外泌體的生物發(fā)生途徑主要包括三個(gè)關(guān)鍵的檢查點(diǎn):ILV的形成,阻止MVEs的降解以及MVEs和細(xì)胞膜的融合,這三個(gè)檢查點(diǎn)都包含在內(nèi)體相關(guān)的囊泡運(yùn)輸過(guò)程中。RABGTPase定位到特定膜結(jié)構(gòu)的表面,通過(guò)招募效應(yīng)因子來(lái)調(diào)節(jié)相應(yīng)膜結(jié)構(gòu)的囊泡運(yùn)輸,例如,在內(nèi)體溶酶體運(yùn)輸網(wǎng)絡(luò)中,RAB5調(diào)節(jié)早期內(nèi)體的形成及相互融合;內(nèi)體膜上RAB5到RAB7的轉(zhuǎn)換調(diào)節(jié)早期向晚期內(nèi)體的轉(zhuǎn)變;RAB7調(diào)節(jié)晚期內(nèi)體/MVEs與溶酶體的融合來(lái)降解ILVs;RAB27調(diào)節(jié)MVEs與細(xì)胞膜的對(duì)接和融合來(lái)釋放ILVs形成外泌體。內(nèi)吞的膜蛋白,特別是受體酪氨酸激酶家族的表皮生長(zhǎng)因子受體,定位到內(nèi)體和MVEs,通過(guò)MVEs和溶酶體融合來(lái)進(jìn)入溶酶體降解,此過(guò)程受多種RABGTPases和ESCRT復(fù)合體的調(diào)控。突狀細(xì)胞釋放的外泌體可以強(qiáng)化殺傷性T細(xì)胞對(duì)癥狀細(xì)胞的特異性反應(yīng)。外泌體怎么提的費(fèi)用
人體內(nèi)多種細(xì)胞在正常及病理狀態(tài)下均可分泌外泌體,包括干細(xì)胞、免疫細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、血小板及平滑肌細(xì)胞等。外泌體被包裹在堅(jiān)硬的雙層膜中。雙層膜保護(hù)外泌體的內(nèi)容物,使外泌體能夠在組織中長(zhǎng)距離移動(dòng)。干細(xì)胞外泌體因在上皮組織的增殖、遷移、再生、炎癥和瘢痕控制等方面的作用,有望成為“無(wú)細(xì)胞的細(xì)胞治理”工具。干細(xì)胞來(lái)源的外泌體可通過(guò)囊泡,將干細(xì)胞的精華部分——mRNA、miRNA、IncRNA及蛋白質(zhì)等生物活性物質(zhì),打包運(yùn)出干細(xì)胞體外。通過(guò)“細(xì)胞間高速公路”來(lái)“快遞”到人體各個(gè)組織內(nèi)。UMIBIO價(jià)格外泌體提純方法中,超速離心法和聚合物沉淀法(市售試劑盒)混入多種雜質(zhì)。
研究采用蔗糖密度梯度離心聯(lián)合2次PEG6000沉淀,極大地降低了外泌體的提取成本,且獲得的外泌體不僅表達(dá)外泌體公認(rèn)的標(biāo)志蛋白分子,同時(shí)也表達(dá)胎盤(pán)特異性蛋白分子,證明通過(guò)這種方法獲得的外泌體是胎盤(pán)來(lái)源外泌體。通過(guò)蔗糖密度梯度離心后得到的外泌體沉淀經(jīng)蛋白質(zhì)SDS-PAGE膠電泳,銀染后可見(jiàn)各蛋白分子條帶清晰可見(jiàn),動(dòng)態(tài)光散射分析粒徑,結(jié)果顯示獲得的外泌體顆粒粒徑大部分分布于28-91nm之間,與文獻(xiàn)報(bào)道外泌體顆粒大小相一致。胎盤(pán)外泌體經(jīng)過(guò)PKH67熒光染料染色后,與細(xì)胞共孵育,熒光顯微鏡下觀察外泌體具備進(jìn)入細(xì)胞的活性,進(jìn)一步驗(yàn)證了我們應(yīng)用此種改良的分離方法可有效的獲得胎盤(pán)來(lái)源的外泌體。本研究通過(guò)蔗糖密度梯度離心聯(lián)合2次PEG6000沉淀成功分離得到母體血清中胎盤(pán)來(lái)源外泌體,并從蛋白標(biāo)志分子、電鏡、粒徑及分布、進(jìn)入細(xì)胞活性四方面對(duì)其進(jìn)行了鑒定,為研究妊娠期間胎盤(pán)外泌體在正常妊娠及胎盤(pán)源性并發(fā)癥中的作用奠定了基礎(chǔ)。
隨著外泌體研究的不斷深入和其在疾病診斷、調(diào)理及藥物研發(fā)等領(lǐng)域的應(yīng)用前景逐漸明朗,外泌體提取試劑盒的市場(chǎng)需求也在不斷增加。目前,各大生物科技公司都在積極推出自己的外泌體提取試劑盒,市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)日益激烈。然而,隨著技術(shù)的不斷進(jìn)步和科研工作者對(duì)外泌體需求的增加,外泌體提取試劑盒的市場(chǎng)前景仍然十分廣闊。在使用外泌體提取純化試劑盒進(jìn)行實(shí)驗(yàn)時(shí),需要注意以下幾點(diǎn):嚴(yán)格按照使用說(shuō)明書(shū)中的步驟進(jìn)行操作,避免誤操作導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果受影響。在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中要注意樣品的處理,避免污染和交叉污染。提取的外泌體應(yīng)妥善保存,避免反復(fù)凍融對(duì)樣品質(zhì)量造成影響。如遇到實(shí)驗(yàn)問(wèn)題,可以參考常見(jiàn)問(wèn)題解答或者聯(lián)系廠家技術(shù)支持尋求幫助。必須慎重分析得到的是否是外泌體。
在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域,隨著對(duì)外泌體(Exosomes)的深入研究,這一小囊泡在細(xì)胞間通訊、疾病診斷、藥物傳遞等方面展現(xiàn)出了巨大的潛力。為了滿足科研工作者對(duì)高質(zhì)量外泌體提取的需求,各大生物科技公司紛紛推出了一系列高效、便捷的外泌體提取試劑盒。現(xiàn)在,我們就來(lái)詳細(xì)介紹一款備受關(guān)注的外泌體提取試劑盒——Tumibio®UR52121外泌體提取純化試劑盒。外泌體是由細(xì)胞分泌的包含RNA和蛋白質(zhì)的小囊泡,直徑約為30-150納米。它們普遍存在于血液、唾液、尿液及乳汁等體液中,參與細(xì)胞間的通訊和信號(hào)傳遞。近年來(lái),外泌體在疾病診斷、調(diào)理及藥物研發(fā)等領(lǐng)域的應(yīng)用前景日益凸顯。例如,某些疾病的外泌體特征可以作為診斷依據(jù);外泌體還可以作為藥物載體,將藥物精確地輸送到病變部位。外泌體可以直接進(jìn)入受體細(xì)胞影響細(xì)胞功能。細(xì)胞提取外泌體價(jià)格
干細(xì)胞外泌體通過(guò)改變細(xì)胞外基質(zhì),改變受體細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄組和蛋白質(zhì)組,調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡,生長(zhǎng),增殖和分化途徑。外泌體怎么提的費(fèi)用
外泌體中包含的mRNAs和miRNAs在進(jìn)入受體細(xì)胞后仍具有翻譯蛋白質(zhì)、促進(jìn)病毒感ran等功能。據(jù)估計(jì),單個(gè)外泌體含有約≤100拷貝數(shù)的蛋白質(zhì)和≤10000拷貝數(shù)的核苷酸。不同細(xì)胞來(lái)源的外泌體中既包含與細(xì)胞形成、結(jié)構(gòu)和物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)的共有成分,也包含與來(lái)源細(xì)胞的生物功能相關(guān)的特異分子。如B淋巴細(xì)胞、樹(shù)突狀細(xì)胞、肥大細(xì)胞和腸上皮細(xì)胞來(lái)源的外泌體含有大量的主要組織相容性復(fù)合體蛋白質(zhì)MHCclassⅡ和MHCclassⅠ,血小板和T細(xì)胞來(lái)源的外泌體則包含諸如血管性血友病因子、穿孔素和顆粒酶等特殊蛋白質(zhì),而ai細(xì)胞來(lái)源的外泌體表面可能含有中流特異的蛋白質(zhì)分子。這類(lèi)特異分子在外泌體介導(dǎo)細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、參與生理病理過(guò)程中發(fā)揮至關(guān)重要的作用。外泌體怎么提的費(fèi)用