外泌體(Exosome),是細(xì)胞外囊泡(EV)的一種主要類型,是直徑為30至150nm的納米大小的膜結(jié)構(gòu),大多數(shù)細(xì)胞都會(huì)分泌外泌體。外泌體存在于各種生物體液中,通過(guò)其攜帶的蛋白質(zhì)、核酸、脂質(zhì)和代謝物等來(lái)發(fā)揮細(xì)胞間通訊功能,參與免疫應(yīng)答、代謝和心血管疾病、神經(jīng)退行性疾病以及病癥進(jìn)展等多種生理和病理過(guò)程。在內(nèi)體轉(zhuǎn)變?yōu)槌墒於嗄遗輧?nèi)體(MVE)的過(guò)程中,內(nèi)體膜向腔內(nèi)出芽形成腔內(nèi)囊泡(ILV),MVE與細(xì)胞膜融合釋放ILV到細(xì)胞外,即形成外泌體。干細(xì)胞外泌體可以有效活化提高細(xì)胞能量加速細(xì)胞排毒、淡化色斑。組織外泌體lncRNA測(cè)序
通過(guò)改變外泌體的溶解性或者分散性,可以將它們從體液或細(xì)胞培養(yǎng)液中沉淀出來(lái)。常見(jiàn)的方法是使用聚乙二醇或凝集素來(lái)沉淀樣品中的外泌體。聚乙二醇是一種水溶性非離子化合物,不含水的聚乙二醇可以通過(guò)“劫持”水分子增加疏水性蛋白和脂質(zhì)分子的相互結(jié)合力,從而迫使其脫離溶液,進(jìn)而在低速離心條件下發(fā)生沉降。凝集素是一種具有高度特異性的碳水化合物結(jié)合蛋白,可通過(guò)與外泌體質(zhì)膜糖蛋白上的糖鏈結(jié)合來(lái)改變外泌體的溶解性。此外,還可使用魚(yú)精蛋白、醋酸鈉、有機(jī)溶劑沉淀等方法進(jìn)行沉淀分離。杭州外泌體NTA外泌體被工程化改造后,具有靶向特定細(xì)胞類型或組織的功能。
外泌體及活性蛋白能直接穿透皮膚間隙,快速直達(dá)基底層起效;富含100+多種胞外基質(zhì)蛋白、胞外基質(zhì)酶以及細(xì)胞黏附分子;能夠有效促進(jìn)皮膚成纖維細(xì)胞(HDFs)中I型膠原蛋白、成纖維蛋白,促進(jìn)皮膚有效快速再生(Rejuvenation);能夠有效促進(jìn)皮膚成纖維細(xì)胞(HDFs)彈性蛋白生成,保持皮膚飽滿和彈性;有效降低皮膚成纖維細(xì)胞(HDFs)中膠原蛋白酶(MMP-1)的生成從而防止皮膚間質(zhì)中IIIIII型膠原蛋白被降解;富含活性物質(zhì)能夠促進(jìn)皮膚有些血管的修復(fù)與重建再生。
在多細(xì)胞生物體內(nèi),遠(yuǎn)處的細(xì)胞可以通過(guò)傳遞單個(gè)分子或細(xì)胞外囊泡(EVs,包括exosomes和microvesicles等)交換信息。該綜述介紹了一些EVs引人注目的功能,以及我們目前對(duì)其生理作用認(rèn)識(shí)的局限。盡管有初步研究表明,EVs在體內(nèi)具有一些生理功能,但EVs的本質(zhì)特性仍有待進(jìn)一步澄清。這篇綜述主要關(guān)注種瘤細(xì)胞和微環(huán)境,但類似的結(jié)果和挑戰(zhàn)也適用于EVs介導(dǎo)的其他的病理/生理過(guò)程。功能神經(jīng)的能力和完整性需要感覺(jué)運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元、神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞之間的交互式信息交流。外泌體中含有核酸,包括miRNA、DNA、lncRNA、mRNA。
密度梯度離心是基于差速超高速離心的改良技術(shù)。該方法需預(yù)先利用常用的梯度液介質(zhì)如蔗糖、碘克沙醇和氯化銫等,在離心管中構(gòu)筑從底部到頂部密度逐漸降低的密度梯度帶。根據(jù)密度梯度構(gòu)建和沉降方式的不同,又可以分為速率區(qū)帶離心法和等密度梯度離心法,前者主要根據(jù)顆粒的沉降速率分離,介質(zhì)密度均小于外泌體密度,離心時(shí)樣品在向超速離心管底部移動(dòng)時(shí),會(huì)通過(guò)密度不斷增加的密度梯度區(qū)帶,密度大的顆粒更容易穿過(guò)密度更高的梯度層,更快地到達(dá)管底,因此控制離心的時(shí)間很重要;等密度梯度離心法中的密度梯度區(qū)帶,則會(huì)根據(jù)樣品液中各種溶質(zhì)成分來(lái)進(jìn)行組合,離心過(guò)程中,無(wú)論離心時(shí)間多久,不同密度顆粒jin會(huì)富集到具有相同密度的梯度區(qū)帶,而不會(huì)沉淀到底部。外泌體中常見(jiàn)的細(xì)胞質(zhì)蛋白是Rabs蛋白,是鳥(niǎo)苷酸三磷酸酶家族的一種。唾液外泌體lncRNA測(cè)序
外泌體通過(guò)內(nèi)體途徑分泌到細(xì)胞外空間,并將各種生物活性分子(貨物)轉(zhuǎn)運(yùn)至靶細(xì)胞。組織外泌體lncRNA測(cè)序
外泌體(Exosome)是由細(xì)胞分泌而來(lái)的微小囊泡,直徑約為30-200nm,形態(tài)也呈現(xiàn)出多樣性。microRNA(miRNA)是一種大小約21—23個(gè)堿基的單鏈小分子RNA,是由具有發(fā)夾結(jié)構(gòu)的約70—90個(gè)堿基大小的單鏈RNA前體經(jīng)過(guò)Dicer酶加工后生成,不同于siRNA(雙鏈)但是和siRNA密切相關(guān)。microRNA通過(guò)和靶基因mRNA堿基配對(duì)引導(dǎo)沉默復(fù)合體(RISC)降解mRNA或抑制mRNA的翻譯,從而在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控蛋白表達(dá)。microRNA在物種進(jìn)化中相當(dāng)保守,在動(dòng)物、植物等中發(fā)現(xiàn)的microRNA表達(dá)均有嚴(yán)格的組織特異性和時(shí)序性。microRNA在細(xì)胞生長(zhǎng)和發(fā)育過(guò)程中起多種作用,包括調(diào)控發(fā)育、分化、凋亡和增殖等。組織外泌體lncRNA測(cè)序
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