外泌體可以由體內(nèi)或體外培養(yǎng)的幾乎所有類(lèi)型的細(xì)胞分泌,并廣fan存在于血漿、膽汁、尿液、母乳、唾液、胸腔積液、淋巴、胃酸、支氣管肺泡灌洗液、腦脊液、眼淚、滑膜液、羊水、腹水、鼻分泌物和子宮抽吸物液體等體液中。目前,基于不同的分離原理,研究者建立了五種主要的提取純化技術(shù),分別為基于質(zhì)量密度的超速離心技術(shù)、基于粒徑大小的分離技術(shù)、基于溶解性質(zhì)的聚合物沉淀技術(shù)、基于免疫親和原理的分離技術(shù)和基于流體性質(zhì)的微流控技術(shù)。外泌體作為核酸分子的藥物載體主要用于基因治理。福建外泌體熒光標(biāo)記

外泌體由于包含的內(nèi)容物具有明顯的組織特異性，為其能成為瘤早期診斷的生物標(biāo)志物提供了重要保障。但目前對(duì)于外泌體miRNA、LnkRNA等的檢測(cè)方法還不成熟，限制了外泌體用于疾病診斷中的應(yīng)用?；谕饷隗w的診斷產(chǎn)品獲得FDA批準(zhǔn)上市，很大程度的增加了研發(fā)企業(yè)的信心。外泌體的異質(zhì)性又決定了外泌體藥物遞送系統(tǒng)不能提供一個(gè)普適的遞藥策略，必須根據(jù)所傳遞治理物質(zhì)的類(lèi)型、目標(biāo)組織的特點(diǎn)等進(jìn)行針對(duì)性的進(jìn)行策略調(diào)整。良好的生物兼容性、穩(wěn)定性和內(nèi)在靶向性等使外泌體在藥物遞送方向大有潛力。外泌體vectory有報(bào)導(dǎo)指出，外泌體內(nèi)miRNA參與促進(jìn)血管新生、抗癥性和促進(jìn)膠原蛋白沉淀等一系列過(guò)程。

細(xì)胞分泌外泌體的過(guò)程一般分為三個(gè)階段:(1)質(zhì)膜內(nèi)陷,形成早期內(nèi)吞小泡;(2)內(nèi)吞小泡向內(nèi)萌發(fā)成熟,形成多囊泡體;(3)多囊泡體與質(zhì)膜融合,并釋放出囊泡內(nèi)容物,形成外泌體。外泌體具有獨(dú)特的理化性質(zhì),其密度為1.13~1.19g/mL,由平均厚度小于5nm的雙層脂膜所包裹,具有典型杯狀形態(tài),呈現(xiàn)為扁平球形。外泌體表面富含多糖鏈,其質(zhì)膜主要由溶血磷脂酸、磷脂酰絲氨酸、膽固醇、神經(jīng)酰胺和鞘磷脂構(gòu)成,另有與細(xì)胞來(lái)源相關(guān)的部分特殊脂類(lèi)。外泌體可攜帶蛋白質(zhì)、核酸和脂質(zhì)等生物活性大分子,其中主要為蛋白質(zhì),且大部分蛋白為所有來(lái)源外泌體所共有,只有小部分與其來(lái)源有關(guān),為其分泌細(xì)胞的特有蛋白,能夠反映分泌細(xì)胞的類(lèi)型和生理病理狀態(tài)。除此之外,外泌體可攜帶大量mRNA和miRNA等核酸,并將其運(yùn)輸?shù)桨屑?xì)胞,發(fā)揮相應(yīng)的生物學(xué)功能。

雖然外泌體在疾病的診斷上有天然優(yōu)勢(shì)，但在臨床應(yīng)用上仍有一些限制：外泌體的提取方法金標(biāo)準(zhǔn)仍然是差速離心法，但這種方法費(fèi)時(shí)費(fèi)力且提取效率較低，難以進(jìn)行臨床推廣和應(yīng)用；而商業(yè)化的試劑盒質(zhì)量參差不齊，往往導(dǎo)致提取物雜質(zhì)過(guò)多，且其售價(jià)較高。外泌體的定量是采用顆粒濃度定量，蛋白濃度定量，亦或是核酸濃度定量，目前仍存有爭(zhēng)議。由于傳統(tǒng)的內(nèi)參并不適用于外泌體，在實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)靶分子含量時(shí)內(nèi)參的選擇尚沒(méi)有統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)。外泌體分子標(biāo)志物的研究還處于初級(jí)階段。目前外泌體研究的整個(gè)流程中成本都很高。外泌體可以直接進(jìn)入受體細(xì)胞影響細(xì)胞功能。

前列腺ai患者尿液外泌體中的miR-574-3p、miR-141-5p和miR-21-5p的表達(dá)水平明顯上升，表明這些miRNAs可用于前列腺ai的早期篩查。膽管ai是惡性程度較高的消化系統(tǒng)中流，發(fā)展隱蔽且臨床癥狀及體征出現(xiàn)晚，故給早期診斷帶來(lái)困難。高通量小RNA測(cè)序篩查了來(lái)自膽管ai和膽囊ai患者外泌體中一系列差異表達(dá)的miRNA，小RNA長(zhǎng)度在正常個(gè)體、膽管ai患者和膽囊ai患者之間的分布存在明顯差異，膽管ai患者的外泌體中miR-96-5p、miR-151a-5p、miR-191-5p、miR-4732-3p明顯升高，而膽囊ai患者的外泌體中miR-151a-5p略有升高，為膽管ai和膽囊ai提供了一套新的生物診斷標(biāo)志物。外泌體大小不均的原因可能是由于MVB的限制膜不均勻內(nèi)陷，導(dǎo)致流體和固體的總含量不同。上海CD63外泌體慢病毒包裝

外泌體與各種疾病的相關(guān)性被檢測(cè)出，特別是血液中釋放的病細(xì)胞來(lái)源的外泌體。福建外泌體熒光標(biāo)記

多項(xiàng)研究表明中流細(xì)胞來(lái)源的外泌體能夠抑制免疫相關(guān)的信號(hào)通路、阻礙機(jī)體對(duì)中流的免疫響應(yīng)。Chen等研究發(fā)現(xiàn)黑色素瘤細(xì)胞、乳腺ai和肺ai細(xì)胞會(huì)產(chǎn)生攜帶程序性死亡分子1的配體(programmedcelldeath1ligand1，PD-L1)的外泌體，此類(lèi)外泌體在血液中循環(huán)，通過(guò)表面PD-L1與T細(xì)胞結(jié)合，導(dǎo)致T細(xì)胞在到達(dá)中流細(xì)胞之前即受到抑制，達(dá)到遠(yuǎn)程干擾免疫細(xì)胞活性的效果。中流來(lái)源的外泌體能夠抑制骨髓來(lái)源的抑制性細(xì)胞(該細(xì)胞是樹(shù)突狀細(xì)胞(dendriticcells，DCs)、巨噬細(xì)胞和(或)粒細(xì)胞的前體，具有抑制免疫細(xì)胞應(yīng)答的能力)對(duì)中流的免疫監(jiān)督。中流細(xì)胞來(lái)源的外泌體與巨噬細(xì)胞共孵育后，其內(nèi)的miRNA-301a通過(guò)下調(diào)抑ai基因PTEN)，激huoPI3Kγ(phosphoinositide3-kinaseγ)信號(hào)分子，使巨噬細(xì)胞被“馴化”成為能參與抗yan反應(yīng)、血管生成以及促進(jìn)中流生長(zhǎng)轉(zhuǎn)移的M2型巨噬細(xì)胞。福建外泌體熒光標(biāo)記