ArcticZymes Technologies于2017年推出了SAN HQ高鹽核酸酶及其對應(yīng)的SAN HQ ELISA kit。該試劑盒原理是采用雙抗夾心法定量檢測各種生物制品的中間品、半成品和成品中SAN HQ高鹽核酸酶的殘留含量，特異性的anti-SAN作為捕獲抗體偶聯(lián)在96-well plate，生物素Biotin標記anti-SAN作為檢測抗體，鏈霉親和素-HRP偶聯(lián)物起到信號放大作用，TMB是終反應(yīng)底物。該試劑盒特異識別SAN HQ高鹽核酸酶，對其它核酸酶沒有特異性結(jié)合。它的定量范圍是0.4-25.6ng/ml，檢測精確度高RSD<=15%，2-8℃條件下保存12個月。ArcticZymes Technologies旨在是研究和開發(fā)具有獨特特性的酶。上海倍篤生物高鹽核酸酶70921-202
經(jīng)典的慢病毒載體（LV）的生產(chǎn)工藝如下，——三質(zhì)粒系統(tǒng)瞬時轉(zhuǎn)染HEK293細胞系，轉(zhuǎn)染24小時后LV由轉(zhuǎn)染陽性細胞生產(chǎn)并排出到培養(yǎng)上清液中；收獲上清培養(yǎng)液后，加入核酸酶去除HCD污染，通過澄清步驟去除大的細胞碎片等雜質(zhì)；下游純化步驟分離LV載體，純化方法包括切向流過濾TFF、色譜純化及超速離心；純化后的LV病毒顆粒經(jīng)過無菌過濾，更換到優(yōu)化后的配方中，灌裝并冷凍保存。每批Car-T生產(chǎn)時取對應(yīng)量的LV病毒，切忌反復(fù)凍融，否則LV病毒會失活。遼寧基因藥物生產(chǎn)用高鹽核酸酶70921-150SAN HQ高鹽核酸酶是一種新型的、耐高鹽的工程化內(nèi)切酶；
基因藥物常用的AAV載體有三種生產(chǎn)方法，分別是三質(zhì)粒瞬轉(zhuǎn)體系、桿狀病毒表達載體體系和包裝細胞體系。其中，20多年前開發(fā)的三質(zhì)粒瞬轉(zhuǎn)表達技術(shù)仍然占據(jù)腺相關(guān)病毒AAV生產(chǎn)的主流地位，其三質(zhì)粒分別是Helper質(zhì)粒（含E2a/b、E4和VARNA基因）、目標基因表達質(zhì)粒及輔助質(zhì)粒（含Cap和Rep基因）。雖然AAV病毒載體的血清型不同，但AAV的生產(chǎn)流程基本一致，主要有質(zhì)粒共轉(zhuǎn)宿主細胞HEK293、293細胞生產(chǎn)病毒顆粒、從細胞培養(yǎng)上清或/及細胞裂解液中收獲病毒載體、純化/制劑/無菌過濾/灌裝等流程。
ArcticZymes廠家對鹽活性核酸酶系列產(chǎn)品（Salt Active Nucleases，SANs）的生產(chǎn)及質(zhì)控，包括SAN HQ高鹽核酸酶和M-SAN HQ中鹽核酸酶，在符合ISO13485:2016體系基礎(chǔ)上，增加了cGMP質(zhì)控標準，如microbes、endotoxin、蛋白酶等；同時提供TSE/BSE聲明、無動物源（Animal-Origin Free）聲明、非轉(zhuǎn)基因聲明等文件協(xié)助藥物申報。此外，ArcticZymes的生產(chǎn)場地接受客戶的定期審計，其第三方審計文件已得到國際TOP CDMO及Biotech的認可，并已經(jīng)成為國際TOP CDMO的供應(yīng)商。具體文件體系可以跟廠家或?qū)?yīng)銷售人員聯(lián)系。SAN HQ終產(chǎn)品經(jīng)過0.22 μm過濾除菌；
相比傳統(tǒng)的Benzonase核酸酶，SAN HQ高鹽核酸酶的優(yōu)勢是在400mM-600mM鹽濃度條件下具有適宜酶活性。在這個條件下，AAV病毒載體聚集更少、更加穩(wěn)定；SAN HQ的使用能夠簡化生產(chǎn)工藝、降低酶用量及成本，不需額外脫鹽操作；AAV病毒載體得率更高，且HCD殘留更少、AAV產(chǎn)物更穩(wěn)定。曲光教授在2005年發(fā)表的文章中，以AAV2為例探討了引起AAV病毒聚集的因素，并探索了AAV病毒純化和制劑過程中抑制聚集的方法。該文章通過篩選發(fā)現(xiàn)，高鹽濃度能夠抑制AAV病毒團聚，讓AAV病毒更加穩(wěn)定，且高鹽濃度并不削弱AAV病毒的侵染活性。SAN HQ應(yīng)用于生產(chǎn)工藝流程中，有效去除核酸污染；截止目前，已用于全球20+臨床項目中。遼寧ArcticZymes高鹽核酸酶70921-202
在AAV生產(chǎn)過程中鹽濃度是純化工藝的重要參數(shù)之一。上海倍篤生物高鹽核酸酶70921-202
宿主細胞DNA殘留的擔憂是基于致ai風險理論，特別是生產(chǎn)細胞系所包含的致ai序列，比如較常見腺病毒基因E1A和E1B（HEK293, PerC.6 和CAP 細胞系），人乳tou瘤病毒E6和E7基因（HeLa細胞系)等。當使用致ai細胞系生產(chǎn)AAV時，下游純化須盡可能減少殘留DNA。工業(yè)上一般使用核酸酶分解殘留DNA，普遍認為小于200 bp的DNA片段可有效降低致ai風險。宿主細胞蛋白殘留與免疫原性、炎癥或過敏性休克有關(guān)。盡管與非人類的生產(chǎn)原料相比（非人類細胞系如BHK21或昆蟲細胞，以及輔助病毒如HSV、腺病毒、桿狀病毒），人類細胞免疫原性比較弱。上海倍篤生物高鹽核酸酶70921-202
殘留的宿主DNA是生產(chǎn)中產(chǎn)生的雜質(zhì)，其存在潛在的致瘤性、傳染性和免疫原性等風險。相關(guān)研究表明，基因的...
【詳情】ArcticZymes廠家對鹽活性核酸酶系列產(chǎn)品（Salt Active Nucleases，SAN...
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