透射電子顯微鏡(TEM)和掃描電子顯微鏡(SEM)是用于評估外泌體形態(tài)、大小和表型的的兩種常見的電子顯微鏡。SEM和TEM均使用電子束產(chǎn)生高分辨率的亞微米顆粒放大圖像,以區(qū)分外泌體與殘留在樣品中相似大小的非外泌體顆粒,該方法還可用于檢查樣品的純度。TEM與SEM之間的區(qū)別在于檢測電子類別,在SEM中,電子與樣品中的粒子相互作用時(shí)會(huì)發(fā)生散射,捕獲并檢測散射的電子,從而生成粒子圖像。但是,在TEM中,不與粒子相互作用的電子穿過樣品,并使用熒光屏進(jìn)行檢測。電子顯微鏡下外泌體大小不一,通常呈茶托樣的圓形或橢圓形。采用電子顯微鏡檢測外泌體時(shí)對樣品的預(yù)處理和制備要求較高,外泌體的提取方法和品質(zhì)會(huì)對電鏡結(jié)果造成影響;另外樣品的準(zhǔn)備階段比較復(fù)雜,不適合進(jìn)行大量快速的測量;而且由于樣本經(jīng)過了干燥、固定以及冷凍等預(yù)處理和制備過程,對生物樣本的結(jié)構(gòu)會(huì)造成一定的破壞,從而影響觀察的效果,無法準(zhǔn)確測量外泌體濃度。外泌體可以作為藥物治理的遞送系統(tǒng)。研究所提取試劑盒服務(wù)
研究采用蔗糖密度梯度離心聯(lián)合2次PEG6000沉淀,極大地降低了外泌體的提取成本,且獲得的外泌體不僅表達(dá)外泌體公認(rèn)的標(biāo)志蛋白分子,同時(shí)也表達(dá)胎盤特異性蛋白分子,證明通過這種方法獲得的外泌體是胎盤來源外泌體。通過蔗糖密度梯度離心后得到的外泌體沉淀經(jīng)蛋白質(zhì)SDS-PAGE膠電泳,銀染后可見各蛋白分子條帶清晰可見,動(dòng)態(tài)光散射分析粒徑,結(jié)果顯示獲得的外泌體顆粒粒徑大部分分布于28-91nm之間,與文獻(xiàn)報(bào)道外泌體顆粒大小相一致。胎盤外泌體經(jīng)過PKH67熒光染料染色后,與細(xì)胞共孵育,熒光顯微鏡下觀察外泌體具備進(jìn)入細(xì)胞的活性,進(jìn)一步驗(yàn)證了我們應(yīng)用此種改良的分離方法可有效的獲得胎盤來源的外泌體。本研究通過蔗糖密度梯度離心聯(lián)合2次PEG6000沉淀成功分離得到母體血清中胎盤來源外泌體,并從蛋白標(biāo)志分子、電鏡、粒徑及分布、進(jìn)入細(xì)胞活性四方面對其進(jìn)行了鑒定,為研究妊娠期間胎盤外泌體在正常妊娠及胎盤源性并發(fā)癥中的作用奠定了基礎(chǔ)。研究所提取試劑盒服務(wù)外泌體由各種類型的脂質(zhì)和蛋白質(zhì)組成,這些脂質(zhì)和蛋白質(zhì)衍生自形成外泌體的親代細(xì)胞。
circZKSCAN1在肝ai細(xì)胞中低表達(dá)且抑制肝ai細(xì)胞的增殖,ciRS-7則被認(rèn)為是非小細(xì)胞肺ai、結(jié)腸ai和胃ai等中流的預(yù)后指標(biāo),其高表達(dá)與較高的臨床分期和較差的總體生存期相關(guān)。目前已發(fā)現(xiàn)組織、血液和外泌體中的circRNA分子表達(dá)失調(diào),而多種circRNA的聯(lián)合檢測會(huì)提高外泌體標(biāo)志物的敏感性和特異性,甚至可達(dá)到90%左右。外泌體可作為納米載體來介導(dǎo)細(xì)胞間的信息傳遞,發(fā)揮信息傳遞作用的方式主要有:在細(xì)胞間轉(zhuǎn)移受體,通過配體受體介導(dǎo)的方式作用于受體細(xì)胞,向受體細(xì)胞轉(zhuǎn)移功能蛋白,通過膜融合方式向受體細(xì)胞傳遞mRNA、miRNAs或轉(zhuǎn)錄因子等信息。這些方式為中流靶向zhiliao開辟了新的途徑。
外泌體能攜帶多種生物活性分子循環(huán)于血液/體液中并介導(dǎo)長距離的細(xì)胞間通訊,中流來源外泌體富含的蛋白質(zhì)、核苷酸、脂質(zhì)等分子能夠反映其來源細(xì)胞的生理及病理狀態(tài),外泌體特殊的脂質(zhì)雙分子層結(jié)構(gòu)能保護(hù)其內(nèi)RNA等分子免于降解,因此,檢測中流外泌體成為液體活檢一個(gè)明顯優(yōu)勢。臨床試驗(yàn)研究表明,外泌體在多種疾病的早期診斷、療效和預(yù)后監(jiān)測等方面都具備較好的應(yīng)用價(jià)值,正逐漸成為臨床診療中新的、理想的生物標(biāo)志物和可能的靶向藥物載體。隨著技術(shù)的進(jìn)步,組學(xué)時(shí)代的到來,大規(guī)模蛋白質(zhì)組學(xué)已經(jīng)被聯(lián)合應(yīng)用于篩選和揭示多種ai癥細(xì)胞外囊泡的標(biāo)志物。外泌體通過內(nèi)體途徑分泌到細(xì)胞外空間,并將各種生物活性分子(貨物)轉(zhuǎn)運(yùn)至靶細(xì)胞。
磁珠免疫法分離外泌體:將針對目的抗原的抗體通過生物素-鏈霉親和素連接到磁珠表面,然后將磁珠與樣品共孵育,使外泌體特異性結(jié)合到磁珠上形成磁珠-外泌體復(fù)合物,再用蒸餾水或者PBS沖洗,結(jié)尾用甘氨酸-Tris-HCl溶液洗脫獲得外泌體。該方法相對于ELISA的好處主要是,珠粒提供了更大的表面積來捕獲外泌體,從而提高了分離效率。此外,使用磁珠時(shí),樣品起始體積沒有上限,而基于微孔板的ELISA分析的較大樣品體積為100μL,且ELISA洗脫雜質(zhì)時(shí)容易造成孔間交叉污染。當(dāng)將磁珠法與金標(biāo)準(zhǔn)外泌體分離方法進(jìn)行比較時(shí),磁珠法可分離出更純凈的外泌體,特異性高、速度更快,并且不需要昂貴的儀器。另外,與其他分離方法(如超速離心或超濾)相比,磁珠法不影響外泌體形態(tài)。但是采用磁珠法時(shí),外泌體生物活性易受PH和鹽濃度影響。外泌體不只可作為疾病診斷的生物標(biāo)志,而且可作為天然的藥物傳遞載體。外泌體rna提取步驟優(yōu)化
外泌體是內(nèi)源性和質(zhì)膜起源的不同類型的膜囊泡。研究所提取試劑盒服務(wù)
間充質(zhì)干細(xì)胞存在于骨髓、脂肪、臍血、牙髓、滑膜液等部位,是一種能夠自我更新的多功能干細(xì)胞。間充質(zhì)干細(xì)胞通過旁分泌的形式發(fā)揮其生理功能,而外泌體作為一種細(xì)胞間傳遞信息的介質(zhì),在間充質(zhì)干細(xì)胞的功能行使中發(fā)揮了重要作用。研究發(fā)現(xiàn)間充質(zhì)干細(xì)胞來源的外泌體能夠修復(fù)組織損傷、抑制中流生長和調(diào)節(jié)免疫響應(yīng),具有zhiliao心肌梗死、自身免疫疾病、阿爾茲海默癥等疾病的潛力。另外,也有研究顯示間充質(zhì)干細(xì)胞來源的外泌體會(huì)促進(jìn)某些中流生長。研究所提取試劑盒服務(wù)
上海宇玫博生物科技有限公司擁有一般項(xiàng)目:技術(shù)服務(wù)、技術(shù)開發(fā)、技術(shù)咨詢、技術(shù)交流、技術(shù)轉(zhuǎn)讓、技術(shù)推廣;生物基材料技術(shù)研發(fā);生物基材料銷售;五金產(chǎn)品批發(fā);電子元器件批發(fā);計(jì)算機(jī)軟硬件及輔助設(shè)備批發(fā);工藝美術(shù)品及收藏品批發(fā)(象牙及其制品除外);化工產(chǎn)品銷售(不含許可類化工產(chǎn)品);實(shí)驗(yàn)分析儀器銷售;環(huán)境保護(hù)設(shè)備銷售;電力電子元器件銷售;電子產(chǎn)品銷售;機(jī)械設(shè)備銷售;儀器儀表銷售;辦公用品銷售;塑料制品銷售;橡膠制品銷售;勞動(dòng)保護(hù)用品銷售。(除依法須經(jīng)批準(zhǔn)的項(xiàng)目外,憑營業(yè)執(zhí)照依法自主開展經(jīng)營活動(dòng))許可項(xiàng)目:貨物進(jìn)出口;技術(shù)進(jìn)出口。(依法須經(jīng)批準(zhǔn)的項(xiàng)目,經(jīng)相關(guān)部門批準(zhǔn)后方可開展經(jīng)營活動(dòng),具體經(jīng)營項(xiàng)目以相關(guān)部門批準(zhǔn)文件或許可證件為準(zhǔn))等多項(xiàng)業(yè)務(wù),主營業(yè)務(wù)涵蓋外泌體提取試劑盒,外泌體,外泌體檢測,外泌體提取。目前我公司在職員工以90后為主,是一個(gè)有活力有能力有創(chuàng)新精神的團(tuán)隊(duì)。公司業(yè)務(wù)范圍主要包括:外泌體提取試劑盒,外泌體,外泌體檢測,外泌體提取等。公司奉行顧客至上、質(zhì)量為本的經(jīng)營宗旨,深受客戶好評。一直以來公司堅(jiān)持以客戶為中心、外泌體提取試劑盒,外泌體,外泌體檢測,外泌體提取市場為導(dǎo)向,重信譽(yù),保質(zhì)量,想客戶之所想,急用戶之所急,全力以赴滿足客戶的一切需要。