellattachedmode)、膜內(nèi)面向外模式(inside-outmode)、膜外面向外模式(outside-outmode)、常規(guī)全細(xì)胞模式(conventionalwhole-cellmode)和穿孔膜片模式(perforatedpatchmode)。a.亞細(xì)胞水平:細(xì)胞貼附模式,可記錄通過電極下膜片中通道蛋白的離子電流(紅色虛線箭頭)。在全細(xì)胞膜片鉗中,膜片破裂,因此可以記錄全細(xì)胞的宏觀電流,它表示整個(gè)細(xì)胞的總和電流(藍(lán)色虛線箭頭)。b.細(xì)胞水平:來自神經(jīng)元不同部分的全細(xì)胞同步記錄可確定信號(hào)傳遞的方向。c.神經(jīng)元網(wǎng)絡(luò)水平:全細(xì)胞記錄可以在一個(gè)連接神經(jīng)元的小網(wǎng)絡(luò)中進(jìn)行。d.活物水平:可以在執(zhí)行任務(wù)或自由走動(dòng)的動(dòng)物大腦中進(jìn)行全細(xì)胞記錄。小片膜的孤立使對單個(gè)離子通道進(jìn)行研究成為可能。美國單電極膜片鉗高阻抗封接
離子通道研究,從膜片鉗開始,開啟科學(xué)探索之旅!單通道膜片鉗多少錢
膜片鉗在通道研究中起著重要的作用。膜片鉗技術(shù)可以直接觀察和區(qū)分單個(gè)離子通道電流及其開閉時(shí)間,區(qū)分離子通道的離子選擇性,同時(shí)發(fā)現(xiàn)新的離子通道和亞型,在記錄單細(xì)胞電流和全細(xì)胞電流的基礎(chǔ)上,進(jìn)一步計(jì)算細(xì)胞膜上的通道數(shù)和開放概率。也可用于研究某些細(xì)胞內(nèi)或細(xì)胞外物質(zhì)對離子通道的開閉和通道電流的影響。同時(shí)用于研究細(xì)胞信號(hào)的跨膜轉(zhuǎn)導(dǎo)和細(xì)胞分泌機(jī)制。結(jié)合分子克隆和定點(diǎn)突變技術(shù),膜片鉗技術(shù)可用于研究離子通道的分子結(jié)構(gòu)與生物學(xué)功能的關(guān)系。膜片鉗技術(shù)也可用于分析藥物對其靶受體的作用位點(diǎn)。例如,神經(jīng)元煙堿受體是配體門控離子通道,膜片鉗全細(xì)胞記錄技術(shù)可以通過記錄煙堿誘發(fā)電流,直接反映神經(jīng)元煙堿受體活動(dòng)的全過程,包括受體與其激動(dòng)劑和拮抗劑的親和力、離子通道開閉的動(dòng)態(tài)特征、受體的***等。用膜片鉗全細(xì)胞記錄技術(shù)觀察拮抗劑對煙堿受體興奮的量效曲線的影響,以確定其作用的動(dòng)態(tài)特征。然后根據(jù)拮抗劑對受體***的影響分析,拮抗劑的作用是否是電壓依賴性和使用依賴性的,我們可以從功能上區(qū)分拮抗劑對煙堿受體的不同作用位點(diǎn),即判斷拮抗劑是作用于受體的激動(dòng)劑識(shí)別位點(diǎn)、離子通道還是其他變構(gòu)位點(diǎn)。單通道膜片鉗多少錢