所有培養(yǎng)的細(xì)胞類型均可分泌外泌體，且外泌體天然存在于體液中，包括血液、唾液、尿液、腦脊液和乳汁中。有關(guān)他們分泌和攝取及其組成、“運(yùn)載物”和相應(yīng)功能的精確分子機(jī)制剛剛開始研究。外泌體被視為特異性分泌的膜泡，參與細(xì)胞間通訊，對(duì)外泌體的研究興趣日益增長(zhǎng)，無(wú)論是研究其功能還是了解如何將其用于微創(chuàng)診斷的開發(fā)。外泌體富含膽固醇和鞘磷脂。研究發(fā)現(xiàn)鼠的肥大細(xì)胞分泌的exosome可以被人的肥大細(xì)胞捕獲，并且其攜帶的mRNA成分可以進(jìn)入細(xì)胞漿中可以被翻譯成蛋白質(zhì)，不只是mRNA，exosomes所轉(zhuǎn)移的microRNA同樣具有生物活性，在進(jìn)入靶細(xì)胞后可以靶向調(diào)節(jié)細(xì)胞中mRNA的水平。外泌體由于包含的內(nèi)容物具有明顯的組織特異性，為其能成為瘤早期診斷的生物標(biāo)志物提供了重要保障。外泌體抽提方法

外泌體介導(dǎo)中流耐藥性:中流細(xì)胞來源的外泌體中某些miRNAs和non-codingRNAs(lncRNA)的變化在中流化療抗藥性的發(fā)生中起重要作用。Qu等研究發(fā)現(xiàn)lncRNA可以通過競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合miR-34/miR-449，促進(jìn)晚期腎細(xì)胞ai細(xì)胞中的跨膜受體酪氨酸激酶anexelekto(AXL)和tyrosine[1]proteinkinaseMet(c-MET)表達(dá)，引發(fā)舒尼替尼耐藥。而外泌體能夠?qū)⑦@一lncRNA運(yùn)輸至舒尼替尼敏感的ai細(xì)胞，從而傳播舒尼替尼的抗性。外泌體中的miR21能夠抑制卵巢ai細(xì)胞凋亡，并通過結(jié)合肌動(dòng)蛋白絲相關(guān)蛋白凋亡酶激huo因子(apoptoticproteaseactivatingfactor1，APAF1)使得卵巢ai細(xì)胞產(chǎn)生對(duì)紫杉醇的抗藥性。唾液外泌體熒光標(biāo)記外泌體在體液中十分穩(wěn)定，同時(shí)外囊泡所含的蛋白質(zhì)和RNA被外泌體的脂質(zhì)雙層膜所包被也不會(huì)分解。

Exosome（外泌體）是由活細(xì)胞分泌小囊泡，具有典型的脂質(zhì)雙分子層結(jié)構(gòu)；參與細(xì)胞之間的交流，物質(zhì)的運(yùn)輸以及正常生理過程的維持，此外還與疾病的產(chǎn)生有關(guān)。對(duì)分離的外泌體進(jìn)行體外標(biāo)記或示蹤，有助于對(duì)外泌體的功能進(jìn)行進(jìn)一步的研究。目前對(duì)于外泌體的標(biāo)記方法有很多種，包括親脂性的染料和膜滲透型的化合物等。PKH67的體內(nèi)熒光半衰期為10-12天。相比于PKH-67，PKH-26具有更長(zhǎng)的半衰期，標(biāo)記在兔紅細(xì)胞上的PKH26半衰期長(zhǎng)達(dá)100天以上。特別適用于體外增殖研究以及長(zhǎng)期的體內(nèi)細(xì)胞跟蹤研究。

外泌體可以調(diào)控星狀細(xì)胞（HSC）活化，并參與HSC細(xì)胞遷移的進(jìn)程?；罨腍SC來源的外泌體中，CCN2表達(dá)升高，Twist1和miR-214表達(dá)被抑制，這些外泌體還能誘導(dǎo)靜止的HSC細(xì)胞表達(dá)CCN2。此外，Twist1可以誘導(dǎo)miR-214表達(dá)從而抑制CCN2的表達(dá)。CCL4處理的外泌體和外泌體SK1/S1P會(huì)誘導(dǎo)HSC遷移。MSC分泌的外泌體可以有效減緩肝纖維化過程，這可能成為肝纖維化治理的靶點(diǎn)。研究顯示，CP-MSC來源的外泌體miR-125b可以抑制Hedgehog信號(hào)通路的活化，抑制纖維化；而HUC-MSC分泌的外泌體可以逆轉(zhuǎn)細(xì)胞形態(tài)和TGF-β1誘導(dǎo)的EMT進(jìn)程，減弱肝纖維化。高濃度集聚誘導(dǎo)細(xì)胞死亡的TNF-α，可使類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎惡化。

流式細(xì)胞技術(shù)針對(duì)外泌體的表面抗原標(biāo)記物進(jìn)行檢測(cè)，能夠?qū)崿F(xiàn)外泌體的高通量、多通道分析。但是由于外泌體的粒徑小、折射率低，所以采用常規(guī)的流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè)時(shí)往往需要將外泌體與beads連接以增大表面積、增強(qiáng)反射，操作耗時(shí)又費(fèi)力。Tian等搭建了一種高靈敏度的流式細(xì)胞儀(HSFCM)，將可檢測(cè)的外泌體粒徑降至40nm，能夠在不連接beads的情況下實(shí)現(xiàn)每分鐘10000個(gè)外泌體的檢測(cè)，并且能夠結(jié)合免疫熒光的方法進(jìn)行外泌體標(biāo)志蛋白質(zhì)的定量檢測(cè)，目前該儀器已商品化。隨著外泌體的功能逐漸被發(fā)現(xiàn)，近年來，應(yīng)用這些功能的醫(yī)治法也在被開發(fā)出來。北京外泌體circRNA測(cè)序

外泌體介導(dǎo)的細(xì)胞間交流可以改變瘤的生長(zhǎng)、細(xì)胞遷移、抗病毒等生理過程。外泌體抽提方法

研究者利用電穿孔法對(duì)外泌體進(jìn)行DOX的負(fù)載，進(jìn)行體內(nèi)抗中流效果的研究。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，負(fù)載DOX的iRGD肽靶向性外泌體對(duì)中流的抑制效果遠(yuǎn)優(yōu)于單純的DOX。直接靜脈注射DOX，其不僅水溶性低，而且容易使DOX與血液中的蛋白結(jié)合，從而被網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)識(shí)別捕獲，起不到理想的抗中流效果。而用iRGD肽靶向性的外泌體保護(hù)DOX，可以提高DOX水溶性，避免被網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)捕捉，提高靶向性，從而降低由于用藥過量和非靶向性引起的毒性，起到更好的抗中流效果。外泌體抽提方法