大多數(shù)商業(yè)zhiliao性抗體屬于IgG類，在Fc結(jié)構(gòu)域中含有N-聚糖。一個(gè)重要的關(guān)鍵質(zhì)量屬性是糖基化曲線，因?yàn)樗鼤绊懛€(wěn)定性、溶解度、藥效學(xué)和藥代動力學(xué)特性。這種翻譯后修飾可能發(fā)生在生物工藝開發(fā)和制造過程中，因此需要密切監(jiān)測。Genovis的FabRICATOR（IdeS）酶已成為一種被接受的快速表征單克隆抗體（mAb）的分析工具。FabRICATOR在鉸鏈下方消化IgG，產(chǎn)生F（ab'）2和Fc/2片段。單個(gè)FabRICATOR消解位點(diǎn)和質(zhì)量譜的后續(xù)精度使Fc糖基化譜能夠檢測，從而可以監(jiān)測批次間的一致性和其他關(guān)鍵質(zhì)量屬性。為了分別研究度拉糖肽的肽和 Fc 區(qū)域，用GlySERIAS 在 37°C 下凍干消化1 小時(shí)。山西GingisREXIdeS蛋白酶抗體酶切

Genovis的FabRICATOR是一種半胱氨酸蛋白酶，它對許多不同的物種和IgG亞類都有活性，包括人IgG亞類1-4以及猴子、兔子、大鼠和綿羊IgG的一些亞類。FabRICATOR在鉸鏈下方的單個(gè)位點(diǎn)進(jìn)行消化，生成F(ab’)2和Fc/2子基，可以進(jìn)一步還原生成Fd’，輕鏈和F/2子基是必需的。FabRICATOR（IdeS）通過蛋白-蛋白相互作用與目標(biāo)抗體工作，這說明了它的高特異性。事實(shí)上，它在單個(gè)位點(diǎn)消化意味著使用FabRICATOR時(shí)沒有過度消化的風(fēng)險(xiǎn)，其高特異性也意味著相同的消化方案可以作為平臺方法應(yīng)用于許多不同的抗體。FabRICATOR（IdeS）不需要還原條件來獲得良好活性，也不需要任何額外的輔助因子，它將在不同生理緩沖中發(fā)揮作用。這意味著按照下面的鉸鏈消解，您將生成F(ab’)2和Fc/2片段用于分析或其他應(yīng)用。云南FabALACTICAIdeS蛋白酶蛋白組學(xué)Genovis的FabULOUS來源于化膿性鏈球菌，在大腸桿菌中表達(dá)，分子量為 29 kDa，該酶含有 His 標(biāo)簽。

一些應(yīng)用（如結(jié)合研究）具有高度靈敏度，因此在制備中需要不含殘留酶的純抗體片段。因此，Genovis的 IgG 特異性蛋白酶也以固定化酶提供，可快速輕松地生成均質(zhì) F（ab'）2 和 Fc/2 片段。FabRICATOR Immobilized 含有固定化的 FabRICATOR （IdeS），用于制備來自多種 IgG 的 F（ab'）2 和 Fc 片段（對于兔 IgG，請咨詢），而小鼠 IgG2a 和 IgG3 可以使用含有 FabRICATOR Z Immobilized 的 FabRICATOR Z Fab2 試劑盒進(jìn)行處理 。 為了生成和純化完整的 F（ab'）2 和 Fc/2 片段，使用 FabRICATOR Fab2 試劑盒處理曲妥珠單抗，并通過 SDS-page 進(jìn)行分析。首先，在室溫下在FabRICATOR固定化離心柱上消化抗體15分鐘，然后進(jìn)行短離心步驟。在 CaptureSelect ? 離心柱上純化 F（ab'）2 片段，并通過降低 pH 值，然后立即調(diào)整回中性 pH 值，一步洗脫結(jié)合的 Fc 片段。使用 FabRICATOR Fab2 試劑盒從酶切到收集片段的過程大約需要 1 小時(shí)

對于涉及完整Fab或Fc抗體片段的應(yīng)用，需要在抗體鉸鏈處進(jìn)行消化。木瓜蛋白酶和 Lys-C 等傳統(tǒng)酶可用于生成 Fab 片段，但非特異性酶活性需要仔細(xì)優(yōu)化，以極大限度地降低多個(gè)消化位點(diǎn)的風(fēng)險(xiǎn)。Genovis的SmartEnzymes IgG 蛋白酶 GingisKHAN 和 FabALACTICA 具有一個(gè)消化位點(diǎn)，可從人 IgG1 生成均質(zhì)的 Fab 和 Fc 抗體片段。生成的片段可用于結(jié)晶和高階結(jié)構(gòu) （HOS） 的 NMR 研究、結(jié)合研究等。在這里，我們提出了獲得完整Fab和Fc抗體片段的不同策略。所得片段顯示 GingisKHAN 的有效消化，用于生成完整的 Fab 片段或從依那西普上的融合 TNFR 結(jié)構(gòu)域中分離 Fc。由于 GingisKHAN 的特異性消化依賴于 IgG 的天然折疊，因此在變性條件下特異性受到負(fù)面影響。為了使用SDS-PAGE分析消解效率，在加入SDS上樣緩沖液之前，停止在分析樣品中加入碘乙酰胺的反應(yīng)。Genovis同時(shí)提供IdeS酶的純化試劑盒。該酶在pH 值范圍為 5.0 至 9.0 時(shí)顯示出活性。

Genovis的FabRICATOR MagIC自動樣品制備可用于分析和監(jiān)測不同的CQA。mAb在生產(chǎn)或儲存過程中的氧化就是這樣一種CQA，可能會影響zhiliao產(chǎn)品的質(zhì)量。為了展示FabRICATOR MagIC如何解決這個(gè)問題，對6種mAb的混合物進(jìn)行強(qiáng)制降解（室溫下3個(gè)月），并通過反相LC-MS進(jìn)行分析。當(dāng)在完整水平上分析mAb時(shí)，可以檢測到mAb5豐度的顯著差異，同時(shí)出現(xiàn)許多新的峰。然而，無法獲得可靠的質(zhì)量數(shù)據(jù)。使用FabRICATOR MagIC，mAb5變化的來源在Fab區(qū)域內(nèi)。隨后還原為 Fc/2、LC 和 Fd' 片段，可以識別差異是由于 mAb5 Fd' 片段上的色氨酸氧化，通過形成氧代內(nèi)酯 （+14 Da） 和二氧代內(nèi)酯 （+30 Da） 以及 mAb5 LC （-18 Da） 的琥珀酰亞胺化來揭示。此外，還可檢測到mAb3輕鏈的異構(gòu)化。該示例說明了FabRICATOR MagIC在mAb中級分析中的強(qiáng)大功能，它創(chuàng)建的片段足夠小，可以精確定位特定的修飾，而無需耗時(shí)耗費(fèi)資源的肽圖分析，所有這些都以相對較少的手動操作時(shí)間快速完成。用于生物藥研究，如Fc聚糖分析、雙特異性抗體、親和力和親和力效應(yīng)和鑒定翻譯后修飾等。福建GlySERIASIdeS蛋白酶抗體酶切

GlySERIAS是從噬菌體K克隆而來的，在大腸桿菌中表達(dá)。該酶含有 His 標(biāo)簽，分子量為 18 kDa。山西GingisREXIdeS蛋白酶抗體酶切

上海倍篤生物科技有限公司（簡稱“倍篤生物”），由中國科學(xué)院及生物醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)界人士，于2018年1月共同創(chuàng)立。公司代理多個(gè)品牌的儀器、試劑及耗材（如Genovis的IdeS酶），遵守相關(guān)法規(guī)要求，如cGMP規(guī)范、ISO13485質(zhì)量管理體系認(rèn)證等，致力于為診斷領(lǐng)域如分子診斷及病原微生物檢測研發(fā)等，藥物研發(fā)領(lǐng)域如細(xì)胞基因藥物、核酸藥物、抗體藥物、干細(xì)胞及外泌體研究等客戶提供合規(guī)、高質(zhì)量物料及專業(yè)服務(wù)，以期與客戶共同協(xié)作，加快研發(fā)及生產(chǎn)進(jìn)度，為客戶提供更多價(jià)值。山西GingisREXIdeS蛋白酶抗體酶切