膜片鉗放大器的工作模式;(1)電壓鉗模式∶在鉗制細(xì)胞膜電位的基礎(chǔ)上改變膜電位,記錄離子通道電流的變化,記錄的是諸如通道電流;EPSC;IPSC等電流信號(hào)。是膜片鉗的基本工作模式.(2)屯流鉗素向細(xì)胞內(nèi)注入刺激電流,記錄膜電位對(duì)刺激電流的反應(yīng)。記錄的是諸如動(dòng)作電位,EPSP;IPSP等電壓信號(hào)。膜片鉗技術(shù)實(shí)現(xiàn)膜電位固定的關(guān)鍵是在玻璃微電極前列邊緣與細(xì)胞膜之間形成高阻(10GΩ)密封,使電極前列開(kāi)口處相接的細(xì)胞膜片與周?chē)h(huán)境在電學(xué)上隔離,并通過(guò)外加命令電壓鉗制膜電位。滔博生物TOP-Bright專(zhuān)注基于多種離子通道靶點(diǎn)的化合物體外篩選,服務(wù)于全球藥企的膜片鉗公司,快速獲得實(shí)驗(yàn)結(jié)果,專(zhuān)業(yè)團(tuán)隊(duì),7*44小時(shí)隨時(shí)人工在線(xiàn)咨詢(xún).現(xiàn)代膜片鉗技術(shù)是在電壓鉗技術(shù)的基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的。進(jìn)口高通量全自動(dòng)膜片鉗高阻抗封接
電壓鉗的缺點(diǎn)∶電壓鉗技術(shù)目前主要用于巨火細(xì)胞的全細(xì)胞電流研究,特別在分子克隆的卵母細(xì)胞表達(dá)電流的鑒定中發(fā)揮其它技術(shù)不能替代的作用。但也有其致命的弱點(diǎn)1、微電極需刺破細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞,以致造成細(xì)胞漿流失,破壞了細(xì)胞生理功能的完整性;2、不能測(cè)定單一通道電流。因?yàn)殡妷恒Q制的膜面積很大,包含著大量隨機(jī)開(kāi)放和關(guān)閉著的通道,而且背景噪音大,往往掩蓋了單一通道的電流。3、對(duì)體積小的細(xì)胞(如哺乳類(lèi)***元,直徑在10-30μm之間)進(jìn)行電壓鉗實(shí)驗(yàn),技術(shù)上有更大的困難。由于電極需插入細(xì)胞,不得不將微電極的前列做得很細(xì),如此細(xì)的前列致使電極阻抗很大,常常是60~-8OMΩ或120~150MΩ(取決于不同的充灌液)。這樣大的電極阻抗不利于作細(xì)胞內(nèi)電流鉗或電壓鉗記錄時(shí)在短時(shí)間(μs)內(nèi)向細(xì)胞內(nèi)注入電流,達(dá)到鉗制膜電壓或膜電流之目的。再者,在小細(xì)胞上插入的兩根電極可產(chǎn)生電容而降低測(cè)量電壓電極的反應(yīng)能力。芬蘭高通量全自動(dòng)膜片鉗專(zhuān)題滔博生物膜片鉗實(shí)驗(yàn)外包,數(shù)據(jù)準(zhǔn)確,保結(jié)果。
膜片鉗是一種用于研究生物膜電生理特性的技術(shù),它可以在單細(xì)胞或組織切片上記錄膜電位的變化。這種技術(shù)可以用來(lái)研究細(xì)胞膜中的離子通道、離子泵以及神經(jīng)元的電活動(dòng)等。在膜片鉗實(shí)驗(yàn)中,研究者會(huì)將單細(xì)胞或組織切片放置在一個(gè)稱(chēng)為膜片電極的微小玻璃管中。這個(gè)電極會(huì)緊密地貼合在細(xì)胞或組織的表面,形成一個(gè)高阻抗的界面,使得研究者可以精確地測(cè)量細(xì)胞膜電位的變化。膜片鉗實(shí)驗(yàn)的結(jié)果通常以電流-時(shí)間曲線(xiàn)(i-t曲線(xiàn))的形式呈現(xiàn)。這些曲線(xiàn)可以顯示出在給定的時(shí)間內(nèi)通過(guò)特定通道的電流強(qiáng)度,從而幫助研究者了解通道的性質(zhì)和功能。除了測(cè)量電流外,膜片鉗還可以用來(lái)記錄膜電位的變化。這些變化可以反映出細(xì)胞對(duì)于各種刺激的反應(yīng),例如神經(jīng)元的興奮或抑制。因此,膜片鉗是一種非常有用的工具,可以幫助研究者深入了解細(xì)胞和組織的生理學(xué)特性??偟膩?lái)說(shuō),膜片鉗是一種強(qiáng)大的電生理技術(shù),可以用來(lái)研究細(xì)胞膜中的離子通道和離子泵的功能,以及神經(jīng)元的電活動(dòng)等。它對(duì)于理解細(xì)胞和組織的生理學(xué)特性,以及開(kāi)發(fā)新的藥物和zhi療策略都具有重要的意義。
膜片鉗在通道研究中起著重要的作用。膜片鉗技術(shù)可以直接觀察和區(qū)分單個(gè)離子通道電流及其開(kāi)閉時(shí)間,區(qū)分離子通道的離子選擇性,同時(shí)發(fā)現(xiàn)新的離子通道和亞型,在記錄單細(xì)胞電流和全細(xì)胞電流的基礎(chǔ)上,進(jìn)一步計(jì)算細(xì)胞膜上的通道數(shù)和開(kāi)放概率。也可用于研究某些細(xì)胞內(nèi)或細(xì)胞外物質(zhì)對(duì)離子通道的開(kāi)閉和通道電流的影響。同時(shí)用于研究細(xì)胞信號(hào)的跨膜轉(zhuǎn)導(dǎo)和細(xì)胞分泌機(jī)制。結(jié)合分子克隆和定點(diǎn)突變技術(shù),膜片鉗技術(shù)可用于研究離子通道的分子結(jié)構(gòu)與生物學(xué)功能的關(guān)系。膜片鉗技術(shù)也可用于分析藥物對(duì)其靶受體的作用位點(diǎn)。例如,神經(jīng)元煙堿受體是配體門(mén)控離子通道,膜片鉗全細(xì)胞記錄技術(shù)可以通過(guò)記錄煙堿誘發(fā)電流,直接反映神經(jīng)元煙堿受體活動(dòng)的全過(guò)程,包括受體與其激動(dòng)劑和拮抗劑的親和力、離子通道開(kāi)閉的動(dòng)態(tài)特征、受體的***等。用膜片鉗全細(xì)胞記錄技術(shù)觀察拮抗劑對(duì)煙堿受體興奮的量效曲線(xiàn)的影響,以確定其作用的動(dòng)態(tài)特征。然后根據(jù)拮抗劑對(duì)受體***的影響分析,拮抗劑的作用是否是電壓依賴(lài)性和使用依賴(lài)性的,我們可以從功能上區(qū)分拮抗劑對(duì)煙堿受體的不同作用位點(diǎn),即判斷拮抗劑是作用于受體的激動(dòng)劑識(shí)別位點(diǎn)、離子通道還是其他變構(gòu)位點(diǎn)。膜片鉗技術(shù),讓離子通道研究變得更加準(zhǔn)確與高效!
膜片鉗技術(shù)的建立。拋光并填充玻璃管微電極,并將其固定在電極支架中。2.通過(guò)與電極支架連接的導(dǎo)管向微電極施加壓力,直到電極浸入記錄槽溶液中。3.當(dāng)電極浸入溶液中時(shí),給電極一個(gè)測(cè)量脈沖(命令電壓,如5-10ms,10mV)讀取電流,根據(jù)歐姆定律計(jì)算電阻。4.通過(guò)膜片鉗放大器的控制鍵將微電極前端的連接電位調(diào)至零。這種電勢(shì)差是由電極中的填充溶液和浸浴之間的不同離子成分的遷移引起的。5.用顯微操作器將微電極前緣靠近直視下待記錄的細(xì)胞表面,觀察電流的變化,直至阻抗達(dá)到1gω以上,形成“干封”6。將靜息膜電位調(diào)整到預(yù)期的鉗制電壓水平,這樣當(dāng)細(xì)胞沒(méi)有鉗制到零時(shí),放大器可以從“搜索”變?yōu)椤半妷恒Q制”。滔博生物膜片鉗研究系統(tǒng)-細(xì)胞放電,組織切片放電,動(dòng)物放電!進(jìn)口可升級(jí)膜片鉗價(jià)格
離子和離子通道是細(xì)胞興奮的基礎(chǔ),亦即產(chǎn)生生物電信號(hào)的基礎(chǔ),生物電信號(hào)通常用電學(xué)或電子學(xué)方法進(jìn)行測(cè)量。進(jìn)口高通量全自動(dòng)膜片鉗高阻抗封接
實(shí)驗(yàn)溶液浸溶細(xì)胞溶液和微電極玻璃管內(nèi)的填充液成分對(duì)全細(xì)胞膜片鉗記錄也是很重要的內(nèi)容,這關(guān)系到封接的容易程度、細(xì)胞存活狀態(tài)及膜電位的狀態(tài)等。在實(shí)驗(yàn)記錄過(guò)程中,尤其是神經(jīng)生物學(xué)實(shí)驗(yàn),需要迅速更換細(xì)胞浸溶液濃度以免受體敏感性降低(desensitization)或需要模擬快速突觸反應(yīng)的壽命。原則上細(xì)胞的浸溶液成分或玻璃管內(nèi)填充液成分應(yīng)該與細(xì)胞外或細(xì)胞內(nèi)間質(zhì)的成分相似,實(shí)際研究中,為了探討某些通道或電位特性,對(duì)這些實(shí)驗(yàn)溶液的成分或濃度會(huì)作必要調(diào)整,沒(méi)有哪種溶液是理想的。進(jìn)口高通量全自動(dòng)膜片鉗高阻抗封接