國(guó)際上流行的【血清融化三步法】可較為大限度地保存血清中因子的活性,不會(huì)產(chǎn)生沉淀,同時(shí)能縮短血清融化時(shí)間。關(guān)于胎牛血清的滅活:真正的胎牛血清因?yàn)樘ヅ](méi)有形成有效補(bǔ)體,如果針對(duì)補(bǔ)體滅活的話,就不需要。其他情況根據(jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)來(lái)決定。胎牛血清的濃度:胎牛血清通常是以2%~20%的比例加到基礎(chǔ)培養(yǎng)基中,混合后配成完全培養(yǎng)基。曾有文獻(xiàn)報(bào)道,不同胎牛血清濃度對(duì)細(xì)胞存在一定的影響,尤其是干細(xì)胞和原代細(xì)胞。具體很好濃度需要用戶根據(jù)自己的實(shí)驗(yàn)來(lái)確定,以既保證培養(yǎng)的效果,又避免血清的浪費(fèi)。血清的成份可能有幾百種之多,對(duì)其準(zhǔn)確的成份、含量及其作用機(jī)制仍不清楚。東莞優(yōu)級(jí)胎牛血清哪里有
血清的保存應(yīng)該注意:血清中的沉淀物、絮狀物:主要是血清中的脂蛋白變性及解凍后血清中纖維蛋白造成,這些絮狀物不會(huì)影響血清本身的質(zhì)量,可用離心3000rpm,5分鐘去除,也可不用處理,顯微鏡下"小黑點(diǎn)"。經(jīng)過(guò)熱處理過(guò)的血清,沉淀物的形成會(huì)明顯增多。有些沉淀物在顯微鏡下觀察象"小黑點(diǎn)",常誤認(rèn)為血清受污染,一般情況下,此小黑點(diǎn)不會(huì)影響細(xì)胞生長(zhǎng),但如果懷疑血清質(zhì)量,則應(yīng)立即停止使用,更換另一批號(hào)的血清。切勿將血清在37℃放置太久,否則血清會(huì)變得渾濁,同時(shí)血清中的有效成分會(huì)破壞而影響血清質(zhì)量。東莞優(yōu)級(jí)胎牛血清哪里有胎牛血清的無(wú)菌檢驗(yàn):陰性;支原體檢驗(yàn): 陰性;細(xì)菌內(nèi)有毒的 ≤5(EU/ml)。
胎牛血清:八月齡胎牛心臟穿刺取血;新生牛血清:出生12-24小時(shí)新生牛靜脈;又可細(xì)分為:a.高級(jí)新生牛血清:后靜置自然析出的血清;b.標(biāo)準(zhǔn)新生牛血清:c.經(jīng)離心分離的血清;d.普通新生牛血清:融血或微融血的血清;小牛血清:出生三月齡小牛動(dòng)脈分離血清;血清是血漿去除纖維蛋白而形成的一種很復(fù)雜的混合物,其組成成份雖大部分已知,但還有一部分尚不清楚,且血清組成及含量常隨供血?jiǎng)游锏男詣e、年齡、生理?xiàng)l件和營(yíng)養(yǎng)條件不同而異。血清中含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長(zhǎng)因子、、無(wú)機(jī)物等,這些物質(zhì)對(duì)促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)或抑制生長(zhǎng)活性是達(dá)到生理平衡的。對(duì)血清的成分和作用的研究雖有很大進(jìn)展,但仍存在一些問(wèn)題。胎牛血清是品質(zhì)較為高的,因?yàn)樘ヅ_€未接觸外界,血清中所含的抗體、補(bǔ)體等對(duì)細(xì)胞有害的成分較為少。
合格的胎牛血清都需要經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的多重質(zhì)檢和驗(yàn)證,這里需要特別關(guān)注胎牛血清的相關(guān)質(zhì)量合格證明,不但不能含有有害微生物,如細(xì)菌、菌類、支原體、病毒等,同時(shí)也必須通過(guò)了各種性能測(cè)試實(shí)驗(yàn)。通過(guò)驗(yàn)證細(xì)胞的形態(tài)、增殖速度、克隆形成率等多項(xiàng)測(cè)試,性能表現(xiàn)優(yōu)異的胎牛血清對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)更友好,效果更明顯。胎牛血清作為畜牧業(yè)的副產(chǎn)品,產(chǎn)量十分有限,且受到天然環(huán)境、食物衛(wèi)生、經(jīng)濟(jì)條件及等各種因素的影響,很好的胎牛血清就更加稀有。因此,找到穩(wěn)定提供同批次胎牛血清的供應(yīng)商,對(duì)于確保自己細(xì)胞實(shí)驗(yàn)結(jié)果的真實(shí)性和可重復(fù)性具有重要意義,還能大量節(jié)省試錯(cuò)(經(jīng)濟(jì))成本。血清有免疫,維持酸堿平衡和滲透壓的作用,血清蛋白質(zhì)亦可儲(chǔ)備供給機(jī)體蛋白質(zhì)不足時(shí)的應(yīng)用。
非正規(guī)胎牛血清的產(chǎn)品會(huì)存在很多的問(wèn)題:疫區(qū)來(lái)源,無(wú)合格質(zhì)檢使胎牛血清存在生物學(xué)污染:支原體、噬菌體、病毒、原蟲(chóng)等,會(huì)直接影響實(shí)驗(yàn)的結(jié)果和穩(wěn)定。工藝不規(guī)范,導(dǎo)致采集的原血放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或操作不當(dāng)導(dǎo)致溶血,血液中血細(xì)胞裂解,血清顏色呈紅色或暗紅色,這樣的血清含有許多胞內(nèi)產(chǎn)物,里面很多物質(zhì)都會(huì)對(duì)細(xì)胞有刺激作用,影響實(shí)驗(yàn)的穩(wěn)定性和數(shù)據(jù)的真實(shí)性。血清批次不穩(wěn)定,添加來(lái)補(bǔ)?很多不法商販拿到低廉的疫區(qū)原料血清進(jìn)行加工生產(chǎn),為了保障血清的培養(yǎng)效果會(huì)對(duì)血清進(jìn)行處理,較為常見(jiàn)的是添加、轉(zhuǎn)鐵蛋白、BSA、生長(zhǎng)因子等,還有的會(huì)和新生牛血清、培養(yǎng)基等勾兌,更有甚者用的根本就不是牛血清,此類操作對(duì)所有生物學(xué)實(shí)驗(yàn)都有巨大的影響。血清的主要作用是提供促接觸和生長(zhǎng)因子使細(xì)胞貼壁免受機(jī)械損傷、對(duì)培養(yǎng)中的細(xì)胞起到某些保護(hù)作用。東莞優(yōu)級(jí)胎牛血清哪里有
胎牛血清起酸堿度緩沖液作用。東莞優(yōu)級(jí)胎牛血清哪里有
熱滅活:一般是以56℃,30分鐘來(lái)處理已解凍的血清,因?yàn)榇思訜岵襟E,可以使補(bǔ)體去活化,而補(bǔ)體所參與的反應(yīng)有:溶細(xì)胞活性,平滑肌的收縮,肥大細(xì)胞和血小板組胺的釋放,增強(qiáng)吞噬作用,淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞的趨化和。有必要做熱滅活嗎?實(shí)驗(yàn)顯示,經(jīng)過(guò)正確處理的熱滅清,對(duì)大多數(shù)的細(xì)胞而言是不需要的。經(jīng)此處理過(guò)的血清對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)只有微小的促進(jìn),或完全沒(méi)有任何作用,甚至通常因?yàn)楦邷靥幚碛绊懥搜宓馁|(zhì)量,而造成細(xì)胞生長(zhǎng)速率的降低。而經(jīng)過(guò)熱處理的血清,沉淀物的形成會(huì)明顯的增多,這些沉淀物在倒立顯微鏡下觀察,像是 "小黑點(diǎn)",常常會(huì)讓研究者誤以為是血清遭受污染,而把血清放在37℃環(huán)境中,又會(huì)使此沉淀物更增多,使研究者誤認(rèn)為是微生物的分裂擴(kuò)增。購(gòu)買的時(shí)候注意詢問(wèn)廠家是否是已滅清。東莞優(yōu)級(jí)胎牛血清哪里有
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胎牛血清在使用過(guò)程中可能對(duì)環(huán)境產(chǎn)生一定的影響。在生物醫(yī)學(xué)研究和生物制藥工業(yè)中,胎牛血清通常用作培養(yǎng)基的組成部分,用于細(xì)胞培養(yǎng)和病毒繁殖。然而,胎牛血清的使用可能會(huì)導(dǎo)致一些問(wèn)題。首先,胎牛血清的質(zhì)量和成分可能存在一定的差異,這可能會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果和產(chǎn)品質(zhì)量產(chǎn)生影響。其次,胎牛血清的使用可能會(huì)引入一些未知的病原體,從而對(duì)實(shí)驗(yàn)室安全和產(chǎn)品安全構(gòu)成潛在威脅。此外,大量使用胎牛血清會(huì)導(dǎo)致胎牛的需求量增加,進(jìn)一步加劇了胎牛的飼養(yǎng)和養(yǎng)殖壓力。針對(duì)以上問(wèn)題,有一些可能的解決方案可以被采取。首先,可以通過(guò)改進(jìn)胎牛血清的生產(chǎn)過(guò)程來(lái)減少對(duì)環(huán)境的影響。例如,可以采用有機(jī)飼料和無(wú)農(nóng)藥的農(nóng)業(yè)生產(chǎn)方式,減少對(duì)土壤和水源的污染。...