超濾離心管從細胞培養(yǎng)上清液中濃縮蛋白,在園子里找到一些關于濃縮蛋白的一些帖子,但還有些問題還是向園子里的大蝦請教一下。我們定的是 15ml規(guī)格的管子,不知道有沒有誰以前做過的,有關于轉速,時間給一些建議,另外細胞上清液離心前是否需要什么預處理?離心之后回收蛋白時怎么盡量減少損失?如果要把管子重復利用,NaoH清洗后,如何在20%的乙醇中保存?是將其浸到乙醇中防于4度,還是在管子中灌入乙醇?我用過5ml的管子,當時使用的轉速是4000rpm 8min,可以把5ml的樣品液濃縮到約200ul,這只供參考,具體情況還要由您的樣品決定。我保存5ml管子的方法是把內管取出,浸泡于裝有20%乙醇的燒杯中。四度保存。超濾離心管可以用于分離和純化各種大分子化合物,如蛋白質、核酸、多糖等。紹興10K超濾離心管報價
超濾離心管,備有四種材質的超濾膜:聚醚砜、三醋酸纖維素、再生纖維素和Hydrosart,可根據不同要求靈活選用。 使用注意事項 (1)選擇合適的超濾管。通常應截留分子量不應大于目的蛋白分子量的1/3,比如目的蛋白分子量為35kDa,就可以選擇10kDa截留分子量的超濾管。若目的蛋白分子量為10kD左右,則可以用截留分子量3kD的超濾管。認真閱讀使用說明書,注意超濾膜對各種化學物質的耐受程度有所不同。 (2)新買來的超濾是干燥的,使用前加入超純水,水量完全過膜,冰浴或冰箱里預冷幾分鐘。然后將水倒出,即可加入蛋白液,加入的多少,以不超過管頂的白線為準。操作要輕,加入蛋白液前,超濾管需要插在冰上預冷。 (3)平衡。質量和重心二者都要達到平衡。注意轉速和加速度不可太快,否則直接損壞超濾膜。開始離心超濾(離心機預冷至4度)。不同離心機的轉速 rpm換算成g之后,有所不同。離心機的加速度調至較低檔,減小對膜的壓力。湖州30K超濾離心管制造廠超濾離心管可以用于制備血液制品、免疫球蛋白等緩解藥物,以緩解某些自身免疫性疾病。
超濾作為一種膜分離技術,普遍應用于生物樣品的濃縮、脫鹽和緩沖液置換,其原理是溶液在力的作用下,通過超濾膜孔徑的篩濾,大分子量的顆粒被截留下來,而水、溶劑和低分子量溶質則允許透過膜,從而達到濃縮、脫鹽和緩沖液置換的目的,這種方法較大的特點是操作簡便、快速、高效,可同時濃縮和純化分子。如何使用超濾心離心管1. 使用角轉子加到超濾裝置上,較大樣本量為15 毫升(Anavo Ultra-15)。2. 將帶蓋過濾裝置放入離心機轉子內; 用一個類似的裝置來平衡。3. 使用定角轉子時,將薄膜面板朝上定位,較大旋轉 5000 xg,旋轉 30 分鐘。4. 為了回收濃縮的溶質,在過濾裝置的底部插入一個移液管,通過左右掃動的方式將樣品抽離,以保證總回收率。超濾液可貯存在離心管中。說明:為達到較佳回收率,離心后應立即取出濃縮樣品。
避免過度濃縮,體積越小,越容易因表面吸附而損失得率。離心后用Tips輕輕吹吸幾次濾膜截留的溶液,必要時補加一定體積的緩沖液沖洗膜表面,有助于減少膜表面吸附,能提高回收率。盡量避免Tips接觸膜表面。離心管是一個簡單的可以承受高轉速壓力的管子,比如離一些樣品,分離出上清沉淀。超濾離心管會有一個類似于內管和外管的兩個部分,內管中是帶有一定分子量的膜,當高速離心時,分子量比它小的就漏到下面的管子(即外管)中了,分子量比它大的就截留在上面(即內管中),就是超濾的原理.常用于濃縮樣品。 超濾離心管通常不需要預處理即可使用,不過對于蛋白質樣本處理,特別是較稀的蛋白質溶液來說(<10ug/mL),用超濾膜濃縮回收率常常是不定量的。超濾離心管還可用于檢測食品中的殘留物和污染物,以保障公眾健康。
超濾離心管使用的加樣與平衡:使用移液槍將適量樣本輕輕加入超濾管中,注意避免產生泡沫和漏液。加入的樣本量應不超過管頂的白線標記。如果超濾管中有少許殘留水,可將其倒置并以較低轉速(如1000×g)離心1分鐘,以去除殘留水分。在離心前,確保超濾離心管的質量和重心達到平衡。這有助于減少離心過程中的震動和損壞風險。注意轉速和加速度的設置,避免過快導致超濾膜損壞。超濾離心管使用的注意事項:在整個使用過程中要注意無菌操作,避免污染樣本和實驗結果。離心過程中要注意安全,避免離心機發(fā)生意外情況。如果發(fā)現超濾管有破損或泄漏現象,應立即停止使用并更換新的超濾管。超濾離心管的離心力一般不超過12000g,以避免濾膜破損。超濾離心管可用于分離細胞培養(yǎng)上清中的蛋白質和小分子物質。廣州高離心力離心管制造廠
超濾離心管可以有效地去除混合物中的低分子量化合物,從而提高目標化合物的純度。紹興10K超濾離心管報價
我用的是3500g,4度離心,時間可以自己控制,取決于你之后的濃縮體積,我一般是200ul左右。千萬別一下離心時間太長,不同的蛋白濃縮的速度不同,有的需要長時間離心,有的則一下子就好。當然也和你的蛋白是否比較純,所用的是什么buffer,還有蛋白的濃度有關系。所以離心時要先短些時間觀察一下你的濃縮速度,不要一下子濃縮過了,甚至形成沉淀就得不償失了。另外其實他們的管子都設計的是一次性使用,所以如果想重復使用,不要離得速度太高,4000-4500RPM就差不多了,另外重復使用時要看看管壁上有沒有裂紋,現在的管子好像不如從前的結實了。紹興10K超濾離心管報價