外泌體(Exosome)是由細胞分泌而來的微小囊泡,直徑約為30-200nm,形態(tài)也呈現(xiàn)出多樣性。長鏈非編碼RNA(longnon-codingRNA)是一類轉(zhuǎn)錄本長度超過200nt、不編碼蛋白的RNA。近年來的研究表明lncRNA能在標(biāo)貫遺傳、轉(zhuǎn)錄及轉(zhuǎn)錄后水平上調(diào)控基因表達,參與了X染色體沉默、基因組印記以及染色質(zhì)修飾、轉(zhuǎn)錄jihuo、轉(zhuǎn)錄干擾、核內(nèi)運輸?shù)榷喾N重要的調(diào)控過程,與人類疾病的發(fā)生、發(fā)展和防治都有著密切聯(lián)系。lncRNA芯片對lncRNA進行功能研究也被更多的關(guān)注,通過設(shè)計不同的lncRNA探針,可以更加快速、高通量地篩選出疾病或特定生物學(xué)過程中差異表達的lncRNA和mRNA信息,找到lncRNA的靶基因位點深入分析調(diào)控機制。在從體液中提取外泌體后,體液可長期穩(wěn)定保存。江蘇CD9外泌體慢病毒
外泌體的形成始于細胞內(nèi)陷,成熟于多囊泡胞內(nèi)體,終于膜融合。細胞通過內(nèi)吞作用產(chǎn)生小囊泡,小囊泡融合形成早期胞內(nèi)體(earlyendosome),在多個蛋白的協(xié)同調(diào)控下,早期胞內(nèi)體出芽形成含有多個腔內(nèi)小囊泡的多泡體(multivesicularbodies,MVB),這個過程中這些腔內(nèi)小囊泡(intraluminalvesicles,ILVs)會裝載各種核酸和蛋白質(zhì)等分子,泡內(nèi)體較后在GTPase家族中RAB酶的調(diào)節(jié)下與細胞膜融合。隨后,這些小囊泡會被釋放到細胞外,稱為外泌體。外泌體是通過細胞內(nèi)吞細胞膜融合主動排除的物質(zhì),大小均勻,而微泡是由細胞直接出芽脫落生成,大小不均一。江蘇CD9外泌體慢病毒建立外泌體分離、表征以及效價測定的標(biāo)準(zhǔn)化方法將是外泌體作為診斷和診療用途之前需要解決的問題。
外泌體的提取分離方法:1、超速離心法(差速離心):超離法是較常用的外泌體純化手段,采用低速離心、高速離心交替進行,可分離到大小相近的囊泡顆粒。超離法因操作簡單,獲得的囊泡數(shù)量較多而廣受歡迎,但過程比較費時,且回收率不穩(wěn)定(可能與轉(zhuǎn)子類型有關(guān)),純度也受到質(zhì)疑;此外,重復(fù)離心操作還有可能對囊泡造成損害,從而降低其質(zhì)量。2、密度梯度離心:在超速離心力作用下,使蔗糖溶液形成從低到高連續(xù)分布的密度階層,是一種區(qū)帶分離法。通過密度梯度離心,樣品中的外泌體將在1.13-1.19g/ml的密度范圍富集。此法獲得的外泌體純度較高,但步驟繁瑣,耗時。
在當(dāng)代準(zhǔn)確醫(yī)療的大趨勢下,外泌體的發(fā)現(xiàn)和研究為肺病的早期診斷和醫(yī)治提供了嶄新的方向。外泌體在液體活檢中的巨大潛力可以為肺病患者的早期發(fā)現(xiàn)和早期診療提供可靠依據(jù)。根據(jù)種瘤來源的外泌體在肺病的發(fā)發(fā)展和侵襲轉(zhuǎn)移過程中的作用及相關(guān)機制的研究,臨床醫(yī)療人員可以針對不同的患者制定合適的醫(yī)治方案,以達到改善肺病患者生存率,延長肺病患者生存時間的目的。但是,針對外泌體的研究還存在諸多的問題有待廣大研究者解決,如:外泌體的純化及標(biāo)記方法、如何尋找外泌體的靶基因、外泌體的作用機制及信號通路等??偠灾?,外泌體的研究有著廣闊的前景,基于外泌體與肺病的研究,有望研發(fā)出能夠應(yīng)用于肺病臨床診斷和醫(yī)治的有效措施,造福更多的患者。外泌體內(nèi)主要含有核酸、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)等,可作為疾病診斷標(biāo)記物、調(diào)控靶細胞功能、參與細胞生物學(xué)活動等。
一類外泌體中常見的細胞質(zhì)蛋白是Rabs蛋白,是鳥苷酸三磷酸酶(GTPases,)家族的一種。它可以調(diào)節(jié)外泌體膜與受體細胞的融合,有文獻報道稱RAB4,RAB5和RAB11主要出現(xiàn)于早期以及回收的核內(nèi)體中,RAB7和RAB9主要出現(xiàn)于晚期的核內(nèi)體。現(xiàn)有大量的研究發(fā)現(xiàn)外泌體中含有40種RAB蛋白。除了RAB蛋白,外泌體中富含具有外泌體膜交換以及融合作用的膜聯(lián)蛋白(包括膜聯(lián)蛋白1、2、4、5、6、7、11等)。外泌體膜上富含參與外泌體運輸?shù)乃目缒さ鞍准易?、熱休克蛋白家族。其它一些外泌體中的蛋白包括多種的代謝類的酶、核糖體蛋白(RPS3)、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)因子(黑色素瘤分化相關(guān)因子,ARF1,CDC42,人類紅細胞膜整合蛋白,SLC9A3R1)、粘附因子、細胞骨架蛋白以及泛素等。外泌體的大小:外泌體的直徑約30-150nm。植物外泌體lncRNA芯片
外泌體在組織修復(fù)領(lǐng)域均起著重要的作用,并且可以作為很好靶向給藥系統(tǒng)。江蘇CD9外泌體慢病毒
外泌體的來源與特征:外泌體是一種存在于細胞外的多囊泡體,通過細胞內(nèi)吞泡膜向內(nèi)凹陷形成,其大小均一,直徑為40-100nm,密度為1.10-1.18g/mL。外泌體可由間充質(zhì)干細胞、淋巴細胞和肉瘤細胞等多種類型細胞主動分泌釋放。外泌體內(nèi)主要含有核酸、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)等,可作為疾病診斷標(biāo)記物、調(diào)控靶細胞功能、參與細胞生物學(xué)活動等。例如:含有miR-140-5p的滑膜間充質(zhì)干細胞來源外泌體(SMSC-Exo影響軟骨組織再生;骨髓間充質(zhì)干細胞來源外泌體攜帶的miR-196a可調(diào)節(jié)成骨細胞分化促進大鼠顱骨缺損的骨再生。江蘇CD9外泌體慢病毒
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