超濾離心管從細胞培養(yǎng)上清液中濃縮蛋白,在園子里找到一些關于濃縮蛋白的一些帖子,但還有些問題還是向園子里的大蝦請教一下。我們定的是 15ml規(guī)格的管子,不知道有沒有誰以前做過的,有關于轉速,時間給一些建議,另外細胞上清液離心前是否需要什么預處理?離心之后回收蛋白時怎么盡量減少損失?如果要把管子重復利用,NaoH清洗后,如何在20%的乙醇中保存?是將其浸到乙醇中防于4度,還是在管子中灌入乙醇?我用過5ml的管子,當時使用的轉速是4000rpm 8min,可以把5ml的樣品液濃縮到約200ul,這只供參考,具體情況還要由您的樣品決定。我保存5ml管子的方法是把內管取出,浸泡于裝有20%乙醇的燒杯中。四度保存。使用超濾離心管時應注意選擇正確的膜孔徑,以確保所需分子能通過篩選過程。鄭州濃縮超濾離心管訂做
根據(jù)其大小,又分為1.5ml、2ml、5ml、10ml、15ml、50ml等,國產的離心管一般就是這幾個規(guī)格,用的較多的也就是10ml和50ml的。如果您的離心機是配30ml或者其他規(guī)格的離心管時,就要考慮進口的了。另外,離心管還有圓底和尖底,以及螺旋蓋和插蓋之分。螺旋蓋的離心管帶有較精細的刻度,插蓋的只有一個總體的容量標示。實驗室常用的離心管有塑料的和玻璃的,一般塑料的用的較多,因為玻璃的離心管不能用在高速或者超速離心機上。塑料的離心管又有PP(聚丙烯)、PC(聚碳酸酯),PE(聚乙烯)等材質。PP的管子性能相對來說比較好。塑料的離心管透明或者半透明,可以直觀的看到樣品離心情況,但是比較容易變形,抗有機溶劑的腐蝕性較差,所以使用壽命較短。因此,實驗室一般會經常購買離心管。下面就對各種材質分別介紹一下。根據(jù)其材質的不同總體可以分為塑料和玻璃的,塑料的離心管用的較多,又可以分為PP、PC、PS等,根據(jù)不同需要,生產廠家會選擇不同的塑料材料來進行制作。衢州100K超濾離心管價格超濾離心管還可用于檢測環(huán)境樣本中的微生物、重金屬等有害物質。
超濾離心管只需5到15分鐘,即可對50到500L樣本進行簡便、可靠的濃縮與脫鹽處理:快速處理樣本。通常,回收率高于90%;備有低蛋白質結合的Omega、Bio-Inert或GHP濾膜可供選擇。對應各種截留分子量,備有各種編碼以供輕松識別的顏色可供選擇。結構材料為低結合聚丙烯。超聲焊接密封,防止側流或密封不嚴。適用于配合1.5mL試管的標準離心轉子。超濾離心管通常不需要預處理即可使用,不過對于蛋白質樣本處理,特別是較稀的蛋白質溶液來說(<10ug/mL),用超濾膜濃縮回收率常常是不定量的。雖然PES材料使非特異吸附較小化,但是,某些蛋白,特別是稀的時候,會有問題。非特異結合的程度隨著個別蛋白結構的不同而不同。
超濾離心管的清洗與保存:使用完的超濾離心管應及時清洗。首先用純水反復清洗5次以去除殘留樣本和雜質;然后用75%乙醇沖洗3次以消毒。如果管底有可見的蛋白沉淀,可以先加入純水并用***頭輕輕吹打至沉淀懸起后倒掉;不可用自來水猛沖以免損壞超濾膜。保存:清洗并消毒后的超濾離心管應置于干凈的容器中,并加入適量的MilliQ水或純水沒過超濾膜以防止其失水變干。將容器置于4℃冰箱中保存?zhèn)溆?。如果需要長期保存,請按照制造商的推薦方法進行。使用超濾離心管時應注意避免過度旋轉造成樣品混亂并影響分離效果。
當濃縮到剩下1ml時,取50ul緩沖溶液,加入10ul流穿,看有沒變藍色,以此判斷超濾管是否漏掉蛋白。如果管漏了,將上層和流穿重新倒入新管中開始超濾。要精確判斷是否漏管,用5mgml的BSA離心10min,再取流穿,跑蛋白膠或Bradford粗測,繼續(xù)加入剩下的蛋白液濃縮(在冰上操作,防止蛋白受熱),直到所有濃縮液都加完為止。離心過程中注意是否發(fā)生蛋白沉淀,導致堵管。若發(fā)生沉淀,要確定沉淀的具體原因,是蛋白濃度過高還是Buffer不合適;前者可用多根超濾管同時超濾,降低濃度的辦法解決,后者的方法是換不同的緩沖溶液,直到蛋白不發(fā)生沉淀為止。超濾離心管的應用領域普遍,包括生物醫(yī)學研究、制藥工業(yè)、食品科學等。寧波10K超濾離心管工廠
超濾離心管通常需要在低溫條件下進行操作,以避免目標分子被破壞或失活。鄭州濃縮超濾離心管訂做
實驗室常用的離心管有塑料的和玻璃的,一般塑料的用得較多,因為玻璃的離心管不能用在高速或者超速離心機上。塑料的離心管又有PC (聚碳酸酯)、PE (聚乙烯)、PP(聚丙烯)等材質。PP的管子性能相對來說比較好。塑料的離心管透明或者半透明,可以直觀地看到樣品的離心情況,但是比較容易變形,抗有機溶劑的腐蝕性較差,所以使用壽命較短。因此,實驗室一般會經常購買離心管。PC (聚碳酸酯):透明度較好,硬度大,可以高溫消毒,但不耐強酸強堿以及一些有機溶劑如酒精之類。主要用于5萬轉以上的超高速離心。PE(聚乙烯):不透明。和丙銅、醋酸、鹽酸等不反應,較為穩(wěn)定,高溫下容易變軟。PP(聚丙烯):半透明,化學及溫度穩(wěn)定性較好,但是在低溫下會變脆,所以在離心時不要在4℃以下。鄭州濃縮超濾離心管訂做