CASA系統(tǒng)也可用于精子形態(tài)學(xué)評估。CASA系統(tǒng)可用來定量分析精子頭部形態(tài)學(xué)、中段甚至主段的形態(tài),可以把精子頭部和中段分類為正常或者不正常,還可以給出頭部和中段尺度、頭部橢圓率和勻稱性的均數(shù)、標(biāo)準(zhǔn)差和中位數(shù),以及對染色的精子頂體區(qū)進(jìn)行測量[3]。與人工操作相比,自動化系統(tǒng)更具客觀性,精確度和重復(fù)性的潛力[4]。精確度和重復(fù)性不低于7%[5],這優(yōu)于有經(jīng)驗的技術(shù)人員的手工評估。兩個研究已經(jīng)提示在CASA結(jié)果與生育力之間存在***聯(lián)系。Coetzee等發(fā)現(xiàn)自動分析的正常精子形態(tài)的結(jié)果是預(yù)示體外受精率和妊娠率的有意義指標(biāo)[6]。Garrett等發(fā)現(xiàn)**中能與透明帶結(jié)合的、具有某些頭部形態(tài)特征的精子所占的百分比(Z%),和直線速度(VSL)的精子的百分比,與大樣本的低生育力夫婦的自然妊娠率是有***且**的關(guān)系。Z%和VSL與生育力間的關(guān)系顯示是連續(xù)的,而且沒有顯示臨界值;高于臨界值,妊娠率也不會進(jìn)一步增加[7]。Hamilton Thorne精子分析儀是一款功能強大、準(zhǔn)確可靠的精子質(zhì)量評估設(shè)備。南京計算機輔助精子分析W.H.O 6
1.基本檢查:是確定精液變量穩(wěn)定的常規(guī)方法,不僅是男科實驗室,任何開展精液檢查的實驗室都能遵循。精子計數(shù)依然推薦使用改良Neubauer血細(xì)胞計數(shù)板的方法,但計數(shù)的方法有了改變。明確推薦了伊紅笨胺黑染色法作為精子存活率診斷的優(yōu)先方法,伊紅染色和低滲腫脹實驗只作為備選方法。刪減了參考值下限的描述。對于精子活動率大于40%的樣本沒有必要做存活率評估。與第5版手冊中淡粉色判讀為活精子不同,明確了只有精子頭為白色的精子為活精子、淡粉色為死精子。臨床數(shù)據(jù)表明,鑒別快速前向運動精子非常重要。因此,關(guān)于精子活力分級,第6版手冊建議恢復(fù)到快速前向運動、慢速前向運動、非前向運動和不活動4個活力級別,但精子活動率的參考值范圍卻依然是按前向運動(PR)、非前向運動(NP)、不活動(IM)3個活力級別計算。第6版手冊強調(diào),精子形態(tài)學(xué)評估的價值不僅在于其可用于判斷自然妊娠和輔助生殖技術(shù)(ART)結(jié)局的預(yù)后,還可以為男性生殖***包括睪丸和附睪功能判斷提供更多診斷信息。對于3%和5%的精子“正?!毙螒B(tài)率的判斷,則要求必須由訓(xùn)練有素的人員評估1500個精子來完成;對于無尾精子(只有頭部的精子)超過總精子數(shù)20%的精液,應(yīng)單獨計算并在報告中注明;北京兔子精子分析W.H.O 4計算機輔助精子分析(computer- assisted sperm analysis)是2014年公布的泌尿外科學(xué)名詞。
男科實驗室中通常所指的質(zhì)量包含三個方面:實驗室內(nèi)部質(zhì)量、醫(yī)生處置的質(zhì)量以及結(jié)果的質(zhì)量[3]。1.實驗室內(nèi)部質(zhì)量與**分析有關(guān)的實驗室內(nèi)部質(zhì)量主要是工作人員的素質(zhì)和所采用儀器的質(zhì)量。工作人員應(yīng)經(jīng)過特殊的培訓(xùn)?儀器必須處于正常狀態(tài)、確保準(zhǔn)確的結(jié)果?操作應(yīng)符合規(guī)程[4]。CASA系統(tǒng)本身的質(zhì)量難于評定。硬件?如顯微鏡、影像攝影機和計算機經(jīng)檢查便可確定其可靠性。但軟件并非如此?軟件中存在不確定的因素?算法是軟件中**重要的部分?通常制造者保守這些秘密;因此?有關(guān)軟件的數(shù)學(xué)上、信息性的、統(tǒng)計學(xué)的或生物測量方面的檢查實驗室難于進(jìn)行。
精子分析儀工作原理以灰度識別CASA為例,采用高分辨率的攝影技術(shù)與顯微鏡結(jié)合,**標(biāo)本液化后吸入計數(shù),通過顯微鏡放大后,用圖像采集系統(tǒng)獲取精子動、靜態(tài)圖像后輸入計算機。根據(jù)設(shè)定的精子大小和灰度、精子運動移位及運動參數(shù),對采集圖像進(jìn)行精子密度、活動力、活動率、運動特征等幾十項檢驗項目動態(tài)分析,由計算機處理后,打印出“**分析檢查報告以及精子動態(tài)特征分布圖”。一次能對1000個精子進(jìn)行動態(tài)檢測分析,2-3分鐘即可完成檢測[1]。優(yōu)點:操作簡便,用量少,檢測速度快,重復(fù)性優(yōu)于人工檢測,并且能夠快速、準(zhǔn)確的測定精子密度、活力、精子分級等,還可提供精子運動狀態(tài)的多種參數(shù)等。缺點:影響分析結(jié)果的因素較多,除**本身性質(zhì)所含的固有誤差外,不同的精子計數(shù)池的相對準(zhǔn)確性和精確性可產(chǎn)生明顯不一致的效果。不同品牌CASA分析的結(jié)果差異較大,因此,更高效精確的精液質(zhì)量檢測系統(tǒng)對促進(jìn)男科學(xué)發(fā)展具有重要的意義。
人類精子冷凍保存和儲存:增加了冷凍樣本的安全性、精液冷凍保存方案、快速液氮熏蒸冷凍、冷凍精液的解凍、玻璃化冷凍等內(nèi)容,更具可操作性。本手冊對人類精子的冷凍保存提出了具體建議:將樣本分管分罐分開儲存;對使用的材料和留存標(biāo)本建立定期核驗程序;所有儲罐都應(yīng)有液位監(jiān)控報警系統(tǒng),以監(jiān)測溫度和液氮液位,傳感器應(yīng)連接警報器,可通過實驗室人員的終端進(jìn)行提醒。新證據(jù)表明,玻璃化冷凍是冷凍保存精液的一種有價值的方法。該方法的原理是將小體積樣本與無污染液氮直接接觸并快速冷凍,可以防止冰晶的形成,并減少精子的滲透性損傷。在麥管玻璃化冷凍(無菌玻璃化冷凍)中,也可以使用封閉系統(tǒng),不需要無菌的液氮。精子分析儀與人工方法相比具有客觀,高效,高精度的優(yōu)點。美國水生動物精子分析STR
Hamilton Thorne精子分析儀具備快速和高效的分析功能,能夠在短時間內(nèi)處理大量樣本,提高工作效率。南京計算機輔助精子分析W.H.O 6
二、生化及免疫學(xué)檢驗:1、精漿果糖測定【正常參考值】9.11-17.67mmol/L?!九R床意義】(1)精液果糖為0,可見于先天性兩側(cè)輸精管及精囊腺缺如、兩側(cè)輸精管完全阻塞或逆行**。(2)精液果糖降低,常見于精囊炎和雄***分泌不足,果糖不足可導(dǎo)致精子運動能量缺乏,甚至不易受孕。2、精漿酸性磷酸酶測定【正常參考值】金氏法:>255nmol·s-1/L【臨床意義】(1)精漿酸性磷酸酶含量增高,常見于前列腺肥大或早期前列腺惡性**患者。(2)精漿酸性磷酸酶含量降低,常見于前列腺炎患者。(3)精漿酸性磷酸酶檢測是法醫(yī)鑒定有無精液**敏感的方法。3、精漿頂體酶活性測定【正常參考值】36.72±21.43U/L。【臨床意義】精子頂體酶活力與精子密度及精子頂體完整率呈正相關(guān),其活力不足,可導(dǎo)致男性不育。4、精漿乳酸脫氫酶-X同功酶(LDH-X)測定【正常參考值】LDH-X***活性:2620±1340U/L;LDH-X相對活性:≥0.426?!九R床意義】LDH-X具有睪丸及精子的組織特異性,是精于運動獲能的關(guān)鍵酶,該酶檢測可作為診斷男性不育有價值的指標(biāo)。睪丸萎縮患者LDH-X降低或消失,精子發(fā)生缺陷時無LDH-X形成,少精或無精者可致LDH-X活性降低。服用棉酚也可抑制此酶活性。南京計算機輔助精子分析W.H.O 6
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