精子手工計數(shù)原理及操作方法

1.原理：將精液用適當?shù)南♂屢鹤饕欢肯♂尯?，混勻注入計?shù)池內(nèi)計數(shù)，再算出每毫升精液中精子數(shù)。2.方法（按照***版第四版《全國臨床檢驗操作規(guī)程》）1).于小試管內(nèi)加精子稀釋液0.38ml,取液化精液20μl,加入稀釋液內(nèi)混勻。2).充分搖勻后,滴入改良Neubauer計數(shù)板的計數(shù)池內(nèi),靜置1~2分鐘,待精子下沉后,以精子頭部作為基準進行計數(shù)。

3.計算1).如每個**中方格內(nèi)精子少于10個,應(yīng)計數(shù)所有25個中方格內(nèi)的精子數(shù)。2).如每個**中方格內(nèi)精子在10~40個,應(yīng)計10個中方格內(nèi)的精子數(shù)。3).如每個**中方格內(nèi)精子多于40個,應(yīng)計數(shù)5個中方格內(nèi)的精子數(shù)。公式：精子數(shù)=計數(shù)結(jié)果/計數(shù)中方格×25×1/計數(shù)池高度×20×103/ml=計數(shù)結(jié)果/計數(shù)中方格×1/計數(shù)池高度×5×103/ml CASA系統(tǒng)操作簡便，檢測速度快，且重復(fù)性優(yōu)于人工檢測。美國山羊精子分析STR

檢查具備條件

受檢者，經(jīng)歷一段經(jīng)常排精過程后，禁房事5－7天（上次排精到取標本間隔時間至少不得少于100小時）； [1]備大口有蓋清潔干燥容器一個，以**方式獲取精液，一次全部射入容器，蓋上蓋，記錄標本離體時間； 貼身保溫，30分鐘內(nèi)送到化驗室，并向檢驗員提供標本取出時間。 精液常規(guī)觀察：精液總?cè)萘浚ê辽踊顒忧闆r，精子密度（個/毫升），精液液化時間（標本取出到精液液化的時間），不動精子（個/高倍視野）等。見不動精子，須染色方可區(qū)分：不活動的精子、死精子、未成熟精子等。找不到精子必須離心后檢驗，仍然找不到精子；方可報告無精。經(jīng)三次取樣化驗，結(jié)果仍然找不到精子方可確認無精子癥。 香港水生動物精子分析DCL電腦全自動精子采集分析儀是一款高科技醫(yī)療設(shè)備，它巧妙地融合了現(xiàn)代計算機技術(shù)和自動控制技術(shù)。

世界衛(wèi)生組織(WHO)《人類精液及精子—宮頸粘液相互作用實驗室檢驗手冊》于1980年***出版，以滿足臨床與科研對人類精液標準化檢測程序日益增長的需求。該手冊是人類精液實驗室檢查和處理程序及方法的標準操作指南，旨在提高精液分析的質(zhì)量和提高不同實驗室結(jié)果的可比性。在過去40年里，該手冊進行了4次修訂與補充(1987年、1992年、1999年和2010年)，內(nèi)容涉及精液檢查的標準化操作程序、精子功能、精漿生化、精液處理與冷凍以及質(zhì)量保證等，已成為國際公認的標準，被世界各地臨床和實驗室***使用。中國衛(wèi)生部已在2003年將其納入人類輔助生殖技術(shù)規(guī)范。WHO《人類精液檢查與處理實驗室手冊(第5版)》精液參考值的數(shù)據(jù)是來自全球3大洲8個國家的前瞻性、多中心臨床研究的結(jié)果，通過循證醫(yī)學研究獲得的精液參數(shù)參考值具有里程碑式意義。自2010年出版以來成為WHO很受歡迎的出版物之一，即使在**近幾年其下載量也在穩(wěn)步增長。它是男科實驗室及全球范圍內(nèi)開展精液分析操作的其他實驗室、醫(yī)院和研究機構(gòu)使用的標準操作手冊。該手冊在國際大會、科學會議、以及WHO合作中心、專業(yè)學會和其他學術(shù)機構(gòu)的培訓項目中進行了***傳播。截止到2021年，已被3000余篇同行評議論文和評論引用。

方法:使用兩種已知濃度的質(zhì)控乳膠珠溶液,1份濃度為(35±5)×106/ml,另1份濃度為(18.0±2.5)×106/ml,評價4種計數(shù)方法的準確性和精確性,并比較4種方法計數(shù)精液的結(jié)果。結(jié)果:計數(shù)乳膠珠時,CellVU計數(shù)池的結(jié)果**接近已知濃度,分別為(39.70±4.76)、(19.09±2.02)×106/ml,變異系數(shù)(CV)值分別為12.80%和10.58%;血細胞計數(shù)池和Makler計數(shù)池結(jié)果均高于已知濃度,前者為(44.84±4.86)×106/ml、(21.04±1.87)×106/ml,CV值分別為10.81%和8.89%,后者為(52.36±7.78)×106/ml、(24.54±3.67)×106/ml,CV值分別為14.86%和14.96%;CASA系統(tǒng)結(jié)果低于已知濃度,為(28.53±2.06)、(14.62±0.95)×106/ml,但CV值比較低,分別為7.22%和6.50%。計數(shù)精液時,CellVU計數(shù)池與CASA系統(tǒng)結(jié)果差異無***性(P=0.71),分別為(45.28±34.52)、(41.96±31.93)×106/ml,血細胞計數(shù)池和Makler計數(shù)池結(jié)果差異無***性(P=0.14),分別為(76.98±59.90)、(63.89±53.84)×106/ml,CellVU計數(shù)池、CASA系統(tǒng)與血細胞計數(shù)池、Makler計數(shù)池結(jié)果間差異***(P<0.05或P<0.01)。結(jié)論:計數(shù)精液時,CASA系統(tǒng)與CellVU計數(shù)結(jié)果差異無***性。各實驗室可選擇合適的手工或CASA計數(shù)方法。IVOS具有高分辨率和高靈敏度的特點，能夠捕捉到微小的細節(jié)和變化，進一步提高了精子分析的準確性。

二、生化及免疫學檢驗：5、精漿肉堿測定【正常參考值】濃度為239.56±l05.59umol/L。【臨床意義】精漿肉堿測定精漿中的肉堿主要由附睪分泌，其次是精囊。精漿中肉堿分為游離肉堿和乙酰肉堿二種，附睪中含高濃度的肉堿，主要與精子在附睪成熟時所需的能量來源有關(guān)?，F(xiàn)認為精漿肉堿含量和果糖含量的變化，常反映附睪、精囊的功能。精漿肉堿及果糖含量正常，表明附睪、精囊功能正常。當肉堿含量高于正常的50%，而果糖含量降低，則提示精囊功能障礙，附睪功能正常；精漿肉堿約為正常含量的50%左右，果糖含量正常，說明附睪功能障礙，精囊功能正常；而肉堿急劇下降，果糖含量亦減少，表示精囊、附睪功能均發(fā)生障礙。6、抗精子抗體(AsAb)測定【正常參考值】陰性。【臨床意義】AsAb檢測對不育原因檢查有重要臨床意義。存在于血清或生殖道分泌液中的AsAb，可抑制精子的活動，干擾精子的運行，阻礙精子穿透及精卵結(jié)合，使受精發(fā)生障礙。即使已經(jīng)受精，也可能影響發(fā)育中的胚胎，造成免疫性流產(chǎn)。不育夫婦AsAb陽性者占25%-30%，當精子輸出管道受阻、睪丸損傷、炎癥、附睪等生殖系***時，系精子外逸而產(chǎn)生的自身抗體。CASA系統(tǒng)用量少，檢測速度快，能夠顯著提高實驗室的工作效率。北京魚精子分析ALH

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[臨床意義]1. 若數(shù)日未**、且精液量少于1.5ml者為不正常，說明精囊或前列腺有病變；若精液量減至數(shù)滴，甚至排不出，稱為無精液癥，見于生殖系統(tǒng)的特異性***，如結(jié)核、淋病和非特異性炎癥等。2．若精液量過多(一次超過8ml)，則精子被稀釋而相應(yīng)減少，有礙生育。二、顏色檢查[正常參考值]灰白或乳白色，久未**者可呈淺黃色。[臨床意義]1．黃色或棕色膿樣精液：見于精囊炎或前列腺炎等。2．鮮紅或暗紅色血性精液：見于生殖系統(tǒng)的炎癥、結(jié)核和**等。三、粘稠度和液化檢查[正常參考值]粘稠膠凍狀，30分鐘內(nèi)自行液化。[臨床意義]1．精液粘稠度低，似米湯樣，可因精子量減少所致，見于生殖系統(tǒng)炎癥。??2．液化時間過長或不液化，可抑制精子活動而影響生育，常見于前列腺炎癥等。四、精子活動率檢測[正常參考值]正常精子活力一般在Ⅲ級(活動較好，有中速運動，但波形運動的較多)以上，**后1小時內(nèi)有Ⅲ級以上活動能力的精于應(yīng)＞0.60。[臨床意義]如果0級(死精子，無活動能力，加溫后仍不活動)和Ⅰ級(活動不良，精子原地旋轉(zhuǎn)、擺動或抖動，運動遲緩)精子在0.40以上，常為男性不育癥的重要原因之一。美國山羊精子分析STR