外泌體本身的惰性相當(dāng)高,但它們與細(xì)胞膜融合可將所攜帶的物質(zhì)和信號(hào)傳遞到受體細(xì)胞并改變其生物學(xué)功能,因此,外泌體是納米藥物遞送或基因治理的潛在載體。外泌體作為功能性小RNA和蛋白質(zhì)的天然載體也引起了藥物遞送領(lǐng)域的極大興趣,因?yàn)樗梢岳眠@些囊泡治理性遞送各種核糖核酸分子、肽和合成藥物。外泌體作為疾病診斷標(biāo)志物的潛在應(yīng)用依賴于基于外泌體的藥物遞送系統(tǒng)的技術(shù)突破,要將其用于臨床治理,外泌體的大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)還面臨很大的挑戰(zhàn)。首先,對(duì)外泌體的具體合成機(jī)制、功能了解并不是非常詳細(xì)。其次,現(xiàn)在缺乏經(jīng)濟(jì)有效的外泌體分離技術(shù)。有報(bào)導(dǎo)指出,外泌體內(nèi)miRNA參與促進(jìn)血管新生、抗癥性和促進(jìn)膠原蛋白沉淀等一系列過程。體液外泌體提取試劑盒方法
獲得囊泡粒徑分布的兩種方法動(dòng)態(tài)光散射(DLS)和納米顆粒跟蹤分析(NTA)都被廣fan應(yīng)用于外泌體顆粒數(shù)目和粒徑分布的測(cè)量,但兩種方法也各有不足。動(dòng)態(tài)光散射法中散射光強(qiáng)度依賴于顆粒質(zhì)量(體積),混合體系中大囊泡的存在(即使只有很少的量)將嚴(yán)重影響測(cè)量結(jié)果,因此動(dòng)態(tài)光散射法更適用于單分散體系。而且動(dòng)態(tài)光散射法所得的結(jié)果強(qiáng)烈依賴于所應(yīng)用的數(shù)學(xué)算法。而采用納米顆粒跟蹤分析儀對(duì)不同粒徑范圍的囊泡進(jìn)行檢測(cè)時(shí),為了得到準(zhǔn)確的濃度和粒徑信息,需要根據(jù)所要測(cè)量的顆粒粒徑范圍對(duì)儀器分別校準(zhǔn),操作繁瑣。受檢測(cè)靈敏度所限,納米顆粒跟蹤分析儀適用于粒徑范圍50nm~1μm的顆粒,粒徑小于50nm的外泌體無法檢測(cè)。除此之外,兩種方法都依賴光散射和粒子的布朗運(yùn)動(dòng)進(jìn)行分析,難以區(qū)分合成的納米材料、大蛋白質(zhì)聚合體和生物囊泡。外周血外泌體提取試劑盒步驟外泌體中含有豐富的蛋白質(zhì)和遺傳物質(zhì)DNA以及RNA等。
外泌體中存在著某些特定的蛋白質(zhì)、脂質(zhì)和多糖,基于抗原–抗體特異性識(shí)別和結(jié)合作用原理,可將外泌體從其他組分中分離出來。四次跨膜蛋白家族、脂膜、膜聯(lián)蛋白、上皮細(xì)胞黏附分子或肝素等都可以作為抗原,而捕獲外泌體的抗體可以附著在平板、磁珠、二氧化硅、樹脂、膜親和過濾器、纖維素濾膜、聚酰氨基胺樹狀聚合物表面和微流控器件上。常用方法有酶聯(lián)免疫吸附法和磁珠法等。酶聯(lián)免疫吸附法使用聚苯乙烯微孔板作為抗體附著介質(zhì),其結(jié)果用吸光度值表示,該方法可以快速分析已知表面生物標(biāo)志物的表達(dá),也可以瞬時(shí)讀出外泌體的產(chǎn)量和特異性。磁珠法多使用共價(jià)包覆鏈霉親和素的磁珠,與樣品一起孵育后可通過磁泳將被結(jié)合的外泌體從樣品組分中分離出來。鑒于微米級(jí)磁珠可賦予更大的接觸面積,該方法不jin具有高度特異性,還具有比超速離心更高的外泌體產(chǎn)率。
外泌體攜帶的與疾病進(jìn)展緊密關(guān)聯(lián)的分子標(biāo)志物可用于疾病進(jìn)展的監(jiān)視、檢測(cè)和診斷,是一種潛在的非侵入性生物標(biāo)志物。由于外泌體本身可以作為抗原提呈小泡,且有較長的循環(huán)半衰期,可用于免疫學(xué)相關(guān)研究,同時(shí),源自ai細(xì)胞的外泌體可以被工程化,發(fā)揮免疫刺激作用,可作為中流疫苗應(yīng)用于ai癥的免疫zhiliao。此外,外泌體穩(wěn)定而廣fan地分布在qi官和組織中,具有低免疫原性、高耐受性等特點(diǎn),且良好的膜滲透性可使其通過血腦屏障,因此可用作組織和qi官特異藥物輸送系統(tǒng),兼有高輸送效率和低副作用。因此,外泌體適合用作藥物載體遞送zhiliao劑(如阿霉素或姜黃素),zhiliao性miRNA、siRNA等核酸和蛋白質(zhì),運(yùn)送至靶位點(diǎn)后實(shí)現(xiàn)靶向zhiliao。外泌體分析會(huì)引起何種生理作用,這是進(jìn)一步研究的發(fā)展方向。
與正常細(xì)胞相比,中流細(xì)胞外泌體的分泌量增多,內(nèi)容物也存在明顯差異。由于囊泡結(jié)構(gòu)的保護(hù),中流細(xì)胞來源的外泌體內(nèi)攜帶有大量中流細(xì)胞來源的活性生物分子,其特點(diǎn)包括:(1)提供具有穩(wěn)定構(gòu)象的蛋白質(zhì)分子;(2)保持蛋白質(zhì)的生物活性;(3)攜帶其中的生物分子經(jīng)體液運(yùn)輸至遠(yuǎn)端qi官;(4)膜融合的作用方式使得中流細(xì)胞來源的外泌體能夠與靶細(xì)胞之間進(jìn)行更有效的信息交流。外泌體介導(dǎo)中流轉(zhuǎn)移:體外研究和體內(nèi)成像實(shí)驗(yàn)表明惡性中流細(xì)胞產(chǎn)生的外泌體可以在全身水平上被同一中流或遠(yuǎn)端中流中惡性程度較低的ai細(xì)胞攝入,其內(nèi)所包含的與轉(zhuǎn)移相關(guān)的mRNAs進(jìn)入轉(zhuǎn)移性較低的細(xì)胞后,能夠增強(qiáng)其轉(zhuǎn)移能力。外泌體其純度與超離心法和PEG沉淀法提取外泌體做比較。血液外泌體lncRNA測(cè)序
外泌體的檢測(cè)和提取還遇到一個(gè)困難即:對(duì)各種外泌體的分類。體液外泌體提取試劑盒方法
有研究表明外泌體通過喚醒瘤相關(guān)信號(hào)通路、誘導(dǎo)免疫耐受、重塑細(xì)胞外基質(zhì)、增強(qiáng)瘤細(xì)胞侵襲性和調(diào)控瘤微環(huán)境促進(jìn)瘤的發(fā)生和發(fā)展,外泌體在瘤的診斷上有諸多優(yōu)勢(shì):外泌體可保護(hù)其中的核酸類物質(zhì),防止其迅速降解;外泌體的形成與親源細(xì)胞的狀態(tài)密切相關(guān);針對(duì)外泌體內(nèi)容物的檢測(cè)比傳統(tǒng)的瘤標(biāo)志物更具有特異性;外泌體寬泛存在于多種體液樣本中,以其為基礎(chǔ)的瘤診斷可在病情發(fā)展過程中及時(shí)監(jiān)測(cè)分子標(biāo)志物的變化,這種檢測(cè)更易監(jiān)控且樣本更易收集。體液外泌體提取試劑盒方法