目前市面上開發(fā)的外泌體提取試劑盒,是根據(jù)外泌體表面由類似于細(xì)胞膜的脂質(zhì)雙分子層具有一定疏水性這一特性,用試劑捆綁水分子,從而可通過常規(guī)離心收集沉淀獲取外泌體。這種快速提取外泌體的方法雖簡便快捷、樣本需求少、對設(shè)備要求低,但與差速離心方法類似,其分離得到的沉淀包含其他細(xì)胞分泌的囊泡,且血清中含有大量血清蛋白分子,成分復(fù)雜,很可能摻雜一些未知的疏水大分子物質(zhì)。Sabapatha等曾根據(jù)來源于胎盤的外泌體表面特異表達(dá)這一特性,使用耦合到磁珠的抗抗體,采用磁珠分選方法分離血漿中胎盤來源外泌體。此法可以提取的胎盤外泌體量少,不適用于大規(guī)模提取制備,且免疫磁珠價格昂貴,不利于提取技術(shù)的普及。外泌體觀察到它們可以在體內(nèi)刺激免疫應(yīng)答。浙江外泌體質(zhì)譜
外泌體作為細(xì)胞外囊泡的一個亞群,直徑集中于30~150nm。目前,基于粒徑大小分離外泌體的方法有超濾法、尺寸排除色譜法、靜水過濾透析法和非對稱場流分離法等。超濾法利用不同孔徑的濾膜,對樣品進(jìn)行選擇性分離以獲得外泌體,一般分為壓力超濾和離心超濾。其中離心超濾效果更好,不jin能減輕力對外泌體的破壞,而且可通過增大離心力和延長離心時間提高外泌體產(chǎn)物濃度。但離心力過大或離心時間過長均有可能導(dǎo)致超濾膜或外泌體破裂。此外,超濾法可以和切向流過濾法、微控流法、超速離心法或凝膠過濾色譜法等方法結(jié)合進(jìn)一步提高分離效率。浙江外泌體質(zhì)譜目前,提取外泌體的方法主要有超速離心法、PEG沉淀法。
建立記錄各論文實驗條件的數(shù)據(jù)庫也可作為規(guī)避混亂的方法之一。一方面,隨著EV研究倍受世界矚目,各國啟動了大型研究項目。美國啟動NIH戰(zhàn)略性大型項目(ExtracellularRNACommunication),國際厲害性學(xué)會——Gordon和KeystoneSymposia也從2016開始成立會議小組。受到歐洲藥物研究開發(fā)公司“創(chuàng)新藥物倡議組織(IMI)”的支持推進(jìn)的CANCER-ID項目,也包含EV研究在內(nèi)。2017年日本選定了EV研究為文部科學(xué)省研究開發(fā)戰(zhàn)略的目標(biāo)之一,期待會加速今后的研究發(fā)展。無論如何,今后EV研究的根本就是必須有強有力的研究方法和技術(shù),而PS親和法有望成為其中之一。
微流控芯片是一種可兼容多種外泌體分離方法的新興檢測平臺,這些方法包括免疫親和分離、膜過濾、納米線捕獲、聲納米過濾和確定性側(cè)向位移分選等。微流控裝置是由幾十到幾百微米的不同直徑微通道網(wǎng)絡(luò)組成的緊湊單元,能夠處理皮升到微升范圍內(nèi)的黏性介質(zhì)樣品;且根據(jù)特定的功能,微通道可以相互連接,使用額外的特定裝置來微調(diào)流體運動。微流控技術(shù)能夠以極高的準(zhǔn)確性和特異性在微尺度上重現(xiàn)眾多實驗室過程,取代昂貴的設(shè)備,基于微流控技術(shù)的電化學(xué)外泌體檢測芯片已經(jīng)受到廣fan關(guān)注。確認(rèn)外泌體生理作用的單獨方法就是明確外泌體的釋放機(jī)制,通過促進(jìn)或壓制釋放機(jī)制。
外泌體是新型治理劑,瘤轉(zhuǎn)移是一個包括病細(xì)胞侵入、血管中存活和殖民化等多步驟的復(fù)雜過程。外泌體能夠影響這個級聯(lián)反應(yīng)的每一步,因此可作為瘤治理的靶點。瘤細(xì)胞在轉(zhuǎn)移到其他組織時需要在間質(zhì)細(xì)胞間移動并到達(dá)血管中,在這個過程中,瘤細(xì)胞外泌體通過纖維連接蛋白促進(jìn)瘤細(xì)胞的運動性,再通過蛋白酶促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)的分解、血管生成,進(jìn)而促進(jìn)瘤轉(zhuǎn)移。多數(shù)瘤細(xì)胞對轉(zhuǎn)移的組織具有指向性,而外泌體表面的整合素就是決定其指向性的因子,如外泌體αvβ5整合素決定了對肝臟的指向性,而外泌體α6β4?α6β1整合素決定了對肺部的指向性。外泌體又存在檢測時需使用大量外泌體和難以檢測到低表達(dá)水平的標(biāo)記蛋白。細(xì)胞提取試劑盒價錢
外泌體在體液中十分穩(wěn)定,同時外囊泡所含的蛋白質(zhì)和RNA被外泌體的脂質(zhì)雙層膜所包被也不會分解。浙江外泌體質(zhì)譜
外泌體是新型治理劑,惡性瘤細(xì)胞往往能夠通過分泌大量外泌體抑制宿主固有免疫。對外泌體的質(zhì)譜研究發(fā)現(xiàn),惡性瘤細(xì)胞的外泌體含有大量活化型的表皮生長因子受體(epidermalgrowthfactorreceptor,EGFR),可以抑制宿主細(xì)胞α型干擾素(IFN-α)的產(chǎn)生。這就解釋了為什么部分瘤患者固有免疫低下,也為晚期病癥患者的治理提供一個新的策略和理論依據(jù)。除了瘤,外泌體在其他疾病如心血管疾病等的診斷和治理的相關(guān)臨床試驗也在世界范圍內(nèi)開展中。浙江外泌體質(zhì)譜