外泌體開始被認為是細胞排出代謝廢物的一種方式，能夠幫助缺乏高效降解能力或位于排泄系統(tǒng)的細胞排出不必要的蛋白質(zhì)和RNA。近年來，隨著人們對外泌體的深入了解，外泌體的多種生物功能先后被發(fā)現(xiàn)。如今外泌體作為一種細胞間交流、傳遞大量的生物功能分子的重要方式日益受到重視。外泌體與受體細胞的信息交流可能通過以下4種途徑實現(xiàn):(1)外泌體表面膜蛋白質(zhì)被目的細胞表面的受體識別，從而激huo靶細胞;(2)外泌體在蛋白酶作用下產(chǎn)生的表面膜蛋白質(zhì)碎片可作為目的細胞表面受體的配體;(3)外泌體脂膜可以與目的細胞膜融合，將蛋白質(zhì)和RNA等內(nèi)容物釋放進去，此類膜融合可能改變靶細胞的一些膜特性，例如脂質(zhì)和膜蛋白質(zhì)的密度及種類;(4)目的細胞通過胞吞的形式攝入外泌體。磁珠免疫法分離的外泌體，生物活性易受pH和鹽濃度影響，不利于下游實驗，難以普遍普及。安徽CD81外泌體慢病毒

目前，提取外泌體的方法主要有超速離心法、PEG沉淀法，但這些方法混有非常多的雜質(zhì)，必須慎重分析得到的是否是外泌體。超速離心法存在操作繁雜、回收量不穩(wěn)定，不能用于定量分析、必須使用昂貴的超速離心機、無法進行多樣品分析等問題。因此外泌體研究相對困難，需要盡快開發(fā)操作簡單、可提取高純度外泌體的技術(shù)。因此，日本和光著眼于巨噬細胞的外泌體受體Tim4蛋白，制備Tim4細胞外域與磁珠結(jié)合的“Tim4磁珠”。Tim4通過磷酯酰絲氨酸（PS）法特異性結(jié)合Tim4蛋白和磁珠，再經(jīng)過含有EDTA的洗脫緩沖液進行分離，提取高純度的完整外泌體。安徽CD81外泌體慢病毒外泌體的提取分離方法：PEG-base沉淀法。

通過對28例前列腺ai癥患者和19例正常人尿液外泌體中的miRNA進行深度測序分析，發(fā)現(xiàn)兩種miRNA(miR-196a-5p和miR-501-3p)在前列腺ai患者組明顯下調(diào)，表明尿液外泌體中的特異性miRNA可能作為前列腺ai的新型生物標志物。Khurana等［100］將研究對象由miRNAs擴大至多種類型RNA，通過對慢性腎病患者尿液外泌體中各類RNA進行系統(tǒng)研究，在慢性腎病患者組中識別出30種明顯差異的lncRNAs，表明尿液外泌體中的lncRNAs具有作為慢性腎病早期診斷標志物的潛力。Skotland等的研究則表明尿液外泌體中的脂質(zhì)能夠作為前列腺ai的新型標志物，3種脂質(zhì)標志物結(jié)合使用能夠有效提高對前列腺ai的診斷靈敏度(93%)和特異性(100%)。

外泌體可以調(diào)控星狀細胞（HSC）活化，并參與HSC細胞遷移的進程。活化的HSC來源的外泌體中，CCN2表達升高，Twist1和miR-214表達被抑制，這些外泌體還能誘導靜止的HSC細胞表達CCN2。此外，Twist1可以誘導miR-214表達從而抑制CCN2的表達。CCL4處理的外泌體和外泌體SK1/S1P會誘導HSC遷移。MSC分泌的外泌體可以有效減緩肝纖維化過程，這可能成為肝纖維化治理的靶點。研究顯示，CP-MSC來源的外泌體miR-125b可以抑制Hedgehog信號通路的活化，抑制纖維化；而HUC-MSC分泌的外泌體可以逆轉(zhuǎn)細胞形態(tài)和TGF-β1誘導的EMT進程，減弱肝纖維化。選擇的分離方式是利用超速離心的方式分離外泌體，并且可以選用梯度密度離心法得到純度更高的外泌體。

血清中的miR-122和miR-145非常不穩(wěn)定,將血清在4°C短期保存期間即發(fā)生降解,這可能是由外泌體的異質(zhì)性所導致的。–80°C保存被公認是保存各種生物標本如尿、牛奶、血液和支氣管肺泡灌洗液適宜的保存環(huán)境,雖然這樣保存血漿可能產(chǎn)生含有大量“污染物”的外泌體。4°C保存雖然容易導致外泌體中蛋白和核酸的損失,但卻能夠避免凍融過程造成的囊泡破壞。外泌體雖然建議保存于-80°C環(huán)境下,但在處理或運輸過程中有時很難維持這種低溫條件。CHAROENVIRIYAKUL等提出一種凍干法以保存外泌體,在冷凍過程中使用海藻糖作為保護劑,海藻糖可以提供生物保護作用,如穩(wěn)定蛋白質(zhì)、細胞膜和脂質(zhì)體;減少冷凍過程中冰的形成;防止蛋白質(zhì)以及外泌體的聚集;減少分離和保存過程中細胞外囊泡的損失等。應用Tim4的外泌體強結(jié)合能力，可用ELISA或FACS高靈敏度定性檢測、定量分析外泌體。杭州體液外泌體

外泌體的提取的方式：免疫磁珠法。安徽CD81外泌體慢病毒

雖然外泌體作為藥物載體具有生物兼容性、穩(wěn)定性和內(nèi)在靶向性等潛在優(yōu)勢，但是外泌體在藥物遞送中的應用研究才剛剛起步，尚有許多問題需解決：選擇何種細胞作為外泌體的供體：如DCs來源的外泌體可用于免疫治理，因其富含組織相容復合物（MHC）及T細胞共刺激分子，能在體內(nèi)喚醒T淋巴細胞，進而抑制瘤細胞增殖；骨髓來源的間充質(zhì)干細胞（MSCs）來源的外泌體對KRAS基因有抑制作用；γδT細胞、自然殺傷細胞（NK）、瘤細胞等均有研究報道可作為載藥級別外泌體的細胞來源。安徽CD81外泌體慢病毒

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