對于攜帶突變鉸鏈的 Fc 融合蛋白或抗體來說，F(xiàn)ab 和 Fc 片段的生成可能具有挑戰(zhàn)性。Genovis的GingisKHAN酶在鉸鏈上方一個可觸及的賴氨酸位點消化人IgG1，在足夠溫和的還原條件下保留鏈內(nèi)和鏈間二硫鍵，從而產(chǎn)生完整的Fab和Fc片段。對于融合蛋白，消化通常在鉸鏈上方獲得，但融合伴侶的結(jié)構(gòu)和氨基酸序列可能導(dǎo)致其他暴露的消化位點。如果去除保守的 Fc N-聚糖，F(xiàn)c 中的第二個切割位點也可能被GingisKHAN酶切。將精選的單克隆人 IgG1 抗體和 Fc 融合蛋白與 GingisKHAN 在 37°C 下孵育 1 小時，并通過 HPLC 進行分析。GlySERIAS是從噬菌體K克隆而來的，在大腸桿菌中表達。該酶含有 His 標(biāo)簽，分子量為 18 kDa。海南GlySERIASIdeS蛋白酶蛋白組學(xué)

大多數(shù)商業(yè)zhiliao性抗體屬于IgG類，在Fc結(jié)構(gòu)域中含有N-聚糖。一個重要的關(guān)鍵質(zhì)量屬性是糖基化曲線，因為它會影響穩(wěn)定性、溶解度、藥效學(xué)和藥代動力學(xué)特性。這種翻譯后修飾可能發(fā)生在生物工藝開發(fā)和制造過程中，因此需要密切監(jiān)測。Genovis的FabRICATOR（IdeS）酶已成為一種被接受的快速表征單克隆抗體（mAb）的分析工具。FabRICATOR在鉸鏈下方消化IgG，產(chǎn)生F（ab'）2和Fc/2片段。單個FabRICATOR消解位點和質(zhì)量譜的后續(xù)精度使Fc糖基化譜能夠檢測，從而可以監(jiān)測批次間的一致性和其他關(guān)鍵質(zhì)量屬性。福建IdeS蛋白酶蛋白組學(xué)Genovis 酶產(chǎn)品，被世界各地的科學(xué)家使用，創(chuàng)新的產(chǎn)品形式促進了生物藥物的開發(fā)和質(zhì)量控制。

IgA 消化酶的 IgASAP 家族特異性消化血清和分泌型人 IgA 以生成 Fab 和 Fc 片段。IgASAP Sub1 特異性消化人 IgA1，而 IgASAP Sub1+2 同時消化人 IgA1 和 IgA2m1。 Sub1+2 特異性消化鉸鏈上方的 IgA1 和 IgA2m1。兩種酶都產(chǎn)生完整且均質(zhì)的 Fab 和 Fc 片段。為了獲得純和完整的Fab片段，使用Genovis的GingisKHAN Fab Kit進行人IgG1的消化和抗體片段的后續(xù)純化。通過與 GingisKHAN 孵育，然后在 CaptureSelect? 人 CH1 離心柱上親和純化，在曲妥珠單抗上證明了完整的片段生成。樣品的酶和Fc部分存在于色譜柱的流通中，F(xiàn)ab很容易通過降低pH洗脫。使用該試劑盒，可以制備 0.5 mg 至 2 mg 人 IgG1 的 Fab 片段。Genovis同時提供IdeS酶的純化試劑盒。

Genovis除了提供IdeS酶以外，還提供很多種特異性蛋白酶，如半胱氨酸蛋白酶 FabALACTICA （IgdE）。IgdE 在鉸鏈正上方的一個特定位點消化人 IgG1，產(chǎn)生完整的 Fab 和 Fc 片段的均質(zhì)池。它在pH值和鹽濃度范圍內(nèi)具有活性，不需要任何還原劑或輔助因子。因此，與許多其他常用的蛋白酶相比，F(xiàn)abALACTICA不需要任何優(yōu)化來避免過度消化。這使得FabALACTICA成為一種有吸引力的酶，例如在還原和非還原條件下的LC-MS分析、抗體高階結(jié)構(gòu)（HOS）的結(jié)晶和NMR研究、雙特異性或多特異性抗體的表征、單價結(jié)合研究和完整的Fc聚糖分析。但要在親和步驟中捕獲 Fc 片段，您需要另一種填料。

Genovis的FabRICATOR（IdeS）是一種獨特的酶，可在鉸鏈區(qū)域下方的特定位點消化IgG，產(chǎn)生均勻的F（ab'）2和Fc/2片段。除IgG外，沒有其他底物是已知的。IgG在30分鐘內(nèi)消化，如果孵育時間延長，則不存在過度消化的風(fēng)險。由于FabRICATOR在生理反應(yīng)條件下消化IgG，因此保留了免疫反應(yīng)性。在37°C下獲得良好的活性，但也可以在室溫下使用較長的反應(yīng)時間進行消解。FabRICATOR可消化人類的所有亞類以及猴子、兔子和綿羊IgG的某些亞類。它對小鼠IgG2a和IgG3的活性有限-為了消化這些抗體物種，我們建議使用FabRICATORZ。FabRICATOR是從化膿性鏈球菌克隆而來的，并在大腸桿菌中表達。該酶含有His標(biāo)簽，分子量為37725Da。FabRICATOR是IdeS的重組修飾形式，由GenovisAB開發(fā)，用于需要高標(biāo)準(zhǔn)和一致性的生物技術(shù)應(yīng)用。有一種檢測FabRICATOR酶的方法。了解有關(guān)山羊多克隆抗體Anti-FabRICATOR的更多信息。度拉糖肽的使用GlySERIAS酶切后，HPLC分析后，還鑒定了GLP-1肽的氧化。江西IgGZEROIdeS蛋白酶蛋白組學(xué)

使用GlySERIAS固定化酶和內(nèi)切糖苷酶GlycINATOR消化度拉糖肽。海南GlySERIASIdeS蛋白酶蛋白組學(xué)

一些應(yīng)用（如結(jié)合研究）具有高度靈敏度，因此在制備中需要不含殘留酶的純抗體片段。因此，Genovis的 IgG 特異性蛋白酶也以固定化酶提供，可快速輕松地生成均質(zhì) F（ab'）2 和 Fc/2 片段。FabRICATOR Immobilized 含有固定化的 FabRICATOR （IdeS），用于制備來自多種 IgG 的 F（ab'）2 和 Fc 片段（對于兔 IgG，請咨詢），而小鼠 IgG2a 和 IgG3 可以使用含有 FabRICATOR Z Immobilized 的 FabRICATOR Z Fab2 試劑盒進行處理 。 為了生成和純化完整的 F（ab'）2 和 Fc/2 片段，使用 FabRICATOR Fab2 試劑盒處理曲妥珠單抗，并通過 SDS-page 進行分析。首先，在室溫下在FabRICATOR固定化離心柱上消化抗體15分鐘，然后進行短離心步驟。在 CaptureSelect ? 離心柱上純化 F（ab'）2 片段，并通過降低 pH 值，然后立即調(diào)整回中性 pH 值，一步洗脫結(jié)合的 Fc 片段。使用 FabRICATOR Fab2 試劑盒從酶切到收集片段的過程大約需要 1 小時海南GlySERIASIdeS蛋白酶蛋白組學(xué)