在精子形態(tài)學檢查中,通過CASA系統(tǒng)對精子形態(tài)學特征進行分析,有些特征(細胞大小、形狀、光學密度、尾的存在以及其它)可由操作者選擇,這樣就會引起同一標本在不同實驗室或不同分析者測得的結果一致性較差[10]。4結論和展望計算機輔助**分析具有較好的可靠性、重復性和穩(wěn)定性,與傳統(tǒng)的光學顯微鏡目測估計相比,更具有快速方便、對比性強、便于交流等明顯優(yōu)點[11],常規(guī)**檢查無法測定精子微細運動特點,顯示CASA在男性不育癥診斷篩選中的優(yōu)越性。王益鑫亦發(fā)現(xiàn),部分手工**檢查正常的不育患者,進行**全自動分析及生化檢測,均發(fā)現(xiàn)明顯異常[12]。因此,CASA系統(tǒng)在男性生殖能力檢驗方面具有重要的實際應用意義。在男科和輔助生殖技術領域,精子質量的評估是診斷和處理的重要環(huán)節(jié)。兔子精子分析LIN
美國HamiltonThorne的TOXIVOS精子分析儀已經(jīng)被FDA和國內(nèi)外毒理學實驗室所使用。本試驗研究目的對精子分析儀和血細胞計數(shù)板在大鼠附睪精子計數(shù)結果的比較驗證。方法選取三批次雄性SD大鼠60只,每批20只,對三批次雄鼠的精子計數(shù)進行比較。健康雄鼠通過戊巴比妥鈉麻醉實施安樂死后,取左側附睪尾稱重,將附睪尾部放入37℃預熱的含有M199培養(yǎng)液平皿中,剪碎附睪尾,放入培養(yǎng)箱中37℃孵育5min,然后吸取1份精子懸液,用M199培養(yǎng)液進行一定倍數(shù)的稀釋,混勻后,取1滴稀釋液,滴入精子分析儀**載玻片上,將載玻片放入TOXIVOS精子分析儀載物臺,進行精子計數(shù),同時吸取稀釋后的精子懸液滴入血細胞計數(shù)板內(nèi),通過光學顯微鏡進行計數(shù),比較兩種計數(shù)方法的差異性。結果***批次雄鼠精子分析儀和血細胞計數(shù)器的精子計數(shù)結果分別為70.2±33.2,61.0±27.1;第二批次雄鼠精子分析儀和血細胞計數(shù)器的精子計數(shù)結果分別為128.8±116.8,114.6±86.9;第三批次雄鼠精子分析儀和血細胞計數(shù)器的精子計數(shù)結果分別為165.9±91.7,140.0±59.6。三個批次的精子分析儀和血細胞計數(shù)板的精子計數(shù)結果無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。結論精子分析儀是一種方便、可靠、快速、高效的研究工具,在生殖毒理學研究中具有重要的應用價值。南京綿羊精子分析DAP精子分析儀與人工方法相比具有客觀,高效,高精度的優(yōu)點。
CASA可將每個精子的活力按以下分級:(1)前向運動型(PR):精子運動活躍、線性運動或者在較大的范圍內(nèi)運動。(2)非前向運動型(NP):所有其他非前向運動的形式,如精子在較小的范圍內(nèi)運動,精子頭部輕微移位或只觀察到尾部擺動。(3)完全不動型(IM):精子完全不動。CASA系統(tǒng)檢測的這些參數(shù)有一套標準的術語。(1)VCL=曲線速度(mm/s)。精子頭沿其實際的曲線,即在顯微鏡下見到的二維方式運動軌跡的平均速度。檢測細胞活力。(2)VSL=直線速度(mm/s)。根據(jù)精子頭在開始檢測時的位置與***所處位置之間的直線運動的時間平均速度。(3)VAP=平均路徑速度(mm/s)。精子頭沿其空間平均軌跡移動的時間平均速度。(4)ALH=精子頭側擺幅度(mm)。精子頭沿其空間平均軌跡側擺的幅度。以側擺的最大值或平均數(shù)值表示。(5)LIN=直線性。曲線軌跡的直線性。即VSL/VCL。(6)WOB=擺動性。精子頭沿其實際軌跡的空間平均路徑擺動的尺度。即VAP/VCL。(7)STR=前向性。空間平均路徑的直線性。即VSL/VAP。(8)BCF=鞭打頻率(Hz)。精子曲線軌跡越過其平均路徑軌跡的時間平均速率。(9)MAD=平均移動角度(度)。精子頭沿其曲線軌跡瞬間轉折角度的時間平均***值。
通過結果的生物學意義對結果質量進行評估?當所有具生物學意義的參數(shù)在測試中表現(xiàn)出較小的可變性時則方法學可變性亦較低方法學可變性低則結果質量就高。CASA系統(tǒng)獲得的數(shù)值與直觀評估獲得的數(shù)值進行分析和比較在精子數(shù)量和綜合運動性上具有較好的相關性而·131·中國優(yōu)生與遺傳雜志2002第10卷第6期DOI:10.13404/j.cnki.cjbhh.2002.06.091在前向運動精子百分率上的相關性較低]。Holt等報道了在常規(guī)實驗條件下采用五種不同的CASA系統(tǒng)對**參數(shù)值進行比較,其結果為:采用同一個測定池由不同的操作者測定**參數(shù);變異系數(shù)(CV)是29%?活動精子比率的CV為24%?平均路徑速度(VAP)的CV為43?85%。作者們指出該分析結果不應看作是不同CASA系統(tǒng)間的工作情況的比較?實際上它揭示了操作者的錯誤是差異的主要來源。目前有待于尋找進一步的標準來評估CASA變量的結果質量。精子***的生物學功能是使卵細胞授精?因此用夫婦中的授精結果來考察精子運動性是合理的?只有在該基礎上能夠確定活動性參數(shù)的重要性。輔助生殖技術(授精IVF)的發(fā)展使檢測精子質量與各參數(shù)間的關系的比較成為可能;同樣可以驗證CASA測定結果與精子真實質量間的相關性有利于CASA結果質量的提高。全自動精子分析儀嚴格按照世界衛(wèi)生組織(WHO)和KRUGER標準,并通過ISO9001認證。
二、生化及免疫學檢驗:1、精漿果糖測定【正常參考值】9.11-17.67mmol/L?!九R床意義】(1)精液果糖為0,可見于先天性兩側輸精管及精囊腺缺如、兩側輸精管完全阻塞或逆行**。(2)精液果糖降低,常見于精囊炎和雄***分泌不足,果糖不足可導致精子運動能量缺乏,甚至不易受孕。2、精漿酸性磷酸酶測定【正常參考值】金氏法:>255nmol·s-1/L【臨床意義】(1)精漿酸性磷酸酶含量增高,常見于前列腺肥大或早期前列腺惡性**患者。(2)精漿酸性磷酸酶含量降低,常見于前列腺炎患者。(3)精漿酸性磷酸酶檢測是法醫(yī)鑒定有無精液**敏感的方法。3、精漿頂體酶活性測定【正常參考值】36.72±21.43U/L。【臨床意義】精子頂體酶活力與精子密度及精子頂體完整率呈正相關,其活力不足,可導致男性不育。4、精漿乳酸脫氫酶-X同功酶(LDH-X)測定【正常參考值】LDH-X***活性:2620±1340U/L;LDH-X相對活性:≥0.426?!九R床意義】LDH-X具有睪丸及精子的組織特異性,是精于運動獲能的關鍵酶,該酶檢測可作為診斷男性不育有價值的指標。睪丸萎縮患者LDH-X降低或消失,精子發(fā)生缺陷時無LDH-X形成,少精或無精者可致LDH-X活性降低。服用棉酚也可抑制此酶活性。選擇合適的CASA檢測原理和設備,確保幀率要求,避免因設備問題影響檢測結果?。南京全自動化精子分析WOB
不同品牌CASA分析的結果差異較大,因此,更高效精確的精液質量檢測系統(tǒng)對促進男科學發(fā)展具有重要的意義。兔子精子分析LIN
CASA,即計算機輔助精子分析,是一種利用技術手段對精子活力、濃度和形態(tài)進行精確評估的方法。WHO第五版指南強調,相比人工檢測,CASA提供更準確的數(shù)據(jù)和精子動力學參數(shù),如前向運動和超活化運動,以及獲能精子特征參數(shù)。研究顯示,CASA檢測的精子參數(shù)與體內(nèi)外受精成功率和受孕時間有***關聯(lián)。使用CASA分析儀,通常通過相差顯微鏡識別活動精子,適用于精子動力學分析。但要確??煽拷Y果,操作者需注意標本制備、幀頻率、精子濃度等因素。每份樣本至少需要分析200個活動精子的運動軌跡,更多精子樣本有助于分類和變異性的分析。國內(nèi)已有自主研發(fā)的精子分析儀,通常進行兩次分析,每次至少200個精子,結果通過統(tǒng)計學分析得出。CASA在評估精子濃度時,需精確測量精子體積,確保**完全液化并充分混勻。計數(shù)板的精確性和計數(shù)一致性是關鍵,每次檢測需滿足5個視野和200條以上精子的比較低要求。對于高濃度**,可能需要稀釋以減少誤差。形態(tài)分析方面,CASA能夠定量評估精子頭部、中段和主段,尾部缺陷可通過活力評估。對于碎片過多或黏稠的**,可能需要洗滌以減少背景干擾。CASA中涉及一系列術語,如VCL(曲線速度)、VSL(直線速度)等,它們反映了精子運動的不同特性。兔子精子分析LIN
CASA系統(tǒng)也可用于精子形態(tài)學評估。CASA系統(tǒng)可用來定量分析精子頭部形態(tài)學、中段甚至主段的形態(tài),可...
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