Genovis的FabRICATOR MagIC自動(dòng)樣品制備可用于分析和監(jiān)測(cè)不同的CQA。mAb在生產(chǎn)或儲(chǔ)存過(guò)程中的氧化就是這樣一種CQA，可能會(huì)影響zhiliao產(chǎn)品的質(zhì)量。為了展示FabRICATOR MagIC如何解決這個(gè)問(wèn)題，對(duì)6種mAb的混合物進(jìn)行強(qiáng)制降解（室溫下3個(gè)月），并通過(guò)反相LC-MS進(jìn)行分析。當(dāng)在完整水平上分析mAb時(shí)，可以檢測(cè)到mAb5豐度的顯著差異，同時(shí)出現(xiàn)許多新的峰。然而，無(wú)法獲得可靠的質(zhì)量數(shù)據(jù)。使用FabRICATOR MagIC，mAb5變化的來(lái)源在Fab區(qū)域內(nèi)。隨后還原為 Fc/2、LC 和 Fd' 片段，可以識(shí)別差異是由于 mAb5 Fd' 片段上的色氨酸氧化，通過(guò)形成氧代內(nèi)酯 （+14 Da） 和二氧代內(nèi)酯 （+30 Da） 以及 mAb5 LC （-18 Da） 的琥珀酰亞胺化來(lái)揭示。此外，還可檢測(cè)到mAb3輕鏈的異構(gòu)化。該示例說(shuō)明了FabRICATOR MagIC在mAb中級(jí)分析中的強(qiáng)大功能，它創(chuàng)建的片段足夠小，可以精確定位特定的修飾，而無(wú)需耗時(shí)耗費(fèi)資源的肽圖分析，所有這些都以相對(duì)較少的手動(dòng)操作時(shí)間快速完成。Genovis將固定化酶固定在磁珠上，用于在鉸鏈下方自動(dòng)消化 IgG。廣東GlySERIASIdeS蛋白酶IgG特異性蛋白酶

一些應(yīng)用（如結(jié)合研究）具有高度靈敏度，因此在制備中需要不含殘留酶的純抗體片段。因此，Genovis的 IgG 特異性蛋白酶也以固定化酶提供，可快速輕松地生成均質(zhì) F（ab'）2 和 Fc/2 片段。FabRICATOR Immobilized 含有固定化的 FabRICATOR （IdeS），用于制備來(lái)自多種 IgG 的 F（ab'）2 和 Fc 片段（對(duì)于兔 IgG，請(qǐng)咨詢(xún)），而小鼠 IgG2a 和 IgG3 可以使用含有 FabRICATOR Z Immobilized 的 FabRICATOR Z Fab2 試劑盒進(jìn)行處理 。 為了生成和純化完整的 F（ab'）2 和 Fc/2 片段，使用 FabRICATOR Fab2 試劑盒處理曲妥珠單抗，并通過(guò) SDS-page 進(jìn)行分析。首先，在室溫下在FabRICATOR固定化離心柱上消化抗體15分鐘，然后進(jìn)行短離心步驟。在 CaptureSelect ? 離心柱上純化 F（ab'）2 片段，并通過(guò)降低 pH 值，然后立即調(diào)整回中性 pH 值，一步洗脫結(jié)合的 Fc 片段。使用 FabRICATOR Fab2 試劑盒從酶切到收集片段的過(guò)程大約需要 1 小時(shí)山西GingisKHANIdeS蛋白酶Genovis提供FabRICATOR （IdeS）驗(yàn)證包。三種不同批次的凍干酶，用于驗(yàn)證基于FabRICATOR的分析方法。

IgA 消化酶的 IgASAP 家族特異性消化血清和分泌型人 IgA 以生成 Fab 和 Fc 片段。IgASAP Sub1 特異性消化人 IgA1，而 IgASAP Sub1+2 同時(shí)消化人 IgA1 和 IgA2m1。 Sub1+2 特異性消化鉸鏈上方的 IgA1 和 IgA2m1。兩種酶都產(chǎn)生完整且均質(zhì)的 Fab 和 Fc 片段。為了獲得純和完整的Fab片段，使用Genovis的GingisKHAN Fab Kit進(jìn)行人IgG1的消化和抗體片段的后續(xù)純化。通過(guò)與 GingisKHAN 孵育，然后在 CaptureSelect? 人 CH1 離心柱上親和純化，在曲妥珠單抗上證明了完整的片段生成。樣品的酶和Fc部分存在于色譜柱的流通中，F(xiàn)ab很容易通過(guò)降低pH洗脫。使用該試劑盒，可以制備 0.5 mg 至 2 mg 人 IgG1 的 Fab 片段。Genovis同時(shí)提供IdeS酶的純化試劑盒。

與IdeS不同，度拉糖肽由兩個(gè)胰高xue糖素樣肽-1 （GLP-1） 分子組成，它們通過(guò)柔性 GS 接頭連接到人 IgG4 的 Fc 區(qū)域。為了分別研究肽和 Fc 區(qū)域，從而鑒定結(jié)構(gòu)域特異性 PTM，用 Genovis的GlySERIAS 在 37°C 下凍干消化度拉糖肽 1 小時(shí)。為了降低樣品復(fù)雜性，使用內(nèi)切糖苷酶GlycINATOR Lyophilized去除Fc聚糖，并用DTT還原鏈間二硫鍵。反相LC-MS對(duì)樣品的分析表明，使用GlySERIAS進(jìn)行連接子消化后，肽從Fc區(qū)域完全去除。連接子中的大量甘氨酸殘基為GlySERIAS提供了許多不同的潛在消化位點(diǎn)，這就是為什么Fc/2和GLP-1肽都被檢測(cè)為幾種變體，其中不同數(shù)量的甘氨酸和絲氨酸殘基仍然連接。此外，還鑒定了GLP-1肽的氧化。盡管GlySERIAS同時(shí)在多個(gè)位點(diǎn)進(jìn)行消化，但一式三份的酶解在獲得的不同F(xiàn)c/2變體的相對(duì)量中顯示出可重復(fù)的結(jié)果。Genovis已經(jīng)測(cè)試了 PBS 和 150 mM 醋酸銨，并且也適用于FabRICATOR HPLC。

大多數(shù)商業(yè)zhiliao性抗體屬于IgG類(lèi)，在Fc結(jié)構(gòu)域中含有N-聚糖。一個(gè)重要的關(guān)鍵質(zhì)量屬性是糖基化曲線，因?yàn)樗鼤?huì)影響穩(wěn)定性、溶解度、藥效學(xué)和藥代動(dòng)力學(xué)特性。這種翻譯后修飾可能發(fā)生在生物工藝開(kāi)發(fā)和制造過(guò)程中，因此需要密切監(jiān)測(cè)。Genovis的FabRICATOR（IdeS）酶已成為一種被接受的快速表征單克隆抗體（mAb）的分析工具。FabRICATOR在鉸鏈下方消化IgG，產(chǎn)生F（ab'）2和Fc/2片段。單個(gè)FabRICATOR消解位點(diǎn)和質(zhì)量譜的后續(xù)精度使Fc糖基化譜能夠檢測(cè)，從而可以監(jiān)測(cè)批次間的一致性和其他關(guān)鍵質(zhì)量屬性。Genovis的FabRICATOR Fab2 （IdeS蛋白酶）試劑盒可消化兔 IgG。河北FabULOUSIdeS蛋白酶

用 Genovis的GlySERIAS Immobilized消化雙特異性 T 細(xì)胞接合器（BiTE）分子。廣東GlySERIASIdeS蛋白酶IgG特異性蛋白酶

在抗體藥物及核酸藥物領(lǐng)域，倍篤生物產(chǎn)品線涵蓋藥物研發(fā)的全流程，主要用——RNA轉(zhuǎn)染試劑、生物活性物質(zhì)純化分離用填料產(chǎn)品、ADC的payload抗體（如anti-DXD、anti-Eribulin、anti-MMAE等）、動(dòng)物造模用陽(yáng)性及陰性抗體、泊洛沙姆P 188 Bio、工藝雜質(zhì)及外源污染物殘留檢測(cè)產(chǎn)品、抗體結(jié)構(gòu)域分析蛋白酶、蛋白聚糖分析水解酶等，品牌有瑞典Genovis、德國(guó)BASF、美國(guó)QED、中國(guó)君研生物、中國(guó)金傳生物、中國(guó)毫厘科技、中國(guó)再帆生物等。這些國(guó)產(chǎn)品牌都具有國(guó)內(nèi)自研、自產(chǎn)能力，批次生產(chǎn)穩(wěn)定可靠、品質(zhì)可控，為行業(yè)發(fā)展提供更多國(guó)產(chǎn)選擇。廣東GlySERIASIdeS蛋白酶IgG特異性蛋白酶