與IdeS不同,Romiplostim 由四個(gè)相同的血小板生成素 (TPO) 受體結(jié)合肽和一個(gè) Fc 片段組成,通過柔性聚甘氨酸序列連接在一起。與度拉糖肽類似,用 Genovis的GlySERIAS Immobilized 在 37°C 下過夜,或用 GlySERIAS 凍干 1 小時(shí)并在 37°C 下過夜消化該蛋白質(zhì)。 鏈間二硫鍵被還原,以便于通過反相LC-MS進(jìn)行以下分析。與度拉糖肽的觀察結(jié)果類似,用固定化酶消化產(chǎn)生均質(zhì)的 Fc/2,剩下一個(gè)連接子殘基,此處為甘氨酸殘基。這有助于識(shí)別專門位于Fc區(qū)域的修改。用凍干酶消化 1 小時(shí)得到 Fc/2,剩余 4 個(gè)甘氨酸殘基和少量的 Fc/2 仍與一個(gè) TPO 肽連接。另一方面,這使得研究 Fc/2 和第yi個(gè)肽之間的連接區(qū)域成為可能,而不會(huì)受到第二個(gè)肽的干擾。用 GlySERIAS 凍干液過夜消化產(chǎn)生 2 個(gè) Fc/2 變體,分別剩下 4 個(gè)和 1 個(gè)甘氨酸殘基。根據(jù)消化時(shí)間的不同,使用凍干產(chǎn)物釋放的肽以五或七種變體存在,接頭中殘留的甘氨酸殘基數(shù)量不同,而使用固定化產(chǎn)物釋放的肽以四種變體存在。在抗體及核酸藥領(lǐng)域,倍篤生物產(chǎn)品線涵蓋藥物研發(fā)的全流程,抗體結(jié)構(gòu)域分析蛋白酶、蛋白聚糖分析水解酶。陜西GingisREXIdeS蛋白酶
Genovis提供具有低水平內(nèi)Du素的FabRICATOR(IdeS)凍干酶,用于IgG的鉸鏈以下消化。FabRICATOR(IdeS)是一種IgG特異性半胱氨酸蛋白酶,可消化鉸鏈下方單個(gè)氨基酸位點(diǎn)的抗體,產(chǎn)生均質(zhì)的F(ab')2和Fc片段。FabRICATORLowEndotoxin以凍干粉的形式提供兩種不同規(guī)格:2000和5000單位,分別用于消化2mg或5mgIgG。該產(chǎn)品配方每瓶的內(nèi)Du素含量較低,2000單位小瓶的內(nèi)Du素含量為<0.04EU/瓶,5000單位小瓶的內(nèi)Du素含量為<0.10EU/瓶。有效消化,內(nèi)DU素水平低;適用于靈敏的體內(nèi)或基于細(xì)胞的檢測(cè)。北京FabALACTICAIdeS蛋白酶IgG特異性蛋白酶FabRICATOR Magic自動(dòng)平行抗體酶切和亞基生成,用于處理與克隆選擇。
與IdeS不同,Genovis的FabULOUS(SpeB)是一種半胱氨酸蛋白酶,可在來自多個(gè)不同物種和亞類的IgG的鉸鏈區(qū)域消化,產(chǎn)生Fab和Fc片段。人、小鼠、大鼠、山羊和綿羊的IgG被FabULOUS消化,產(chǎn)生Fab和Fc片段。人IgG1的主要消化位點(diǎn)是......KTHT...例如,制備的Fab片段可用于親和力研究、Fab糖基化研究和結(jié)構(gòu)研究。對(duì)來自多個(gè)物種和亞類的IgG有活性–上鉸鏈區(qū)域的消化物;快速-在一小時(shí)內(nèi)生成Fab和Fc片段;有效消化小鼠IgG1。FabULOUS來源于化膿性鏈球菌,在大腸桿菌中表達(dá)。FabULOUS的分子量為29kDa,該酶含有His標(biāo)簽。
Genovis的FabRICATOR(IdeS)酶 可用于 IgG 的所有人類亞類以及人源化和嵌合 IgG。該酶對(duì)其他物種的 IgG 也有活性,包括來自大鼠、猴子、兔子和綿羊的某些類別的 IgG。因此,F(xiàn)abRICATOR的高特異性在某些情況下會(huì)使其對(duì)鉸鏈區(qū)域的突變敏感,并損害酶活性。來自小鼠 IgG2a 和 IgG3 的片段可以由 FabRICATOR Z 生成,與 FabRICATOR 相比,F(xiàn)abRICATOR Z 在消化這些 IgG 方面具有更高的效率。然而,小鼠 IgG1 在鉸鏈下方具有不同的序列,并且不被 FabRICATOR Z 消化。對(duì)于這種抗體種類,F(xiàn)abULOUS 和 FabULOUS Fab 試劑盒可用于制備 Fab 片段。IgMBRAZOR酶能夠?qū)?fù)雜和高分子量的人 IgM 進(jìn)行中級(jí)分析,從而促進(jìn)疫苗診斷等過程中的IgM表征和質(zhì)量控制。
Genovis酶的適應(yīng)性和更高的通量和自動(dòng)化工作流程的中級(jí)方法,這是非常重要的。 隨著分析方法和儀器的改進(jìn),在表征實(shí)驗(yàn)室中有更大的能力進(jìn)行更多類型的分析,或者在工藝開發(fā)或QC實(shí)驗(yàn)室中有更先進(jìn)的分析儀器。 當(dāng)涉及到能夠支持大量樣本分析的活動(dòng)時(shí),例如克隆篩選,工藝開發(fā)和驗(yàn)證以及穩(wěn)定性研究,這是非常好的。 此外,Genovis產(chǎn)品的效率、健壯性(Robust)和易用性使它們更容易應(yīng)用于這些類型的工作,而且,也適用于受控環(huán)境中的批次放行方法。Genovis的產(chǎn)品很好地支持這種類型的工作,這也促使Genovis不斷推出新產(chǎn)品和現(xiàn)有產(chǎn)品的不同形式,以支持客戶的工作。有一種檢測(cè)FabRICATOR(IdeS蛋白酶)酶的方法。了解有關(guān)山羊多克隆抗體 Anti-FabRICATOR 的更多信息。陜西GingisREXIdeS蛋白酶
FabRICATOR(IdeS)固定在磁珠上,可同時(shí)快速自動(dòng)消化多種抗體,促進(jìn)中級(jí)表征工作流程。陜西GingisREXIdeS蛋白酶
Genovis的FabRICATOR Fab2 (IdeS)試劑盒可消化兔 IgG,但要在親和步驟中捕獲 Fc 片段,您需要另一種填料,而不是試劑盒中通常包含的 CaptureSelect? Fc。如果您對(duì)處理兔IgG感興趣,請(qǐng)聯(lián)系Genovis團(tuán)隊(duì),我們將在FabRICATOR Fab2試劑盒中提供與兔Fc相容的樹脂色譜柱。使用FabRICATOR的抗體消化的簡(jiǎn)單性、速度和可重復(fù)性也意味著這種酶可以被用于質(zhì)量控制應(yīng)用。 QC方法需要執(zhí)行簡(jiǎn)單,易于訓(xùn)練,高度可重復(fù),數(shù)據(jù)易于分析,這正是您使用FabRICATOR所得到的。 因?yàn)樗m用于一系列不同的IgG,這也意味著使用FabRICATOR進(jìn)行QC工作的客戶將能夠在未來的產(chǎn)品中使用它。 這顯示了這種酶在抗體消化中是多么的有效。陜西GingisREXIdeS蛋白酶
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