芯棄疾JX-8B數(shù)字ELISA產(chǎn)品
每個生物實驗室都用得起的單分子免疫檢測
珠子以兩種不同的方式讀出。首先,在與100μMresorufin-阝-D孵育1小時后,用熒光板讀出器以100μL方式讀出珠子結(jié)合-半乳糖苷(RGP),一種熒光底物for阝-半乳糖苷酶。在平板閱讀器上,檢測限為15fMofS阝G(圖2)。其次,將珠子加載然后將RGP溶液密封到陣列的孔中,單個酶的信號被允許在反應(yīng)室中積累,并每30秒獲取一次熒光圖像。實驗結(jié)束時獲取陣列的白光圖像以識別含有珠子的孔(含有珠子的孔散射光與空井不同)。熒光圖像用于確定哪些微球具有相關(guān)的結(jié)合酶(從時間變化的熒光圖像中強度增加)。圖2顯示了微球中含酶的比例與總體S阝G濃度的關(guān)系的對數(shù)-對數(shù)圖。檢測到的比較低酶偶聯(lián)物濃度為350飛摩爾(zM),并通過外推信號等于的酶濃度計算得出的檢測限(LOD)。 芯棄疾JX-8B單分子小型化ELISA檢測產(chǎn)品,每個醫(yī)學(xué)實驗室都能用的單分子檢測;單分子級別數(shù)字ELISA特點
芯棄疾JX-8B數(shù)字ELISA產(chǎn)品
每個生物實驗室都用得起的單分子免疫檢測
從TNF-α數(shù)字ELISA測定的檢測限為~150aM(2.5fg/mL),相當(dāng)于全血中的~600aM(10fg/mL);市場上可用的ELISA對TNF-α的比較高靈敏度在血清中的LOD為21fM(0.34pg/mL)(補充圖3)。兩種方法的目標(biāo)蛋白零濃度尖峰均為為這些實驗提供有用的陰性對照:25%的血清含有多種蛋白質(zhì)的微摩爾濃度,在這些高蛋白質(zhì)背景之上可以檢測到非常低濃度的目標(biāo)蛋白。我們還開發(fā)了一個證明用于顯示低濃度核酸可以檢測到的DNA的主要數(shù)字分析方法,而無需復(fù)制目標(biāo)
單分子免疫檢測數(shù)字ELISA高速檢測芯棄疾JX-8B單分子ELISA檢測產(chǎn)品,少至可以進(jìn)行8孔、4孔的靈活檢測。
芯棄疾JX-8B數(shù)字ELISA,每個生物/醫(yī)學(xué)實驗室都用得起的單分子免疫檢測;
單分子的檢測原理:由Simoa數(shù)字免疫分析法實現(xiàn)的超靈敏度已在先前討論過。簡而言之,類似免疫分析中的酶-底物反應(yīng)是在相對較大的反應(yīng)體積(50-100μL)中進(jìn)行的,在信號生成步驟中稀釋了產(chǎn)物分子。信號分子的擴散和稀釋將靈敏度限制在皮摩爾范圍內(nèi)。相比之下,Simoa通過將單獨標(biāo)記的免疫復(fù)合物和底物限制在飛升大小的孔中,從而限制了熒光產(chǎn)物分子從酶-底物反應(yīng)中的擴散。當(dāng)單一酶標(biāo)簽催化底物轉(zhuǎn)化為熒光產(chǎn)物時,產(chǎn)生的熒光團被限制在孔中,從而在短時間內(nèi)產(chǎn)生可測量的熒光信號。
芯棄疾JX-8B數(shù)字ELISA高敏檢測產(chǎn)品,使用現(xiàn)有平臺就能做的單分子免疫檢測;
參考的其他高靈敏檢測方法: 芯棄疾JX-8B數(shù)字ELISA,極速檢測,檢測用時只需要 15-30min!
兩種更多測試的模擬分析信號放大技術(shù)是免疫PCR和生物條形碼分析。免疫PCR通過將檢測抗體標(biāo)記為DNA分子,然后使用PCR進(jìn)行擴增和定量,從而提高靈敏度。生物條形碼分析利用了與DNA“條形碼”標(biāo)記的抗分析物納米顆粒,這些納米顆粒在與捕獲在金微粒上的分析物結(jié)合后,從納米顆粒上脫雜以進(jìn)行定量。這兩種方法相對于傳統(tǒng)免疫分析法的靈敏度提高了10到100倍,但尚未整合到所需的全自動系統(tǒng)中,也未用于多重分析。為了比較大限度地加速藥物發(fā)現(xiàn)、驗證新型生物標(biāo)志物并將分子水平診斷引入臨床主流,需要一種具有高效率、高質(zhì)量數(shù)據(jù)和成本效益的穩(wěn)健、多重超靈敏蛋白質(zhì)檢測技術(shù)。芯棄疾JX-8B數(shù)字ELISA產(chǎn)品
每個生物實驗室都用得起的單分子免疫檢測
人類形式的蛋白質(zhì)被加入到25%牛血清中以代替臨床測試樣本;通常使用四倍稀釋因子以減少免疫測定中的基質(zhì)效應(yīng)4。使用數(shù)字ELISA檢測25%血清中的PSA,從該實驗中確定了LOD為~50aM(1.5fg/mL),相當(dāng)于整個血清中的LOD為~200aM(6fg/mL)。檢測到的比較低濃度為250aM,相當(dāng)于25%血清中的1fMin全血清。由于LOD是通過外推背景濃度來確定的加上背景的三個標(biāo)準(zhǔn)差,不同運行的LOD取決于背景的CV。在具有典型背景方差的幾個實驗中,全血清PSA的亞飛摩爾LOD得以保持。相比之下,一種前列的商業(yè)PSA檢測方法(ADVIACentaur,西門子)報告在人血清中的LOD為3pM(0.1ng/mL),并且已經(jīng)報道了LOD在10-30fM17,26。 芯棄疾JX-8B單分子小型化ELISA檢測產(chǎn)品,多重檢測,同時測試2-6個檢測項目;芯棄疾產(chǎn)品數(shù)字ELISA穩(wěn)定性
芯棄疾JX-8B簡易版單分子ELISA檢測產(chǎn)品,極速檢測,檢測步驟只需要3次操作,遠(yuǎn)遠(yuǎn)快于常規(guī)ELISA;單分子級別數(shù)字ELISA特點
芯棄疾JX-8B數(shù)字ELISA產(chǎn)品
每個生物實驗室都用得起的單分子免疫檢測
為了證明檢測極低濃度的可能診斷價值使用數(shù)字ELISA檢測血液中的蛋白質(zhì),對接受治理性前列腺切除術(shù)(RP)的患者血清樣本中的PSA進(jìn)行了測量。PSA是前列腺病的血清生物標(biāo)志物病癥既用作篩查工具,也用于監(jiān)測住院患者的復(fù)發(fā)接受治理性前列腺切除術(shù)28。治理性前列腺切除術(shù)后,絕大多數(shù)PSA被消除,水平低于標(biāo)準(zhǔn)商用檢測方法的檢測限(3pM或0.1ng/mL)。定期監(jiān)測這些患者的PSA恢復(fù)情況可以檢測前列腺病的復(fù)發(fā),但術(shù)后幾年內(nèi)生化復(fù)發(fā)可能不會被發(fā)現(xiàn)。 單分子級別數(shù)字ELISA特點