事實(shí)上,動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明:在小鼠急性心肌梗塞術(shù)后,注射來源于間充質(zhì)干細(xì)胞、心臟祖細(xì)胞、胚胎干細(xì)胞或心肌源性細(xì)胞的外泌體均可改善心臟功能,減輕心臟纖維化,刺激血管生成。例如,心源性細(xì)胞外泌體能通過特異性的巨噬細(xì)胞極化為急性心肌梗死提供心臟保護(hù)作用。心臟再灌注后,CDCexo的輸注降低了大鼠和豬心肌梗死模型的梗死面積,而且CDCexo會(huì)減少梗死組織內(nèi)CD68+巨噬細(xì)胞數(shù)量,并改變巨噬細(xì)胞的極化狀態(tài)。自體CD34+干細(xì)胞的移植可以改善缺血組織再灌注后的功能,并降低嚴(yán)重肢體缺血患者的截肢率。其作用機(jī)制在于:CD34+干細(xì)胞分泌的外泌體促進(jìn)小鼠下肢缺血模型血管生成。雖然臨床前研究的證據(jù)表明干細(xì)胞釋放的外泌體可以作為心肌修復(fù)的潛在無細(xì)胞治理劑,但是,目前將外泌體完全用作心臟修復(fù)治理劑之前還是有很多重點(diǎn)問題需要解決。外泌體具有檢測包括病癥在內(nèi)的許多病理狀況的潛力,可用于對(duì)心血管疾病和病癥等多種疾病的診斷和監(jiān)測。血清外泌體miRNA測序
已經(jīng)有許多關(guān)于外泌體作用的報(bào)導(dǎo),根據(jù)這些現(xiàn)象實(shí)驗(yàn)中,從體液和培養(yǎng)上清中高純度提取的高純度外泌體,在活內(nèi)是否真的能發(fā)生作用尚未能確定。確認(rèn)外泌體生理作用的單獨(dú)方法就是明確外泌體的釋放機(jī)制,通過促進(jìn)或壓制釋放機(jī)制,分析會(huì)引起何種生理作用,這是進(jìn)一步研究的發(fā)展方向。甚至活內(nèi)的外泌體動(dòng)態(tài)(哪個(gè)外泌體遷移至何處)也會(huì)成為今后需要努力研究的重要課題。實(shí)際上,用PS親和法提取的人白血病細(xì)胞釋放的外泌體,其純度與超離心法和PEG沉淀法提取外泌體做比較,PS親和法提取的外泌體,其蛋白特異性檢測可高出10~100倍以上,幾乎沒有混入外泌體以外的蛋白,回收量高,操作重復(fù)性好。組織提取試劑盒步驟外泌體作為核酸分子的藥物載體主要用于基因治理。
除運(yùn)輸藥物進(jìn)行疾病zhiliao之外,外泌體還能進(jìn)行免疫zhiliao,外泌體免疫zhiliao和載藥zhiliao。進(jìn)行免疫調(diào)節(jié)時(shí),外泌體通常運(yùn)載TGF-β1、粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)或MAGE抗原等物質(zhì)。在這些研究中,分泌外泌體的母代細(xì)胞往往選用具有很好抗原遞呈(antigenpresentation)能力的樹突細(xì)胞或者中流細(xì)胞。Cao等采用鼠B淋巴瘤細(xì)胞作為母代細(xì)胞,通過熱處理的方式使淋巴瘤細(xì)胞分泌的外泌體含有更多的熱休克蛋白(HSP60和HSP90)和其他一些刺激免疫的分子,如主要組織相容性復(fù)合物(MHC-I和MHC[1]II)以及CD40、CD86等,與未熱處理的鼠B淋巴瘤細(xì)胞分泌的外泌體相比,熱處理后分泌的外泌體可以增強(qiáng)對(duì)T細(xì)胞的激huo能力,從而增強(qiáng)這種基于外泌體的疫苗的抗中流能力。
各種細(xì)胞粘著分子在外泌體膜表面表達(dá),由其決定外泌體被運(yùn)輸往哪一種細(xì)胞,期望開發(fā)利用該特征的新型DDS。外泌體在體液中十分穩(wěn)定,同時(shí)外囊泡所含的蛋白質(zhì)和RNA被外泌體的脂質(zhì)雙層膜所包被也不會(huì)分解。另外在從體液中提取外泌體后,體液可長期穩(wěn)定保存,因此外泌體有望成為臨床檢測的新型疾病生物標(biāo)記。外泌體與各種疾病的相關(guān)性被檢測出,特別是血液中釋放的病細(xì)胞來源的外泌體,其與正常細(xì)胞來源外泌體在結(jié)構(gòu)分子上的差異倍受矚目,并作為癥狀早期診斷技術(shù),應(yīng)用于與癥狀進(jìn)展相關(guān)的研究。甚至人們期望將尿液中的外泌體作為腎臟、前列腺疾病、膀胱疾病的新型診斷標(biāo)記,髓液中的外泌體作為腦內(nèi)種瘤和神經(jīng)退行性疾病的新型標(biāo)記物。外泌體無法分析外泌體具有的生理功能,也是兩種提取方法的問題所在。
外泌體研究可以指導(dǎo)診治肝損傷、酒精或非酒精性脂肪肝等其他肝臟疾病。藥物誘導(dǎo)肝損傷(DILI)大鼠模型中,尿外泌體中的蛋白含量減少,包括CD26、CD81和其他潛在的標(biāo)志物蛋白。而另一項(xiàng)研究則發(fā)現(xiàn)DILI大鼠血清中分離到的外泌體含有更高水平的蛋白,如HSP70、HSP90等。MSCs來源的外泌體可以誘導(dǎo)肝細(xì)胞增殖相關(guān)基因表達(dá),減弱CCL4誘導(dǎo)的肝損傷。而酒精刺激會(huì)促進(jìn)外泌體的分泌,miRNAs水平也會(huì)升高,并促進(jìn)細(xì)胞因子的分泌,喚醒單核細(xì)胞的分化。盡管已取得上述成果,我們對(duì)外泌體的研究尚不夠深入,外泌體在肝臟生理和病理中的重要作用及其臨床應(yīng)用仍有待繼續(xù)探索。所有培養(yǎng)的細(xì)胞類型均可分泌外泌體。體液外泌體提取試劑盒產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)
細(xì)胞外囊泡(EVs)表示了細(xì)胞間通訊的一個(gè)重要模式。血清外泌體miRNA測序
建立記錄各論文實(shí)驗(yàn)條件的數(shù)據(jù)庫也可作為規(guī)避混亂的方法之一。一方面,隨著EV研究倍受世界矚目,各國啟動(dòng)了大型研究項(xiàng)目。美國啟動(dòng)NIH戰(zhàn)略性大型項(xiàng)目(ExtracellularRNACommunication),國際厲害性學(xué)會(huì)——Gordon和KeystoneSymposia也從2016開始成立會(huì)議小組。受到歐洲藥物研究開發(fā)公司“創(chuàng)新藥物倡議組織(IMI)”的支持推進(jìn)的CANCER-ID項(xiàng)目,也包含EV研究在內(nèi)。2017年日本選定了EV研究為文部科學(xué)省研究開發(fā)戰(zhàn)略的目標(biāo)之一,期待會(huì)加速今后的研究發(fā)展。無論如何,今后EV研究的根本就是必須有強(qiáng)有力的研究方法和技術(shù),而PS親和法有望成為其中之一。血清外泌體miRNA測序