細胞培養(yǎng)基的種類按照細胞培養(yǎng)基的發(fā)展歷史,細胞培養(yǎng)基大致可分為平衡鹽溶液、天然細胞培養(yǎng)基、合成細胞培養(yǎng)基、無血清細胞培養(yǎng)基、限定化學(xué)成分細胞培養(yǎng)基等幾大種類。(balancedsaltsolution,BSS)BSS主要是由無機鹽、葡萄糖組成,它的作用是維持細胞滲透壓平衡,保持pH穩(wěn)定及提供簡單的營養(yǎng)。其主要用于細胞的漂洗、配制其他試劑等。幾種常用的BSS配方如下(表1-1)。D-Hank's與Hank's的一個主要區(qū)別是前者不含有Ca2+和Mg2+,因此D-Hank's常用于配制胰酶溶液。因為Ca2+、Mg2+是細胞膜的重要組成成份,參與細胞粘附等功能,使用不含Ca2+、Mg2+的BSS可避免細胞結(jié)團。此外,Hanks液和Earle液是常用的BSS基礎(chǔ)溶液,前者緩沖能力較弱,適合于密閉培養(yǎng);后者緩沖能力較強,適合于5%CO2的培養(yǎng)條件。表1-1幾種常用的BSS配方。Ham’s F-12常作為無血清培養(yǎng)的基礎(chǔ)培養(yǎng)液,在低血清含量下時,特別適合單細胞培養(yǎng)和克隆化培養(yǎng)。云南醫(yī)療細胞培養(yǎng)基批發(fā)
其本質(zhì)為含有鹽、氨基酸、維生素和其他必需營養(yǎng)物的pH緩沖的等滲混合物。在此基礎(chǔ)上,DMEM、IMDM、HAMF12、PRMI1640等各種合成細胞培養(yǎng)基被不斷開發(fā)出來。常用合成培養(yǎng)基的配方此處不詳細介紹。MEM(MinimalEssentialMedium)培養(yǎng)基MEM(MinimalEssentialMedium)培養(yǎng)基有含Earle's平衡鹽的類型,也有含Hanks'平衡鹽的類型;有高壓滅菌型的,也有過濾除菌型的;還有含非必需氨基酸的類型。是基本、適用范圍廣的細胞培養(yǎng)基。DMEM細胞培養(yǎng)基DMEM(Dulbecco’smodifiedMinimalEssentialMedium)是由Dulbecco在MEM培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上改良獲得的,各成分份量加倍,分低糖(1000mg/L)、高糖(4500mg/L)兩種類型。細胞生長快。附著稍差的腫瘤細胞、克隆培養(yǎng)用高糖效果較好,常用于雜交瘤的骨髓瘤細胞和DNA轉(zhuǎn)染的轉(zhuǎn)化細胞培養(yǎng)。IMDM細胞培養(yǎng)基IMDM(Iscove’smodifiedDMEM)是由Iscove在DMEM基礎(chǔ)上改良,增加了幾種氨基酸和胱氨酸量等??捎糜陔s交瘤細胞培養(yǎng),以及無血清培養(yǎng)的基礎(chǔ)細胞培養(yǎng)基。RPMI-1640細胞培養(yǎng)基專門針對淋巴細胞培養(yǎng)設(shè)計,含有BSS、21種氨基酸、維生素等,適于多種正常細胞和腫瘤細胞的培養(yǎng),也用做懸浮細胞培養(yǎng)。HamF12細胞培養(yǎng)基含微量元素。貴州昆蟲細胞培養(yǎng)基生產(chǎn)產(chǎn)家William’s E培養(yǎng)基主要用于大鼠肝上皮細胞的長期培養(yǎng),也可用于其他哺乳動物的肝細胞培養(yǎng)。
Ham’sF-12營養(yǎng)混合物(Ham’sF-12NutrientMixture)是由Ham在1969年以Ham’sF-10營養(yǎng)混合物為基礎(chǔ)設(shè)計而成的,**初用于CHO細胞的無血清培養(yǎng)。Ham’sF-12常作為無血清培養(yǎng)的基礎(chǔ)培養(yǎng)液,在低血清含量下時,特別適合單細胞培養(yǎng)和克隆化培養(yǎng),添加血清后也廣泛應(yīng)用于*細胞和原代細胞的培養(yǎng),如大鼠肝細胞、大鼠前列腺上皮細胞、軟骨細胞、大鼠成肌細胞、雞胚胎細胞等。此外,Ham’sF-12與DMEM等體積混合后,得到的DMEM/F12培養(yǎng)基營養(yǎng)更為豐富,使用更為較廣。NEAA(非必須氨基酸),是在MEM培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上添加L-丙氨酸、L-谷氨酸、L-天(門)冬酰胺、L-天(門)冬氨酸、L-脯氨酸、L-絲氨酸和甘氨酸7種NEAA,能降低細胞培養(yǎng)時細胞自身生產(chǎn)非必須氨基酸的副作用,有效促進細胞增殖代謝。葡萄糖可以根據(jù)研究需要,隨意調(diào)節(jié)葡萄糖的濃度,方便快捷。高糖型培養(yǎng)基普遍應(yīng)用于生長快、粘附性低的細胞、雜交瘤的骨髓瘤細胞、克隆細胞、DNA轉(zhuǎn)染的轉(zhuǎn)化細胞、各種原代病毒宿主細胞、單一細胞的培養(yǎng)以及疫苗的生產(chǎn),例如利用CHO細胞表達EPO和生產(chǎn)乙肝疫苗。低糖培養(yǎng)基更適合代謝作用較慢、依賴性貼壁細胞的培養(yǎng)。
Leibovitz’sL-15培養(yǎng)基的緩沖系統(tǒng)由磷酸鹽和游離堿基氨基酸組成,代替了傳統(tǒng)的碳酸氫鈉緩沖系統(tǒng),同時,用半乳糖和**酸鈉代替葡萄糖可以防止酸性代謝副產(chǎn)物的形成,有助于維持培養(yǎng)液PH的穩(wěn)定,適合用于非CO2平衡環(huán)境的細胞培養(yǎng)。Leibovitz’sL-15培養(yǎng)基適用于猴腎細胞和HEP-2的培養(yǎng)、原代(如胚胎和成人組織)細胞分離、多種病毒的培養(yǎng)以及神經(jīng)元的培養(yǎng)等。L-谷氨酰胺(Glutamine)是細胞培養(yǎng)中所必需的一種營養(yǎng)元素,但其在溶液中不穩(wěn)定,會自發(fā)降解,不含L-谷氨酰胺的培養(yǎng)基,可以根據(jù)研究需要任意調(diào)整L-谷氨酰胺的用量,在使用時添加新鮮的L-谷氨酰胺或其替代物更利于細胞的生長。 RPMI-1640是改進型的McCoy ‘s 5A培養(yǎng)基,使用碳酸氫鹽緩沖系統(tǒng)。
RPMI-1640細胞培養(yǎng)基已廣泛應(yīng)用于各種正常細胞和ai細胞的培養(yǎng),包括HeLa細胞、Jurkat細胞、MCF-7細胞、PC12細胞、PBMC細胞、星形膠質(zhì)細胞和ai細胞,是使用較廣的培養(yǎng)基之一。
HEPES是一種優(yōu)良的生物緩沖劑,對細胞無毒性作用,添加HEPES的培養(yǎng)基能夠較長時間保持恒定的PH范圍,可以有效的防止培養(yǎng)液PH波動較大對細胞生長產(chǎn)生不利的影響。可用于無CO2培養(yǎng)箱。酚紅在培養(yǎng)基中被用來作為PH值的指示劑,用以持續(xù)監(jiān)測培養(yǎng)液的酸堿度,在低PH值時酚紅使培養(yǎng)液呈黃色,而較高的PH值時使培養(yǎng)液呈紫色,PH值~,常適合細胞培養(yǎng)。但酚紅也有一些缺點,研究表明酚紅可以模擬固醇類(特別是雌)的作用,因此在用到雌敏感的細胞時(如乳腺組織),比較好使用不含酚紅的培養(yǎng)基。酚紅會干擾流式細胞分析時候的檢測。此外,一些無血清培養(yǎng)基的配方中若存在酚紅會干擾鈉-鉀平衡。青霉素-鏈霉素混合液通常也被稱為“雙抗”。 M199全稱Medium 199,即培養(yǎng)基199,是Morgan等在1950年設(shè)計的,初用于雞胚成纖維細胞的營養(yǎng)研究。山東實驗細胞培養(yǎng)基批發(fā)廠
M199含有獨特的成分,包括腺嘌呤、腺苷、次黃嘌呤、胸腺嘧啶、以及其他的維生素。云南醫(yī)療細胞培養(yǎng)基批發(fā)
可在血清含量低時用,適用于克隆化培養(yǎng)。F12適用于CHO細胞,也是無血清細胞培養(yǎng)基中常用的基礎(chǔ)細胞培養(yǎng)基。DMEM/F12細胞培養(yǎng)基將DMEM和F12按照1:1比例混合,混合后營養(yǎng)成份豐富,血清使用量也減少。常作為開發(fā)無血清細胞培養(yǎng)基時的基礎(chǔ)細胞培養(yǎng)基。與天然培養(yǎng)基相比,有些天然的未知成分尚無法用已知的化學(xué)成分所替代,因此,細胞培養(yǎng)中使用合成培養(yǎng)基時必須加入一定量的天然培養(yǎng)基成分,以克服合成培養(yǎng)基的不足。普遍的做法是添加5~10%的血清,這樣才能維持細胞活力,促進細胞增殖。針對不同的動物細胞,現(xiàn)已開發(fā)了多種商業(yè)化、個性化的低血清細胞培養(yǎng)基配方,營養(yǎng)成份更加豐富,血清使用量可降低至1~3%,由此可減少了血清等動物來源成份對生物制品安全性的影響。無血清細胞培養(yǎng)基(serumfreemedium,SFM)經(jīng)歷了天然培養(yǎng)基、合成培養(yǎng)基后,無血清培養(yǎng)基和無血清培養(yǎng)成為當(dāng)今細胞培養(yǎng)領(lǐng)域的一大趨勢。采用無血清培養(yǎng)可降低生產(chǎn)成本,簡化分離純化步驟,避免病毒污染造成的危害。無血清培養(yǎng)基,一般是在合成培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上,加入成份完全明確的或部分明確的血清替代成份,達到既能滿足動物細胞培養(yǎng)的要求,又能有效克服使用血清所帶來問題的目的。云南醫(yī)療細胞培養(yǎng)基批發(fā)
深圳市華晨陽科技有限公司是一家致力于核酸檢測、分子診斷、醫(yī)學(xué)檢驗、病毒檢測等產(chǎn)品研發(fā)、生產(chǎn)、銷售于一體的國家高新技術(shù)企業(yè)。公司擁有二十多項**,部分專利已經(jīng)轉(zhuǎn)化應(yīng)用于市場。產(chǎn)品主要應(yīng)用于基因檢測、醫(yī)療機構(gòu)、生物制藥、大型甲等醫(yī)院、出入境檢驗檢疫、診斷試劑、疾控機構(gòu)、刑偵法醫(yī)鑒定等。近年來,公司不斷加大自主研發(fā)投入,積極引進人才和技術(shù),并與國內(nèi)外多家科研機構(gòu)、醫(yī)學(xué)檢驗所以及三甲醫(yī)院、基因檢測公司、疾病預(yù)防控制中心等科研機構(gòu)有著緊密合作,促進人類健康產(chǎn)業(yè)大發(fā)展。