外泌體的提取方法:免疫磁珠法,這種方法可以保證外泌體形態(tài)的完整,特異性高、操作簡(jiǎn)單、不需要昂貴的儀器設(shè)備,但是非中性pH和非生理性鹽濃度會(huì)影響外泌體生物活性,不便進(jìn)行下一步的實(shí)驗(yàn)。PS親和法,該方法將PS(磷脂酰絲氨酸)與磁珠結(jié)合,利用親和原理捕獲外泌體囊泡外的PS。該方法與免疫磁珠法相似,獲得的外泌體形態(tài)完整,純度較高。由于不使用變性劑,不影響外泌體的生物活性,外泌體可用于細(xì)胞共培養(yǎng)和體內(nèi)注射。PS法可提取相當(dāng)高純度的外泌體。色譜法,這種方法分離到的外泌體在電鏡下大小均一,但是需要特殊的設(shè)備,應(yīng)用不寬泛。外泌體有望成為臨床檢測(cè)的新型疾病生物標(biāo)記。上海外泌體Dil
外泌體可以由體內(nèi)或體外培養(yǎng)的幾乎所有類型的細(xì)胞分泌,并廣fan存在于血漿、膽汁、尿液、母乳、唾液、胸腔積液、淋巴、胃酸、支氣管肺泡灌洗液、腦脊液、眼淚、滑膜液、羊水、腹水、鼻分泌物和子宮抽吸物液體等體液中。目前,基于不同的分離原理,研究者建立了五種主要的提取純化技術(shù),分別為基于質(zhì)量密度的超速離心技術(shù)、基于粒徑大小的分離技術(shù)、基于溶解性質(zhì)的聚合物沉淀技術(shù)、基于免疫親和原理的分離技術(shù)和基于流體性質(zhì)的微流控技術(shù)。超速離心提取外泌體的過程外泌體分析會(huì)引起何種生理作用,這是進(jìn)一步研究的發(fā)展方向。
在過去十年中,細(xì)胞外囊泡已經(jīng)成為細(xì)胞間通訊的重要介質(zhì),參與原核生物和高等真核生物細(xì)胞之間的生物信號(hào)傳遞,以調(diào)節(jié)不同范圍的生物過程。此外,細(xì)胞外囊泡的病理生理作用開始在包括癥狀、傳播性疾病和神經(jīng)變性疾病在內(nèi)的疾病中得到認(rèn)識(shí),突出了醫(yī)治干預(yù)的潛在新靶點(diǎn)。此外,未修飾和工程化的細(xì)胞外囊泡可能在大分子藥物遞送中具有應(yīng)用。該綜述回顧近在理解細(xì)胞外膜泡生物學(xué)和細(xì)胞外囊泡在疾病中的作用方面的進(jìn)展,討論新出現(xiàn)的醫(yī)治機(jī)會(huì)并考慮相關(guān)的挑戰(zhàn)。
目前為止已鑒別了2500余種miRNAs分子。例如,血液外泌體miR-21的升高已被證實(shí)與胰腺ai、結(jié)直腸ai、肝ai、乳腺ai、卵巢ai及食管ai等多種中流相關(guān),可能與其參與中流xue管生成有關(guān),研究表明肺ai細(xì)胞釋放的外泌體miR-21會(huì)通過STAT3依賴機(jī)制誘導(dǎo)周圍支氣管細(xì)胞血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)的產(chǎn)生,從而促進(jìn)血管生成。在食管ai中,miR-21還可以反映中流的惡性程度,食管ai患者的miR-21水平與良性中流患者相比急劇上升,上升的miR-21水平也與中流的淋巴侵襲和轉(zhuǎn)移相關(guān)。在膀胱ai患者中,尿液中的miR-21和miR-4454會(huì)明顯上調(diào)。外泌體及活性蛋白能直接穿透皮膚間隙,快速直達(dá)基底層起效。
各種細(xì)胞粘著分子在外泌體膜表面表達(dá),由其決定外泌體被運(yùn)輸往哪一種細(xì)胞,期望開發(fā)利用該特征的新型DDS。外泌體在體液中十分穩(wěn)定,同時(shí)外囊泡所含的蛋白質(zhì)和RNA被外泌體的脂質(zhì)雙層膜所包被也不會(huì)分解。另外在從體液中提取外泌體后,體液可長(zhǎng)期穩(wěn)定保存,因此外泌體有望成為臨床檢測(cè)的新型疾病生物標(biāo)記。外泌體與各種疾病的相關(guān)性被檢測(cè)出,特別是血液中釋放的病細(xì)胞來源的外泌體,其與正常細(xì)胞來源外泌體在結(jié)構(gòu)分子上的差異倍受矚目,并作為癥狀早期診斷技術(shù),應(yīng)用于與癥狀進(jìn)展相關(guān)的研究。甚至人們期望將尿液中的外泌體作為腎臟、前列腺疾病、膀胱疾病的新型診斷標(biāo)記,髓液中的外泌體作為腦內(nèi)種瘤和神經(jīng)退行性疾病的新型標(biāo)記物。外泌體的異質(zhì)性可以根據(jù)其大小、含量(載物)、對(duì)受體細(xì)胞的功能影響以及細(xì)胞來源來區(qū)分。組織外泌體提取試劑盒公司
外泌體作為細(xì)胞間信號(hào)傳導(dǎo)的通訊工具和作為病等各種疾病的生物標(biāo)記話題比較熱門。上海外泌體Dil
流式細(xì)胞技術(shù)針對(duì)外泌體的表面抗原標(biāo)記物進(jìn)行檢測(cè),能夠?qū)崿F(xiàn)外泌體的高通量、多通道分析。但是由于外泌體的粒徑小、折射率低,所以采用常規(guī)的流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè)時(shí)往往需要將外泌體與beads連接以增大表面積、增強(qiáng)反射,操作耗時(shí)又費(fèi)力。Tian等搭建了一種高靈敏度的流式細(xì)胞儀(HSFCM),將可檢測(cè)的外泌體粒徑降至40nm,能夠在不連接beads的情況下實(shí)現(xiàn)每分鐘10000個(gè)外泌體的檢測(cè),并且能夠結(jié)合免疫熒光的方法進(jìn)行外泌體標(biāo)志蛋白質(zhì)的定量檢測(cè),目前該儀器已商品化。上海外泌體Dil
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